【摘要】：雞大腸桿菌病是目前家禽養(yǎng)殖業(yè)中最常見的多發(fā)病。環(huán)境、應(yīng)激反應(yīng)或繼發(fā)病等多種因素均可以導(dǎo)致發(fā)病,臨床上治療多采用抗生素,導(dǎo)致耐藥菌株的產(chǎn)生,療效大不如前,同時對人類身體健康和生存環(huán)境造成惡劣影響。目前眾多臨床實踐和現(xiàn)代中藥藥理學(xué)研究證實,許多中藥在治療細(xì)菌性傳染病當(dāng)中發(fā)揮了積極的作用。然而,市場上的中獸藥種類繁多,部分中獸藥制劑的方劑缺乏中獸醫(yī)辨證理論依據(jù)。因此,本試驗通過不同途徑感染大腸桿菌的模型來觀察癥狀體征與中獸醫(yī)證候特點比較分析,建立雞大腸桿菌病的辨證標(biāo)準(zhǔn),為防治雞大腸桿菌病的中獸藥研發(fā)與臨床推廣提供理論依據(jù)。試驗一喉頭氣管接種雞大腸桿菌模型的建立與觀察通過預(yù)試驗發(fā)現(xiàn)喉頭氣管接種攻毒劑量為0.54×109 CFU/mL菌液0.5mL/只時,發(fā)病率能達(dá)到100%,死亡率為40%,癥狀病變與臨床自然發(fā)病基本一致,因此選用該劑量通過喉頭氣管接種進(jìn)行模型建立。攻毒后,觀察臨床癥狀和體溫變化,同時對血生化、組織病理切片和炎性因子相關(guān)指標(biāo)進(jìn)行檢測。結(jié)果:隨病情的發(fā)展,癥狀及組織器官病變也在不斷發(fā)生變化。在攻毒后12 h,以發(fā)熱癥狀為主,占存活雞群總數(shù)的100%,攻毒后36 h,有90%的存活雞表現(xiàn)出典型拉稀癥狀,攻毒后72 h,雞群體溫開始出現(xiàn)下降;剖檢發(fā)現(xiàn)攻毒后24 h病死雞出現(xiàn)滲出性心包炎;攻毒后48 h肝臟出現(xiàn)病變,邊緣充血壞死,攻毒后96 h后心包炎和肝周炎等典型病變檢出率達(dá)到100%,個別雞出現(xiàn)腎臟、脾臟腫大等病變;病理學(xué)觀察發(fā)現(xiàn),攻毒后12 h,肺部率先出現(xiàn)病變,進(jìn)而侵害心、腸、肝等組織器官;表明細(xì)菌由呼吸道侵入機(jī)體后,通過肺部進(jìn)入血液,進(jìn)而逐漸侵害機(jī)體的其他組織器官。血生化指標(biāo)發(fā)現(xiàn)ALT、AST和TBIL在24 h-36h出現(xiàn)顯著和極顯著升高(P0.05,P0.01),其中AST在攻毒后72 h開始降低;炎性指標(biāo)檢測發(fā)現(xiàn)血清中IL-1β表達(dá)量在攻毒后24 h出現(xiàn)升高,24h、36h、48h和72h差異顯著(P0.05),攻毒后72h恢復(fù)正常,TNF-α表達(dá)量在攻毒前期無明顯變化,在攻毒后96 h出現(xiàn)顯著升高(P0.05),表明在疾病發(fā)展的炎性反應(yīng)不斷加劇,肝功能受損嚴(yán)重。以上結(jié)果表明,通過喉頭氣管接種雞大腸桿菌,模擬自然感染途徑,可成功建立人工疾病模型,為人工建立雞大腸桿菌病模型和治療雞大腸病的中藥篩選提供參考。試驗二肌注模型的建立與觀察通過預(yù)試驗發(fā)現(xiàn)胸肌注射攻毒劑量為0.30×109 CFU/mL菌液0.5mL/只時,發(fā)病率達(dá)到100%,死亡率50%-70%左右,癥狀病變與臨床自然發(fā)病基本一致。攻毒后同上進(jìn)行相關(guān)指標(biāo)觀察,同時進(jìn)行血常規(guī)、菌血癥和肝臟觸片相關(guān)指標(biāo)檢測。結(jié)果:本模型癥狀和病變出現(xiàn)的時間點,均比喉頭氣管接種模型提前且更加嚴(yán)重。在攻毒后12 h出現(xiàn)發(fā)熱癥狀,24 h后發(fā)熱癥狀消失,持續(xù)時間比喉頭氣管接種模型減少12 h,部分雞體溫開始下降,比喉頭氣管接種模型提前36 h出現(xiàn);拉稀癥狀在攻毒后24 h出現(xiàn),比喉頭氣管接種模型提前12 h出現(xiàn),占存活雞群的比例高達(dá)85%;剖檢出現(xiàn)心包炎和肝周炎病變的時間點均比喉頭氣管接種模型提前12 h出現(xiàn),并在60 h,檢出率達(dá)到100%;組織切片觀察發(fā)現(xiàn)心、肝的病理變化出現(xiàn)的時間點也提前24 h。血常規(guī)檢查發(fā)現(xiàn)攻毒組的WBC總數(shù)在36 h顯著高于對照組(P0.05);在60 h、72 h、96 h、120 h和144 h極顯著高于對照組(P0.01);中性粒細(xì)胞(NEUT)數(shù)在攻毒后72 h出現(xiàn)升高,極顯著高于對照組(P0.01);血生化指標(biāo)和炎性因子檢測與喉頭氣管接種模型無顯著差異,以上指標(biāo)均反應(yīng)出細(xì)菌在侵入機(jī)體后,炎癥反應(yīng)在不斷加劇。試驗雞菌血癥檢測攻毒后在12 h檢出率最高達(dá)到87.5%;各時間段病死雞取肝臟組織觸片,均可觀察到致病菌,表明通過肌注途徑進(jìn)行攻毒,細(xì)菌可迅速進(jìn)入血液,引發(fā)菌血癥,大幅減少臨床的感染和發(fā)病周期。以上結(jié)果表明,肌注模型具有發(fā)病快、致病性強(qiáng)、所需劑量小且死亡率高等特點,缺乏臨床上自然感染發(fā)病的典型病程。試驗三雞大腸桿菌病最佳辨證方法為六經(jīng)辨證和衛(wèi)氣營血辨證。喉頭氣管接種模型的雞大腸桿菌病程按六經(jīng)辨證分析:在攻毒后6 h-18h,病雞主要表現(xiàn)為惡寒(扎堆、羽毛蓬松等)、高熱(80%以上病雞體溫升高℃以上,精神極度沉郁等),這與太陽-少陰病證相符;攻毒后18 h-24h,發(fā)熱癥狀雞僅占存活雞的33%,這與陽明病證向少陽病證傳變的主證微熱不退、寒熱往來相符;攻毒后24 h-36h,病雞群主要表現(xiàn)發(fā)熱雞逐漸減少,體溫下降雞逐漸增多,且有90%的病雞出現(xiàn)拉稀癥狀,這與太陰病證基本相符;攻毒后36 h-72h,與少陰主證惡寒、嗜睡和神昏相符,此時病在心腎;72 h以后與厥陰主證寒熱錯雜、神昏衰竭相符。按衛(wèi)氣營血辨證分析:攻毒后6 h-24h,與衛(wèi)分階段主證發(fā)熱相符,病在衛(wèi)分;攻毒后24 h-48h,與營分階段病邪入血,與營分階段主證神昏相符,病在營分;攻毒后48 h-72h,個別雞脾臟、腎臟腫大,血象分析中,肝功能嚴(yán)重下降,而血分病以神昏、肝腎病變?yōu)橹?病在血分。肌注模型組雞病程按六經(jīng)辨證分析:攻毒后6 h-12h,與太陽和陽明階段主證相符,病位為太陽傳入陽明;攻毒后12 h-24h,發(fā)熱癥狀雞僅占存活雞總數(shù)的8%,同時拉稀癥狀雞比例達(dá)到85%,因此病位辨為少陽傳入太陰病證;攻毒后24 h-72h,與少陰主證惡寒、嗜睡和神昏相符;攻毒后72 h,雞群體溫出現(xiàn)顯著下降,神昏衰竭且肝腎出現(xiàn)病變,病位在厥陰。按衛(wèi)氣營血辨證分析:攻毒后6 h-12h,與衛(wèi)分階段主證發(fā)熱相符,病在衛(wèi)分;攻毒后12 h-24h,營分階段病邪入血,主證神昏相符,病在營分;攻毒后24 h-72h,癥狀以體溫下降和嗜睡為主,占存活雞總數(shù)的80%以上,剖檢可見典型纖維素性心包炎和肝周炎,檢出率為100%,個別雞變現(xiàn)出脾腎腫大病變,而血分病以神昏、肝腎病變?yōu)橹?病入血分。本研究通過喉頭氣管接種和肌肉注射兩種途徑建立了雞大腸桿菌的人工模型,對兩種模型進(jìn)行了較為深入的對比分析,并通過六經(jīng)辨證和衛(wèi)氣營血辨證方法加以辨證,初步建立雞大腸桿菌病的人工疾病模型和辨證標(biāo)準(zhǔn)。
【圖文】：

２．２．５血清中炎性因子表達(dá)量變化逡逑２．２．５．１邋ＩＬ－ｉｐ表達(dá)量變化逡逑各時間點血清中ＩＬ－ｉｐ表達(dá)量變化見圖１－２。與對照組相比，攻毒組血清中ＩＬ－ｌｐ表逡逑達(dá)量在攻毒后２４邋ｈ、３６邋ｈ、４８邋ｈ顯著升高（Ｐ＜邋０．０１）

Ｆｉｇ邋１－２邋Ｃｈａｎｇｅｓ邋ｉｎ邋ｓｅｒｕｍ邋ＩＬ－ｉｐ邋ｃｏｎｔｅｎｔ邋ａｔ邋ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ邋ｔｉｍｅ邋ｐｏｉｎｔｓ逡逑２．２．５．２邋ＴＮＦ－ａ表達(dá)量變化逡逑各時間點血清中ＴＮＦ－ａ表達(dá)量變化見圖１－３。與對照組相比，攻毒組血清中ＴＮＦ－ａ逡逑表達(dá)量在攻毒后２４邋ｈ－７２邋ｈ無顯著變化（尸＞邋０．０５），攻毒后９６邋ｈ和１２０邋ｈ顯著升高（Ｐ邋＜逡逑０．０５）。逡逑１５０－Ｉ逡逑Ｉ邋Ｉ逡逑５０邋■邋■逡逑ＪｉｌｌＪｌｌ．逡逑圖１－３不同時間點血清中ＴＮＦ－ａ含量變化逡逑Ｆｉｇ邋１－３邋Ｃｈａｎｇｅｓ邋ｉｎ邋ｓｅｒｕｍ邋ＴＮＦ－ａ邋ｌｅｖｅｌｓ邋ａｔ邋ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ邋ｔｉｍｅ邋ｐｏｉｎｔｓ逡逑３討論逡逑臨床上禽流感、新城疫和傳染性支氣管炎等呼吸道疾病的發(fā)生通常伴隨著大腸桿菌逡逑混合感染或繼發(fā)性感染，導(dǎo)致呼吸道疾病呈綜合性癥狀，增加了治療成本和難度，，給養(yǎng)逡逑雞行業(yè)帶來嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失在自然環(huán)境中，雞大腸桿菌病主要被污染的飼料、飲逡逑水和空氣等，經(jīng)消化道和呼吸道傳播ｔｗ。本研宄團(tuán)隊曾采用飼料、飲水和口鼻等攻毒方逡逑
【學(xué)位授予單位】：揚(yáng)州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：S858.31

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本文編號：2683829