【摘要】：[目的]在實(shí)驗(yàn)室之前的研究中,氟對于睪丸免疫的影響研究主要集中在氟對于睪丸血睪屏障的破壞上,也證明了氟可以引起睪丸炎癥,但對于其具體機(jī)制還不清楚。在實(shí)驗(yàn)室測序結(jié)果中,與氟中毒有關(guān)的免疫應(yīng)答通路有8條,其中白細(xì)胞介素-17A(IL-17A)在關(guān)節(jié)炎中的作用及IL-17信號占據(jù)前兩位,近年來IL-17A也是自身免疫性疾病的研究熱點(diǎn)。本實(shí)驗(yàn)以此為出發(fā)點(diǎn),探討氟對于小鼠睪丸中免疫細(xì)胞IL-17A分泌的影響,以及在這一點(diǎn)上與自身免疫性睪丸炎的相似之處。[方法]選取100只8周大健康BALB/c小鼠,隨機(jī)分為5組,每組20只,分別為對照組、低氟組、中氟組、高氟組與EAO模型組。通過飲水染氟的方式建立氟中毒模型,對照組與EAO模型組均給予去離子水,其余三組分別給予含有25、50、100mg/L NaF的去離子水,參考文獻(xiàn)方法利用皮下注射睪丸勻漿加弗氏佐劑的方式建立EAO模型。150d后斷頸處死,提取睪丸組織、睪丸間質(zhì)組織液和間質(zhì)組織細(xì)胞,通過雙重?zé)晒饧夹g(shù)檢測幾種免疫細(xì)胞分泌IL-17A的情況,采用ELISA、qRT-PCR方法分別檢測睪丸間質(zhì)組織液與睪丸間質(zhì)組織細(xì)胞中與IL-17A分泌有關(guān)的細(xì)胞因子蛋白及基因的表達(dá)量。[結(jié)果]1、HE結(jié)果表明,氟對于小鼠睪丸組織結(jié)構(gòu)造成了 一定程度破壞,導(dǎo)致了生精細(xì)胞的脫落與管間隙的增寬,而EAO組的情況則更為嚴(yán)重,二者所表現(xiàn)出的病理變化相似,但程度不同。2、ELISA結(jié)果發(fā)現(xiàn)在高氟組與EAO組IL-17A的表達(dá)量均顯著升高,雙重免疫熒光結(jié)果也證明了這一點(diǎn)。3、通過雙重免疫熒光技術(shù)檢測了睪丸中與IL-17A相關(guān)的四種免疫細(xì)胞,發(fā)現(xiàn)在氟暴露小鼠與EAO小鼠睪丸中均出現(xiàn)了四種炎癥細(xì)胞的浸潤,統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn)這四種免疫細(xì)胞的表達(dá)在各個氟處理組與EAO組呈現(xiàn)不同程度的增加。4、應(yīng)用ELISA技術(shù),檢測了睪丸間質(zhì)組織液中相關(guān)的細(xì)胞因子IL-6、IL-1β、TGF-β、IL-21、IL-23的含量,結(jié)果表明,相比對照組低氟組中TGF-β的表達(dá)量顯著上升,高氟組中IL-6、TGF-β的表達(dá)量顯著上升,EAO組IL-6、TGF-β、IL-21、IL-23的表達(dá)量顯著上升,這其中IL-6與TGF-β的表達(dá)量變化在高氟組與EAO組是相同的,而IL-1β的變化沒有顯著性差異。5、提取睪丸間質(zhì)組織細(xì)胞并鑒定后,通過qRT-PCR檢測間質(zhì)組織細(xì)胞中相關(guān)細(xì)胞因子的mRNA表達(dá)量。結(jié)果證明與對照組相比低氟組、中氟組IL-6的mRNA表達(dá)量顯著上升,高氟組與EAO組中IL-6、IL-1β、TGF-β、IL-21四個細(xì)胞因子mRNA表達(dá)量均顯著上升,此外,在高氟組中IL-23的mRNA表達(dá)量也顯著上升。[結(jié)論]與IL-17A相關(guān)的四種免疫細(xì)胞中,氟中毒小鼠與EAO模型小鼠有兩種細(xì)胞(巨噬細(xì)胞、CD3+T淋巴細(xì)胞)的變化是相同的,此外氟暴露小鼠與EAO模型小鼠無論在基因水平還是蛋白水平,幾種相關(guān)細(xì)胞因子的變化均具有一定相似性,可以說明氟中毒小鼠所產(chǎn)生的睪丸炎癥與自身免疫性睪丸炎具有一定相似性,這種相似性可能與氟中毒后導(dǎo)致Th17細(xì)胞與Treg細(xì)胞之間的平衡破壞有關(guān)。
【圖文】：

２．４小鼠股骨中氟含量的測定結(jié)果逡逑攻氟１５０ｄ后，低氟組、中氟組與高氟組小鼠股骨中的氟含量見圖１，由圖可見，逡逑與對照組相比，各個氟處理組均出現(xiàn)了顯著性變化，ＥＡＯ組無明顯變化。逡逑５邋４０００ｎ邐ｈ逡逑ｆ３０００－邐＿逡逑ｌ邋２０００逡逑Ｃｏｎｔｒｏｌ邋２５邐５０邐１００邋ＥＡＯ逡逑ＮａＦ（ｍｇ／Ｌ）逡逑圖１小鼠股骨中氟離子含量（ｎ＝７，ｍｅａｎ士ＳＥＭ，＊Ｐ＜０．０５，＊＊Ｐ＜０．０１）逡逑Ｆｉｇ．邋１邋Ｆｌｕｏｒｉｄｅ邋ｃｏｎｔｅｎｔ邋ｉｎ邋ｔｈｅ邋ｆｅｍｕｒ邋ｏｆ邋ｍｉｃｅ邋（ｎ＝７，邋ｍｅａｎ士ＳＥＭ，＊邋Ｐ＜０．０５，邋＊＊Ｐ＜０．０１）逡逑２．５睪丸病理學(xué)變化逡逑各組實(shí)驗(yàn)小鼠睪丸組織ＨＥ染色（４００ｘ）結(jié)果見圖２。從圖中可見：對照組（Ｆｉｇ．２Ａ）逡逑小鼠無生精細(xì)胞脫落，各級生精細(xì)胞排列整齊，層次清楚，基膜完整，管腔內(nèi)可見大量逡逑精子。與對照組相比，低氟組（ｎｇＪＢ）偶見生精細(xì)胞損傷脫落，排列不規(guī)則，但結(jié)構(gòu)逡逑基本完整，中氟組（Ｆｉｇ．２Ｃ）與高氟組（Ｆｉｇ．２Ｄ）可見睪丸間質(zhì)增多，，曲精細(xì)管和生精逡逑細(xì)胞腫脹，曲細(xì)精管間間隙變大，高氟組可見大量生精細(xì)胞脫落，生精上皮細(xì)胞層數(shù)減逡逑少

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【學(xué)位授予單位】：山西農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：S859.8

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6 朱慧e

本文編號：2681289