【摘要】：為明確過敏毒素C5a和C3a在小鼠感染和清除隱孢子蟲(Cryptosporidium)感染過程中的作用,本研究以微小隱孢子蟲(C.parvum)為研究對象,以BALB/c小鼠為感染模型,采用實時熒光定量PCR分析了C.parvum感染小鼠的小腸相關(guān)淋巴組織和脾臟中過敏毒素C3a、C5a及其相應(yīng)受體(C3aR和C5aR)的mRNA水平。結(jié)果顯示,在脾臟和小腸中,不僅過敏毒素C5a和C3a在感染后出現(xiàn)了顯著上調(diào)表達,其受體C5aR和C3aR的表達水平在感染后亦顯著上調(diào)表達(P0.05),并呈現(xiàn)動態(tài)變化。這些研究結(jié)果提示C5a/C5aR和C3a/C3aR信號參與了宿主抗微小隱孢子蟲感染的過程。
【圖文】：

１．４．５數(shù)據(jù)分析利用ＧｒａｐｈＰａｄ５．０采用Ｏｎｅ－ＷａｙＡＮＯＶＡ分析法對數(shù)據(jù)進行分析，Ｐ＜０．０５為差異顯著。２結(jié)果２．１Ｃ５ａ和Ｃ５ａＲ在小腸相關(guān)淋巴組織和脾臟中的表達變化提取的總ＲＮＡ經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳上檢測（圖１）質(zhì)量良好，能夠用于隨后的分析。感染Ｃ．ｐａｒｖｕｍ的ＢＡＬＢ／ｃ小鼠腸道相關(guān)淋巴組織（圖２Ａ、Ｂ）和脾臟（圖２Ｃ、Ｄ）中Ｃ５ａ和Ｃ５ａＲ的ｍＲＮＡ的表達水平顯著上調(diào)。在小腸相關(guān)淋巴組織中，Ｃ５ａ表達水平在６，２４，４８ｈ和７ｄ顯著上調(diào)（Ｐ＜０．０５），４８ｈ達到峰值（Ｐ＜０．０１）（圖２Ａ）；Ｃ５ａＲ亦在２４ｈ及７，２１ｄ的ｍＲＮＡ表達水平顯著上升（Ｐ＜０．０５），在２４ｈ達到峰值（圖２Ｂ）。在脾臟中，Ｃ５ａ的ｍＲＮＡ表達水平于感染后６ｈ（Ｐ＜０．０５）開始顯著升高，在感染后的１２，２４，７２ｈ及７，１４ｄ顯著高于對照組（Ｐ＜０．０５），，并在７２ｈ達到峰值（圖２Ｃ）；Ｃ５ａＲ的ｍＲＮＡ表達水平也在感染后１２ｈ及１４，２１ｄ顯著升高（Ｐ＜０．０５），并于感染后１４ｄ達到峰值（Ｐ＜０．０１）（圖２Ｄ）。圖１脾臟和小腸相關(guān)淋巴組織的總ＲＮＡ電泳圖１．脾臟總ＲＮＡ；２．小腸相關(guān)淋巴組織電泳圖；Ｍ．分子質(zhì)量標準２．２Ｃ３ａ和Ｃ３ａＲ在小腸和脾臟中的表達變化感染Ｃ．ｐａｒｖｕｍ的ＢＡＬＢ／ｃ小鼠腸道相關(guān)淋巴組織（圖３Ａ、Ｂ）和脾臟（圖３Ｃ、Ｄ）中Ｃ３ａ

４，４８ｈ和７，１４，２１ｄ均顯著上升（Ｐ＜０．０５），在６ｈ已達到峰值（Ｐ＜０．０１）（圖３Ｂ）。在脾臟中，Ｃ３ａ的ｍＲＮＡ表達水平于感染后的１２ｈ和７ｄ均顯著高于對照組（Ｐ＜０．０１），在１２ｈ達到峰值（Ｐ＜０．００１）（圖３Ｃ）；Ｃ３ａＲ的ｍＲＮＡ表達水平也于感染后６，１２，７２ｈ及１４，２１ｄ顯著升高（Ｐ＜０．０５），并于１４ｄ達到峰值，并在清除感染后（２１ｄ）仍然顯著上升（圖３Ｄ）。圖２Ｃ５ａ和Ｃ５ａＲ在Ｃ．ｐａｒｖｕｍ感染鼠小腸相關(guān)淋巴組織和脾臟中的表達情況Ａ．小腸相關(guān)淋巴組織的Ｃ５ａ；Ｂ．小腸相關(guān)淋巴組織的Ｃ５ａＲ；Ｃ．脾臟中的Ｃ５ａ；Ｄ．脾臟的Ｃ５ａＲ；注：＊代表Ｐ＜０．０５，＊＊代表Ｐ＜０．０１，＊＊＊代表Ｐ＜０．００１。下同３討論Ｃ．ｐａｒｖｕｍ是一種世界性分布的人獸共患寄生原蟲，嚴重威脅著人和家畜的健康。其感染會導(dǎo)致劇烈的水樣腹瀉，嚴重脫水甚至死亡［１６］，而未弄清Ｃ．ｐａｒｖｕｍ感染后宿主的免疫防御機理是現(xiàn)階段無法控制和預(yù)防隱孢子蟲病的主要原因。研究表明，Ｃ．ｐａｒｖｕｍ入侵機體后，機體自身的免疫效應(yīng)是清除Ｃ．ｐａｒｖｕｍ感染的關(guān)鍵，而先天免疫的發(fā)揮對于控制急性感染具有重要作用［１７］。補體是先天免疫的重要組成部分，它作為一組參與介導(dǎo)免疫應(yīng)答的具有酶活性的蛋白質(zhì)，存在于血液及其它組織液中，其活化時產(chǎn)生的過敏毒素Ｃ５ａ和Ｃ３ａ也廣泛分布于全身及局部感染部位，兩者又可通過與其受體Ｃ３ａＲ和Ｃ５ａＲ的相互作

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