【摘要】：吡蟲啉(Imidacloprid,IMI)是一種對煙堿結(jié)構(gòu)詳細分析而研發(fā)出來的新型高效殺蟲劑,是當今世界中使用最早以及最多的新煙堿類殺蟲劑。IMI因其活性高、殺蟲譜廣、殺蟲機制新穎、與傳統(tǒng)殺蟲劑無交互抗性等特點,在問世28年來,一直受國際市場青睞,然而,隨著IMI的廣泛應(yīng)用,它的毒性及其在環(huán)境中的危害逐漸受到人們的關(guān)注。有研究表明,IMI除了破壞害蟲中樞神經(jīng)系統(tǒng),還能通過氧化應(yīng)激,對其他非靶標生物的組織器官造成損傷。肝臟纖維化是肝臟對損傷的愈合反應(yīng),對炎癥損傷以及氧化應(yīng)激反應(yīng)的病理性修復。長期的氧化應(yīng)激、肝臟損傷快于愈合、內(nèi)環(huán)境發(fā)生改變以及炎性因子等持續(xù)高水平存在,使得肝臟長期表現(xiàn)慢性炎癥以及出現(xiàn)肝臟纖維化發(fā)生發(fā)展。因此,研究IMI引起肝臟炎癥及肝臟纖維化的潛在機制,并以此針對緩解IMI毒性作用具有重要的意義。木犀草素(Luteolin,Lut)是一種天然四羥基黃酮化合物,廣泛存在于各種食用植物和藥用植物中,木犀草素本身具有很強的生物活性,如抗腫瘤、抗氧化、抗炎癥、免疫調(diào)節(jié)等。本研究旨在探究Lut緩解IMI暴露誘發(fā)肝臟損傷的方法,包括肝臟炎癥和肝臟纖維化發(fā)展。我們通過IMI劑量依賴性試驗以及Lut干預試驗兩種途徑,根據(jù)IMI暴露以及Lut治療后鵪鶉機體的氧化應(yīng)激水平、肝臟炎癥和纖維化發(fā)展等情況,探討Lut是如何緩解IMI誘發(fā)的慢性炎癥過程和肝臟纖維化發(fā)展。試驗選用體重在90-105 g之間的健康鵪鶉,隨機分組(n=10),IMI劑量依賴性試驗是連續(xù)9周灌胃給予鵪鶉0、2、4、8 mg/kg/天的IMI,Lut干預試驗選用暴露IMI 6 mg/kg/天的鵪鶉進行,實驗全程自由飲水、采食,溫度控制在23-27℃,濕度保持在50%左右。試驗過程中每周測量鵪鶉體重、采食量以及活動狀況;使用血細胞計數(shù)板、Hb試劑盒探究IMI對紅白細胞以及血紅蛋白的影響;測量血清AST和ALT的活性以及TC和TG的含量,使用超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)試劑盒、丙二醛(Methane dicarboxylic aldehyde,MDA)試劑盒和谷胱甘肽(Glutathione,GSH)試劑盒檢測肝臟抗氧化水平;通過HE染色、馬松三色染色和油紅O染色觀察鵪鶉肝臟組織病理損傷變化;qPCR檢測生長轉(zhuǎn)移因子-β1(Transforming growth factor-β1,TGF-β1)、波形蛋白(Vimentin,VIM)、Ⅰ型膠原(Collagen I)、基質(zhì)金屬蛋白酶2(Matrix metalloproteinase2,MMP-2)、MMP-9、苯醌氧化還原酶(NAD(P)H quinone dehydrogenase 1,NQO1)、血紅素加氧酶1(Heme oxygenase1,HO-1)、白細胞介素-1β(Interleukin-1β,IL-1β)、IκB激酶α(Inhibitor of nuclear factor kappa-B kinaseα,IKKα)、白細胞介素-6(Interleukin-6,IL-6)和IKKβ的mRNA水平;Western blot檢測NF-κB、pNF-κB、Nrf2和TNF-α蛋白水平的表達。結(jié)果顯示:IMI劑量依賴性實驗中,隨著IMI劑量的增高,肝臟損傷增加,暴露于IMI的鵪鶉表現(xiàn)出更嚴重的氧化應(yīng)激水平,更高濃度的脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物MDA,以及低濃度的GSH水平和低活性的SOD。Lut干預IMI試驗顯示,通過Lut的干預,IMI治療組肝臟明顯好轉(zhuǎn),IMI治療組TNF-α、IL-1β、IL-6等炎癥因子的含量或基因表達量較IMI組顯著降低,TGF-β1、VIM和Collagen I等纖維化指標基因表達量顯著降低,MMP-2和MMP-9基因表達量顯著降低,表示由IMI誘導的肝臟炎癥、肝臟纖維化得到有效緩解,肝臟氧化損傷顯著減輕(P0.05)。Lut通過Nrf2途徑,促進Nrf2入核,增加NQO1和HO-1水平增加,有效降低NF-κB磷酸化,進而減少炎性因子以及TGF-β1的產(chǎn)生,從而緩解肝臟炎癥和纖維化的發(fā)展。綜上,Lut通過激活Nrf2信號通路,增強機體抗氧化能力,抑制了NF-κB的激活,減少炎性因子以及TGF-β1的產(chǎn)生,緩解肝臟炎癥和纖維化的發(fā)展,從而緩解IMI的肝臟毒性作用。本研究將Lut應(yīng)用于IMI誘導的畜禽肝臟炎癥及纖維化的防治提供實踐基礎(chǔ),保障畜禽健康養(yǎng)殖。
【圖文】：

東北農(nóng)業(yè)大學獸醫(yī)碩士學位論文t 通常以糖苷型或游離型存在于多種蔬菜和和洋蔥的葉子等[50]，其他如在金銀花、洋性4’，，5，7-四羥黃酮，分子量 286.23，呈黃溶劑。如圖 1-1，在 Lut 結(jié)構(gòu)中 3’4’位置各有一個羰基[52]，這種芳香族化合物的羰基與氧化反應(yīng)，在體內(nèi)起到抗氧化的作用。，糖基主要來源與葡萄糖、戊醛糖等碳水Lut 微溶于水，呈弱酸性，室溫下穩(wěn)定存生物效應(yīng)，從之前的研究中我們得知 Lut 有效的抗增殖作用，在試驗過程中，Lut

注：*表示與Control組相比差異顯著（p<0.05）。Note: *p<0.05, versus control group.圖 3-1 鵪鶉體重變化Fig. 3-1 Weight changes in QuailsI 誘導鵪鶉損傷模型試驗的體重變化 IMI 誘導鵪鶉肝臟損傷模型試驗開始前和結(jié)束較 Control 組顯著降低（p<0.05），但 IMI+Lut大（p<0.05）。
【學位授予單位】：東北農(nóng)業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：S858.39

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本文編號：2683971