發(fā)布時(shí)間：2020-05-27 19:09

【摘要】：藍(lán)舌病(Bluetongue,BT)是由藍(lán)舌病毒(Bluetongue virus,BTV)感染引起的一種非接觸性傳染病。該病被世界動(dòng)物衛(wèi)生組織(World Organisation for Animal Health)列為一種必須申報(bào)的烈性動(dòng)物傳染病。BTV主要感染羊、牛等反芻動(dòng)物。BTV通過庫蠓、伊蚊等昆蟲在反芻動(dòng)物之間傳播。構(gòu)成病毒外殼的VP2能夠誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生中和抗體;VP5能夠增強(qiáng)由VP2刺激機(jī)體產(chǎn)生的中和抗體滴度,可以用于病毒樣顆粒的裝配和基因工程疫苗的研究。本研究利用原核表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)了BTV1外殼蛋白VP5,又對(duì)其免疫原性進(jìn)行研究,為進(jìn)一步開展BTV VP5蛋白相關(guān)研究奠定了基礎(chǔ)。通過構(gòu)建原核重組質(zhì)粒pET-28a-VP5,并轉(zhuǎn)化BL21(DE3)感受態(tài)細(xì)胞。IPTG進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá),SDS-PAGE和Western-blot結(jié)果表明,重組VP5蛋白分子量約為62kDa,與預(yù)期一致。進(jìn)一步對(duì)誘導(dǎo)表達(dá)條件進(jìn)行優(yōu)化,結(jié)果表明用2×YT培養(yǎng)基、在IPTG濃度為0.4mmol/L、溫度為25℃、誘導(dǎo)表達(dá)6h時(shí)重組蛋白可溶性表達(dá)量最高。純化后的重組蛋白VP5分別以40μg/只和20μg/只免疫Balb/c小鼠,同時(shí)設(shè)置陰性對(duì)照。小鼠三免后ELISA檢測產(chǎn)生抗體的效價(jià),結(jié)果顯示效價(jià)最高能達(dá)到1:2.048×10~5;Dot-ELISA結(jié)果顯示VP5抗體能與BTV1病毒發(fā)生特異性反應(yīng)。本研究不僅為分析VP5提高VP2的免疫保護(hù)效果的作用機(jī)制提供了重要的實(shí)驗(yàn)材料,并且為進(jìn)一步研發(fā)多價(jià)亞單位疫苗和多肽疫苗奠定了基礎(chǔ)。
【圖文】：

1.2 BTV 雙鏈 RNA 基因組及結(jié)構(gòu)蛋白的分布圖構(gòu)蛋白要結(jié)構(gòu)蛋白 VP2、VP3、VP5、VP7。其中 BTV 血清型的主要決定因素，能夠誘導(dǎo)中附有關(guān)。缺少 VP2 的 BTV 不具有感染細(xì)胞清型的 VP2 核苷酸序列，發(fā)現(xiàn)它們之間存域差別，可以通過RT-PCR技術(shù)比較其血清型的 VP5 是 BTV 除 VP2 外的又一型特異性抗化作用與病毒致病力有關(guān)。VP5 存在于 BT蛋白，具有突出的三角狀結(jié)構(gòu)，構(gòu)成外衣保守，沒有明顯的變異區(qū)[39]。研究表明 VP此在研制疫苗時(shí)，VP5 和 VP2 的共同表達(dá)能效的 BTV 疫苗具有重要的意義[40]。 VP3 蛋白。VP3 蛋白具有疏水性，是 BTV

BTV 血清型中較為保守并且是一種型特異性抗原。NS1 和 NS2 蛋非結(jié)構(gòu)蛋白，這兩種蛋白在感染的細(xì)胞中具有很高的表達(dá)量。NS基因組區(qū)段更容易突變[43]；NS3/NS3A 蛋白翻譯后被送至細(xì)胞膜，膜中破壞細(xì)胞膜的穩(wěn)定性，，與 BTV 的致病力和病毒活力有關(guān)，還粒子的運(yùn)輸和釋放。目前尚不清楚非結(jié)構(gòu)蛋白 NS4 的功能[44]。BTV 的形態(tài)結(jié)構(gòu)及理化性質(zhì)TV 屬于呼腸弧病毒科環(huán)狀病毒屬 BTV 亞群，有 27 種血清型[45]。一個(gè)二十面體對(duì)稱結(jié)構(gòu)，沒有囊膜[46]。BTV 具有雙層蛋白衣殼[4即核心衣殼主要由 L3、S7 編碼的主要結(jié)構(gòu)蛋白 VP3、VP7 和由 L的次要結(jié)構(gòu)蛋白 VP1、VP4、VP6 構(gòu)成，與 BTV 病毒的復(fù)制有關(guān)。有 60 個(gè)類似三角狀的 VP2 凸起，外周圍繞著 120 個(gè) VP5 的球狀透蛋白。VP2 與中和抗體的產(chǎn)生有關(guān)，是 BTV 血清型特異性蛋白以增強(qiáng)中和抗體的產(chǎn)生，從而能夠提高疫苗的功效；VP3 和 VP7，均具有 BTV 抗原決定簇，對(duì) BTV 內(nèi)部結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定具有重要的
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：S852.65

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本文編號(hào)：2684004