【摘要】：多種植物多糖用現(xiàn)代儀器進(jìn)行分離提取出來,并在動(dòng)物飼養(yǎng)試驗(yàn)中表現(xiàn)出了促進(jìn)動(dòng)物的生長、調(diào)控其機(jī)體免疫的效果。目前關(guān)于多糖的試驗(yàn)研究主要集中在單一多糖的效果試驗(yàn),但是單一多糖之間效果的比較,以及幾種多糖聯(lián)合使用對斷奶仔豬的腸道內(nèi)環(huán)境是否存在互作效應(yīng)鮮見報(bào)道。本試驗(yàn)以研究黃芪多糖,牛膝多糖,白術(shù)多糖單一或聯(lián)合添加對斷奶仔豬消化生理及免疫性能的影響。試驗(yàn)采用水煮醇沉并用微波輔助的方法提取了黃芪多糖、白術(shù)多糖和牛膝多糖等三種多糖,用硫酸蒽酮法測定這三種多糖的含量,并研究了其體外抑菌效果。選取256頭28日齡的杜長大三元雜交斷奶仔豬,隨機(jī)分為8個(gè)組,每組4個(gè)重復(fù),每個(gè)重復(fù)8頭豬。采用三因素兩水平試驗(yàn)設(shè)計(jì),飼糧中黃芪多糖的添加量為0和800 mg/kg,白術(shù)多糖的添加量為0和800 mg/kg,牛膝多糖的添加量0和800 mg/kg,試驗(yàn)共進(jìn)行28 d。研究了植物多糖對斷奶仔豬生產(chǎn)性能、血液生化指標(biāo)、小腸內(nèi)環(huán)境、腸道黏膜免疫、腸道物理屏障及相關(guān)轉(zhuǎn)運(yùn)載體的影響。試驗(yàn)采用三因素兩水平試驗(yàn)設(shè)計(jì),檢測不同植物多糖處理對小腸上皮細(xì)胞膜通透性、葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)載體、緊密連接因子、細(xì)胞發(fā)育相關(guān)因子以及NF-κB相關(guān)因子表達(dá)的影響。主要結(jié)果如下:(1)植物多糖的提取及抑菌效果黃芪多糖、白術(shù)多糖和牛膝多糖的含量分別為60.3%、60.1%和65.3%。黃芪多糖、白術(shù)多糖和牛膝多糖均對大腸桿菌、沙門氏菌和金黃色葡萄球菌有一定的抑菌效果。黃芪多糖對各種菌的抑菌效果為金黃色葡萄球菌枯草芽孢桿菌沙門氏菌大腸桿菌。白術(shù)多糖對各種菌的抑菌效果為金黃色葡萄球菌大腸桿菌沙門氏菌枯草芽孢桿菌。牛膝多糖的抑菌活性具有量效關(guān)系,抑菌作用的強(qiáng)弱關(guān)系為:金黃色葡萄球菌枯草芽孢桿菌大腸桿菌沙門氏菌。(2)植物多糖對斷奶仔豬生長性能及血液生化指標(biāo)的影響在斷奶仔豬飼糧中單獨(dú)或兩兩聯(lián)合飼喂黃芪多糖、牛膝多糖或白術(shù)多糖均有提高斷奶仔豬的日增重的趨勢(P0.05),三種多糖聯(lián)合使用能顯著提高斷奶仔豬日增重(P0.05),多糖組與對照組之間飼料轉(zhuǎn)化率無顯著差異(P0.05)。斷奶仔豬飼糧中單獨(dú)添加黃芪多糖,白術(shù)多糖,牛膝多糖均能顯著降低斷奶仔豬的腹瀉率(P0.05),多糖之間存在一定互作效應(yīng)。三種多糖均能降低斷奶仔豬血液中葡萄糖、尿素氮、總膽固醇、甘油三酯的含量降低血液中AST與ALT的活性,三種多糖對血液中葡萄糖的影響有增效效應(yīng)。多糖能顯著提高血清中總蛋白、高密度脂蛋白的含量,三種多糖聯(lián)用效果顯著。(3)植物多糖對斷奶仔豬腸道內(nèi)環(huán)境的影響植物多糖能顯著提高斷奶仔豬十二指腸、空腸和回腸的黏膜絨毛高度,提高絨腺比(P0.05),三種多糖聯(lián)用效果添加多糖組斷奶仔豬回腸V/C比值顯著提高(P0.05),各單一添加1中多糖組之間差異不顯著,三種多糖添加與兩兩添加及單一添加相比顯著提高了V/C比值。單獨(dú)或聯(lián)合添加多糖組斷奶仔豬回腸、直腸的pH值無顯著變化(P0.05),盲腸和結(jié)腸內(nèi)容物pH值顯著降低(P0.05),三種多糖聯(lián)合添加對盲腸內(nèi)容物有互作效應(yīng)。單獨(dú)或聯(lián)合添加多糖組斷奶仔豬盲腸內(nèi)容物總揮發(fā)性脂肪酸含量均顯著上升(P0.05),三種多糖聯(lián)合的斷奶仔豬盲腸內(nèi)容物總揮發(fā)性脂肪酸的含量顯著高于單獨(dú)多糖組(P0.05)。在斷奶仔豬飼糧中單獨(dú)或聯(lián)合添加植物多糖均能顯著提高腸道內(nèi)乳酸菌和雙歧桿菌的數(shù)量(P0.05),多糖兩兩組合組與單一添加組相比腸道內(nèi)乳酸菌和雙歧桿菌的數(shù)量有增加趨勢,但差異不顯著(P0.05),單獨(dú)或聯(lián)合添加多糖能顯著降低腸道中大腸桿菌的數(shù)量(P0.05)。(4)植物多糖對斷奶仔豬免疫性能及抗氧化性能的影響無論單一多糖、兩兩復(fù)合多糖還是三種多糖聯(lián)用均能顯著提高斷奶仔豬血清總抗氧化能力(P0.05),多糖組均能提高斷奶仔豬血清中GSH-PX含量,顯著降低斷奶仔豬血清中MDA的含量(P0.05),三種多糖聯(lián)用有高于一種多糖效果的趨勢。黃芪多糖、白術(shù)多糖和牛膝多糖均能顯著提高斷奶仔豬血清中IgA的含量,三種多糖聯(lián)用效果顯著高于單一多糖添加(P0.05)。三種多糖單獨(dú)或聯(lián)合添加對斷奶仔豬血清中IgM的含量均無顯著的影響,單一多糖對斷奶仔豬血清中IgG含量無顯著影響。三種多糖單一添加或聯(lián)用均提高了斷奶仔豬血清中細(xì)胞因子IL-2、IL-1β、TNF-α和IFN-γ的含量,單一多糖對斷奶仔豬血清中IL-6的含量無顯著影響,多糖兩兩聯(lián)合或三種多糖聯(lián)用均顯著提高了血清中IL-6的含量(P0.05)。黃芪多糖、白術(shù)多糖和牛膝多糖均能顯著提高斷奶仔豬腸道黏膜中SIgA的含量(P0.05),三種多糖聯(lián)用效果最顯著。三種多糖聯(lián)用均能顯著提高斷奶仔豬腸系膜淋巴結(jié)和腸道粘膜IL-2、IL-1β、IL-6、TNF-α和IFN-γ的基因表達(dá)量,兩種多糖聯(lián)用可顯著提高腸系膜淋巴結(jié)和空腸黏膜IL-2、TNF-α和IFN-γ的基因表達(dá)量(P0.05),對腸系膜淋巴結(jié)和腸黏膜IL-6和IL-1β基因的表達(dá)量無顯著影響。單一添加多糖對斷奶仔豬腸系膜淋巴結(jié)和腸黏膜上IL-2、IL-1β、IL-6基因表達(dá)量無顯著影響,顯著提高TNF-α和IFN-γ的基因表達(dá)(P0.05)。(5)植物多糖對斷奶仔豬腸道屏障的影響植物多糖組斷奶仔豬血清中DAO的活性、ET含量及D-乳糖的含量均顯著降低,且隨多糖組合增多有增效效應(yīng)。植物多糖能顯著提高斷奶仔豬腸道黏膜Occludin、claudin和ZO-1的基因表達(dá)量。單一添加黃芪多糖、白術(shù)多糖及牛膝多糖顯著提高斷奶仔豬腸道SGLT1的mRNA相對表達(dá)量(P0.05),對GLUT2 mRNA相對表達(dá)量有提高的趨勢,但差異不顯著(P0.05)。三種多糖兩兩聯(lián)用及三種多糖聯(lián)合使用能顯著提高斷奶仔豬腸道SGLT1和GLUT2 mRNA相對表達(dá)量(P0.05)。(6)植物多糖對仔豬小腸上皮細(xì)胞屏障保護(hù)功能影響的分子作用機(jī)制最小濃度60mg/L的白術(shù)多糖、黃芪多糖和牛膝多糖在35 h以上對IPEC-J2的細(xì)胞指數(shù)值影響與對照組均有極顯著差異(P0.01),三種多糖添加細(xì)胞跨膜電阻值(TEER值)有增加趨勢,黃芪多糖單獨(dú)添加或者三種多糖組合極顯著降低LPS作用下IPEC-J2堿性磷酸酶及麥芽糖酶活性(P0.01)。單一添加黃芪多糖、白術(shù)多糖及牛膝多糖顯著增加LPS作用下IPEC-J2細(xì)胞SGLT1、GLUT2 mRNA相對表達(dá)量(P0.05),而三種多糖聯(lián)合使用極顯著增加SGLT1、GLUT2 mRNA相對表達(dá)量(P0.01)。在基因轉(zhuǎn)錄水平上,單獨(dú)或聯(lián)合添加多糖組均能提高其ZO-1、Occludin mRNA的表達(dá)的水平(P0.05),而黃芪多糖與白術(shù)多糖聯(lián)合使用或者三種多糖聯(lián)合使用極顯著提高ZO-1、Occludin蛋白的表達(dá)(P0.01)。與對照組比較,黃芪多糖、白術(shù)多糖和牛膝多糖單一或聯(lián)合使用,均不能顯著提高IPEC-J2細(xì)胞內(nèi)PCNA和TGF-β表達(dá)量(P0.05)。添加黃芪多糖、白術(shù)多糖和牛膝多糖均能顯著增加NF-κB相關(guān)因子TLR4與MyD88 mRNA及蛋白表達(dá)水平(P0.01),單獨(dú)添加黃芪多糖極顯著增加NF-κB蛋白表達(dá)水平(P0.01)。由此可知黃芪多糖、牛膝多糖和白術(shù)多糖(單獨(dú)、兩兩或三者聯(lián)合)提取物,通過調(diào)控豬小腸葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)載體SGLT1、GLUT2,緊密連接蛋白Occludin、ZO-1表達(dá),降低LPS處理后IPEC-J2細(xì)胞膜的通透性,以維系IPEC-J2細(xì)胞的損傷修復(fù),且這種修復(fù)機(jī)制主要依賴于TLR/NF-κB信號通道的激活。本文通過“生長性能—腸道內(nèi)環(huán)境—腸道黏膜免疫與抗氧化性能—腸道物理屏障—體外環(huán)境模擬驗(yàn)證”的研究路線,發(fā)現(xiàn)植物多糖可提高斷奶仔豬的生產(chǎn)性能,調(diào)整由于斷奶應(yīng)激造成的內(nèi)分泌失調(diào)、免疫下降及腸道通透性下降造成的腸道損傷,維持?jǐn)嗄套胸i腸道黏膜屏障的完整。
【圖文】：

第四章 植物多糖對斷奶仔豬腸道內(nèi)環(huán)境的影響組之間相比空腸黏膜絨毛高度無顯著差異（P>0.05）。各多糖組斷奶仔豬空腸絨毛高度與對照組相比差異不顯著（P>0.05），但有下降的趨勢。與對照組相比，各多糖組顯著提高了空腸 V/C 比值（P<0.05），單一或兩兩添加多糖組之間相比差異不顯著（P>0.05），三種多糖聯(lián)合添加組與單一多糖組、PAM+ABP 組、APS+ABP 組相比顯著提高了空腸V/C 比值（P<0.05），與 PAM+APS 組之間差異不顯著（P>0.05）。添加多糖組斷奶仔豬回腸絨毛的高度顯著高于對照組（P<0.05），與對照組相比，APS+PAM 與三種多糖聯(lián)合組顯著降低了回腸隱窩的深度，其余各組之間差異不顯著（P>0.05），添加多糖組斷奶仔豬回腸 V/C 比值顯著提高（P<0.05），，各單一添加一種多糖組之間差異不顯著，三種多糖添加與兩兩添加及單一添加相比顯著提高了 V/C 比值。Control APSPAM

34圖 4-2 植物多糖對斷奶仔豬空腸形態(tài)的變化（H·E 染色，×100）Fig.4-2 Effect of botanical polysaccharides on mucosa epithelial morphology in jejunum of weanedpignets (H·E staining, ×100)
【學(xué)位授予單位】：湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：S828

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本文編號：2686157