【摘要】：鵝細(xì)小病毒(Goose parvovirus GPV)為細(xì)小病毒科的成員,主要侵害2至18日齡雛番鴨及雛鵝,且當(dāng)雛鵝感染GPV在1-4日齡間,病死率最高。本病于我國(guó),東南亞,歐洲等地均有學(xué)者報(bào)道發(fā)生。該病在鵝群及番鴨群內(nèi)傳播方式多樣,同時(shí)死亡率高。20日齡內(nèi)雛鵝高度易感,死亡率在90%以上。為進(jìn)一步了解YBLJ株GPV對(duì)東北白鵝的致病性,因此本次試驗(yàn)初步建立YBLJ株GPV強(qiáng)毒感染3日齡雛鵝的模型。首先將分裝保存的YBLJ株GPV稀釋為1.5×101PFU/mL、1.5×102 PFU/mL、1.5×103PFU/mL、1.5×104PFU/mL、1.5×105PFU/mL、1.5×106PFU/mL,對(duì)42只3日齡未經(jīng)免疫的東北白鵝進(jìn)行攻毒,分離飼養(yǎng),并設(shè)立陰性對(duì)照組。攻毒后第2日,雛鵝開(kāi)始出現(xiàn)不同程度GPV癥狀,攻毒后第3日最急性型感染雛鵝抽搐后死亡,病理剖檢后觀察各臟器病變,初步診斷為感染GPV死亡。攻毒后第5日,對(duì)全部雛鵝麻醉后采血,提取DNA后進(jìn)行GPV-VP3 PCR擴(kuò)增,從而確定最佳攻毒劑量。再對(duì)最佳劑量組肝臟、胰腺、盲腸、心臟、脾臟進(jìn)行組織PCR與免疫組化檢測(cè),通過(guò)比較不同臟器中GPV陽(yáng)性抗原分布,從而初步建立了 YBLJ株GPV免疫組化方法。結(jié)果顯示,對(duì)3日齡雛鵝按不同濃度攻毒后,出現(xiàn)不同程度的角弓反張、極度消瘦等典型GPV癥狀。雛鵝剖檢可見(jiàn)眼部、胸腺及內(nèi)臟部位均有不同程度病變。血液PCR結(jié)果表明,不同攻毒劑量的雛鵝,血液中GPV-VP3基因濃度不一,且攻毒劑量為1.5×106 PFU/mL為最佳攻毒劑量,組織PCR分別在心臟、肝臟、盲腸、脾臟中檢出GPV-VP3基因,而未在胰腺中檢出。病理學(xué)HE染色結(jié)果顯示,攻毒劑量為1.5×106PFU/mL雛鵝盲腸、心臟組織中均有炎性細(xì)胞浸潤(rùn),胰腺、脾臟、肝臟有不同程度的充血,提示雛鵝已初步開(kāi)始出現(xiàn)心包炎、滲出性腸炎的病理變化。免疫組化最佳條件為石蠟切片厚度為4μm,微波修復(fù)14min,一抗?jié)舛?:100,一抗反應(yīng)時(shí)間37℃、60min,DAB顯色4 min。免疫組化結(jié)果顯示,盲腸上皮細(xì)胞中GPV分布較為廣泛,而脾臟、肝臟、心臟血管內(nèi)可見(jiàn)明顯GPV分布,陽(yáng)性GPV抗原數(shù)量為“++”,顏色為黃色至棕色不等,但胰腺中未檢出GPV抗原,判定為“-”,表明本次試驗(yàn)YBLJ株GPV對(duì)雛鵝盲腸、肝臟、心臟、脾臟侵害更為嚴(yán)重。YBLJ株鵝細(xì)小病毒感染雛鵝動(dòng)物模型及免疫組化方法的初步建立,為后期進(jìn)一步針對(duì)YBLJ株GPV的體內(nèi)試驗(yàn)初步奠定基礎(chǔ),最終將為GPV的診斷與防治提供參考。
【圖文】：

結(jié)果逡逑毒（ＹＢＬＪ株）后雛鵝病變逡逑健康雛鵝與攻毒后第２日雛鵝進(jìn)行對(duì)比（見(jiàn)下圖），可見(jiàn)隔離詞養(yǎng)Ａ精神狀態(tài)良好，無(wú)ＧＰＶ特征性病變。接種ＧＰＶ劑量為１．５ｘｌ0２邋ＰＦＢ雙腳無(wú)力，體重減輕，開(kāi)始出現(xiàn)ＧＰＶ病變。接種ＧＰＶ劑量為１Ｌ的雛鵝Ｃ開(kāi)始出現(xiàn)頻頻甩頸，被毛稀疏的ＧＰＶ病變。接種ＧＰＶ０４邋ＰＦＵ／ｍＬ的雛鵝Ｄ開(kāi)始出現(xiàn)后肢劈叉，無(wú)法直立的ＧＰＶ病變。接１．５ｘｌ0５邋ＰＦＵ／ｍＬ的雛鵝Ｅ眼角開(kāi)始出現(xiàn)粘液分泌增多，，精神沉郁接種ＧＰＶ劑量為１．５ｘｌ0６邋ＰＦＵ／ｍＬ的雛鵝Ｆ開(kāi)始出現(xiàn)嚴(yán)重消瘦，以Ｖ病變。逡逑＂

圖３．４雛鵝組織ＧＰＶ－ＶＰ３邋ＰＣＲ擴(kuò)增逡逑．．－
【學(xué)位授予單位】：延邊大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：S858.33

【參考文獻(xiàn)】

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1 楊文學(xué);;小鵝瘟的防治與體會(huì)[J];畜禽業(yè);2015年04期

2 莊金秋;梅建國(guó);莫玲;姚春陽(yáng);沈志強(qiáng);;小鵝瘟病毒實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法研究進(jìn)展[J];水禽世界;2014年05期

3 李靜;孫保存;劉增輝;趙秀蘭;;2839例術(shù)中冰凍切片診斷與術(shù)后石蠟切片診斷的對(duì)比研究[J];天津醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2013年06期

4 趙文婧;魯承;杜秋明;高旭;高建偉;申峰勇;張穎;袁娜;房靖添;;小鼠抗鵝細(xì)小病毒VP3蛋白單克隆抗體的制備[J];動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2011年12期

5 高旭;張穎;魯承;;鵝細(xì)小病毒強(qiáng)毒YBLJ分離株的分離鑒定與vp3基因的進(jìn)化分析[J];中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào);2011年12期

6 高海靜;;小鵝瘟的流行特點(diǎn)及防治措施[J];獸醫(yī)導(dǎo)刊;2010年11期

7 王忠;叢艷峰;李玉玲;;小鵝瘟血清學(xué)和分子生物學(xué)診斷方法[J];黑龍江畜牧獸醫(yī);2009年01期

8 王永坤;田慧芳;;小鵝瘟的流行與有效防制措施[J];現(xiàn)代畜牧獸醫(yī);2007年01期

9 張玲娟;劉杰;成子強(qiáng);王桂花;刁秀國(guó);朱國(guó);;應(yīng)用組織芯片免疫組化法檢測(cè)ALV-J[J];中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào);2006年04期

10 劉復(fù)生;免疫組織化學(xué)[J];癌癥進(jìn)展;2004年03期

本文編號(hào)：2684632