【摘要】：肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae)作為一種重要的條件性致病菌,能夠引起人類及豬、牛、羊、兔和其他經(jīng)濟類動物的感染,可導致呼吸系統(tǒng)、泌尿系統(tǒng)、泌乳系統(tǒng)炎癥和創(chuàng)傷感染,嚴重時甚至引起敗血癥、腦膜炎和胸膜炎。近年來由于抗生素的濫用,已經(jīng)導致該細菌耐藥性的大幅增強。迄今為止,國內外對于肺炎克雷伯菌在規(guī)�；i場中流行情況以及檢測方法的報道少之又少。本文通過采集吉林省部分規(guī)�；B(yǎng)豬場疑似感染肺炎克雷伯菌的病料,并對分離獲得的細菌進行形態(tài)學、生化試驗、16S rDNA分子生物學鑒定,對篩選出的肺炎克雷伯菌,進一步進行耐藥性、致病性、毒力基因檢測和莢膜型鑒定。并通過三種不同方法制備肺炎克雷伯菌抗原,建立肺炎克雷伯菌間接ELISA檢測方法,最后對吉林省部分規(guī)�；i場肺炎克雷伯菌血清抗體流行情況進行調查,以期對吉林省豬群養(yǎng)殖過程中對于該菌早期感染的診斷及防控提供一定的理論支持。1.豬源肺炎克雷伯菌的分離鑒定從吉林省部分規(guī)�；i場,采集疑似感染肺炎克雷伯菌的病料。通過形態(tài)學、生化試驗、16S rDNA分子生物學鑒定,共分離獲得14株肺炎克雷伯菌。通過對其進行抗生素耐藥性檢測,結果顯示:大部分菌株對β-內酰胺類藥物、氨基糖苷類藥物、四環(huán)素類藥物呈現(xiàn)較強的耐藥性。通過對其進行致病性及致病基因的檢測,結果顯示14株分離株,均攜帶Khe基因(100%),7株攜帶ramp基因(50%),wacG基因檢出率為0%。莢膜分型結果顯示:14株肺炎克雷伯菌中12株為莢膜型K 20型(85.71%),2株為K 1型(14.29%)。其中毒力最強株(編號為2)莢膜型為K 20型。2.間接ELISA方法的建立選擇毒力最強的2號菌株進行抗原的制備。采用三種不同抗原制備方法,通過方陣滴定試驗,確定抗原和血清的最佳濃度,隨后對血清作用時間、酶標抗體稀釋倍數(shù)和作用時間及底物作用時間進行優(yōu)化,并確定其臨界值,最后進行ELISA方法敏感性、特異性和穩(wěn)定性的檢測。結果顯示:以耐熱抗原建立的ELISA方法蛋白濃度為14.820 mg/mL,抗原最佳稀釋倍數(shù)為160倍、血清作用1.5 h、酶標抗體稀釋倍數(shù)為500倍且作用時間為1 h、酶標抗體稀釋倍數(shù)為500倍且作用時間為1 h時反應條件為最佳。通過公式計算其臨界值為0.610。且該方法敏感性、特異性和穩(wěn)定性良好,可以進行肺炎克雷伯菌血清抗體的檢測。3.吉林省部分規(guī)�；i場肺炎克雷伯菌血清流行病學調查基于前期建立的肺炎克雷伯菌間接ELISA檢測方法,對采集到的558份血清樣本進行檢測。結果顯示:肺炎克雷伯菌在吉林省規(guī)�；i場中血清抗體陽性率較高,總陽性率為30.46%(170/558)。從樣品采集地點來看,長春市規(guī)�；i場陽性率最高,陽性率為8.60%(48/558);其次為延吉市,陽性率為6.09%(34/558),公主嶺市最低,陽性率為1.61%(9/558);從采集樣品所處年齡階段來看,初生仔豬和經(jīng)產(chǎn)母豬肺炎克雷伯菌抗體血清陽性率最高,陽性率分別為12.19%(68/558)和14.70%(82/558);而育肥豬和后備母豬陽性率較低,陽性率分別為1.97%(11/558)和1.61%(9/558)。
【圖文】：

培養(yǎng) 24 h 后，，挑取單菌落進行純化培養(yǎng)。共獲得 14 株形態(tài)較為單一的細菌，依次編號為 1 號至 14 號。純化后細菌的表面光滑，濕潤，隆起，呈圓形菌落，見圖 1.1。1.3.2 細菌的鑒定1.3.2.1 形態(tài)學觀察結果革蘭氏鏡檢結果顯示，14 株分離得到的細菌在 10×100 倍光學顯微鏡下均為革蘭氏陰性桿菌，形態(tài)短小，兩段鈍滑，單個或兩兩相連，見圖 1.2。

培養(yǎng) 24 h 后，挑取單菌落進行純化培養(yǎng)。共獲得 14 株形態(tài)較為單一的細菌，依次編號為 1 號至 14 號。純化后細菌的表面光滑，濕潤，隆起，呈圓形菌落，見圖 1.1。1.3.2 細菌的鑒定1.3.2.1 形態(tài)學觀察結果革蘭氏鏡檢結果顯示，14 株分離得到的細菌在 10×100 倍光學顯微鏡下均為革蘭氏陰性桿菌，形態(tài)短小，兩段鈍滑，單個或兩兩相連，見圖 1.2。
【學位授予單位】：吉林農(nóng)業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：S852.61

【參考文獻】

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3 譚愛萍;鄧玉婷;姜蘭;吳雅麗;薛慧娟;王偉利;羅理;趙飛;;一株多重耐藥鰻源肺炎克雷伯菌的分離鑒定[J];水生生物學報;2013年04期

4 許惠;;肉牛肺炎克雷伯氏菌病的診治報告[J];中國奶牛;2012年14期

5 周鄭;任建安;張長樂;劉海燕;顧國勝;黎介壽;;泛耐藥肺炎克雷伯菌的致病力研究[J];中國感染與化療雜志;2012年01期

6 舒本富;陳開森;孫夢斯;;嬰兒重癥監(jiān)護室產(chǎn)ESBLs肺炎克雷伯菌感染相關因素分析[J];實驗與檢驗醫(yī)學;2011年05期

7 鄭念廣;譚實勇;何玲;夏芳;高娟;羅滿林;;副豬嗜血桿菌抗體間接ELISA檢測方法的建立與應用[J];中國畜牧獸醫(yī);2011年08期

8 劉燕;趙京;張成林;楊明海;原蕾;陳永林;;肺炎克雷伯氏菌致白頰長臂猿膿腫一例[J];野生動物;2011年03期

9 劉丹;王易;王莉新;;脂多糖是內毒素嗎?[J];微生物學通報;2010年06期

10 馮小明;儲岳峰;賀英;高鵬程;趙萍;郭晗;樊祜卿;逯忠新;;副豬嗜血桿菌抗體間接ELISA檢測方法的建立與應用[J];中國獸醫(yī)科學;2009年07期

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1 陸天宇;肺炎克雷伯菌感染的溯源研究[D];南京大學;2017年

2 張詩渝;肺炎克雷伯桿菌的分離鑒定及其對小鼠的致病性研究[D];南京農(nóng)業(yè)大學;2013年

3 劉娜;間接ELISA檢測副豬嗜血桿菌抗體方法的建立及初步應用[D];四川農(nóng)業(yè)大學;2008年

本文編號：2678835