【摘要】：甲磺酸達(dá)氟沙星(Danofloxacin mesylate,DFM)是一種常見(jiàn)的動(dòng)物專用氟喹諾酮類抗菌藥物,被廣泛用于動(dòng)物的疾病治療,也被用作促生長(zhǎng)劑在動(dòng)物飼料中添加使用。氟喹諾酮類藥物在臨床的使用中顯現(xiàn)了許多不良反應(yīng),大量研究表明氟喹諾酮類藥物的毒性與氧化損傷有關(guān)。DFM等動(dòng)物專用的氟喹諾酮類藥物在實(shí)際使用中存在著濫用、超劑量使用的現(xiàn)象。本試驗(yàn)通過(guò)研究DFM對(duì)小鼠肝臟組織結(jié)構(gòu)和抗氧化、脂代謝功能的影響,探究氟喹諾酮類藥物DFM可能的肝臟毒性及毒性機(jī)制。本試驗(yàn)將60只體重在25 g左右的6-7周齡健康小鼠隨機(jī)分為空白對(duì)照組、陰性對(duì)照組、低劑量組(DFM 50 mg/kg)、中劑量組(DFM 200 mg/kg)、高劑量組(DFM 800 mg/kg)五組,每組12只,雌雄各半。適應(yīng)性飼養(yǎng)一周后通過(guò)灌胃的方式給藥,連續(xù)灌胃35 d后采集小鼠的血液和肝臟組織。通過(guò)組織形態(tài)學(xué)的觀察,血清中肝臟特異性酶、肝臟中各項(xiàng)氧化指標(biāo)和脂質(zhì)含量的測(cè)定,肝臟中抗氧化和脂代謝相關(guān)基因表達(dá)的變化,研究DFM對(duì)小鼠肝臟組織結(jié)構(gòu)和功能的影響。1、DFM對(duì)小鼠肝臟組織結(jié)構(gòu)的影響試驗(yàn)通過(guò)對(duì)肝臟系數(shù)、血清中肝臟特異性酶酶活力的測(cè)定和肝臟組織形態(tài)的觀察,研究DFM對(duì)小鼠肝臟組織結(jié)構(gòu)的損傷作用。試驗(yàn)結(jié)果如下:(1)肝臟系數(shù)的變化:小鼠的肝臟系數(shù)隨DFM劑量的增加而逐漸增加。低劑量組、中劑量組、高劑量組小鼠肝臟系數(shù)均顯著高于空白對(duì)照組和陰性對(duì)照組(P0.05);中劑量組、高劑量組小鼠肝臟系數(shù)均顯著高于低劑量組(P0.05),中劑量組與高劑量組之間差異不顯著(P0.05)。(2)肝臟特異性酶活力的變化:小鼠血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶(glutamic pyruvic transaminase,GPT)和谷草轉(zhuǎn)氨酶(glutamic oxaloacetic transaminase,GOT)的活力隨DFM劑量的增加而增大,低劑量組、中劑量組、高劑量組中GPT、GOT活力均顯著高于空白對(duì)照組和陰性對(duì)照組(P0.05);低劑量組、中劑量組、高劑量組三個(gè)處理組之間均有顯著差異(P0.05)。(3)病理變化:小鼠進(jìn)行剖檢后發(fā)現(xiàn)中劑量組和高劑量組肝臟有著不同程度的充血和脂肪病變、質(zhì)地變脆,高劑量組尤為明顯。制作石蠟切片HE染色后鏡檢發(fā)現(xiàn),低劑量組的小鼠肝細(xì)胞體積變大,胞漿增多,小葉間充滿紅細(xì)胞;中劑量組的小鼠肝組織部分區(qū)域發(fā)生空泡化,肝細(xì)胞胞漿溶解嚴(yán)重,胞核被擠至一側(cè),炎性細(xì)胞增多;高劑量組的小鼠肝組織發(fā)生彌漫性空泡化、炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。結(jié)果表明,DFM對(duì)小鼠的肝臟組織造成了損傷,且隨劑量的增加損傷越明顯。損傷表現(xiàn)在肝臟系數(shù)、血清中GOT和GPT酶活力的升高、組織形態(tài)結(jié)構(gòu)的病理變化。其中高劑量的DFM可使肝臟組織結(jié)構(gòu)發(fā)生嚴(yán)重的脂肪病變和炎性細(xì)胞增多,破壞肝細(xì)胞的正常結(jié)構(gòu),引發(fā)空泡化。2、DFM對(duì)小鼠肝臟抗氧化功能的影響試驗(yàn)通過(guò)對(duì)超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase,SOD)、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(Glutathione peroxidase,GSH-Px)活力和丙二醛(Malondialdehyde,MDA)含量以及編碼SOD、GSH-Px的Sod、Gpx基因表達(dá)水平的測(cè)定,分析DFM對(duì)小鼠肝臟組織抗氧化功能的影響。試驗(yàn)結(jié)果如下:(1)抗氧化酶活力的變化:SOD和GSH-Px的活力隨DFM劑量的增加而降低。低劑量組、中劑量組、高劑量組的酶活力均顯著低于空白對(duì)照組和陰性對(duì)照組(P0.05),低劑量組與中劑量組差異不顯著(P0.05),中劑量組與高劑量組差異顯著(P0.05)。肝臟組織中MDA含量隨DFM劑量的增加而增加,低劑量組、中劑量組、高劑量組中MDA的含量均顯著高于空白對(duì)照組和陰性對(duì)照組(P0.05),低劑量組、中劑量組、高劑量組三個(gè)處理組之間差異顯著(P0.05)。(2)抗氧化基因表達(dá)的變化:Sod的表達(dá)隨著DFM劑量的增加而降低,Sod在低劑量組、中劑量組、高劑量組的表達(dá)均顯著低于空白對(duì)照組(P0.05),低劑量組與中劑量組間差異不顯著(P0.05),中劑量與高劑量間差異顯著(P0.05)。Gpx的表達(dá)隨著DFM劑量的增加先升高后降低,Gpx在低劑量組的表達(dá)顯著高于空白對(duì)照組(P0.05),中劑量組顯著低于低劑量組和空白對(duì)照組(P0.05),高劑量組顯著低于中劑量組(P0.05)。結(jié)果表明,DFM能夠引起小鼠肝臟組織發(fā)生氧化損傷,且發(fā)生損傷的程度隨DFM劑量的增加而加深。損傷表現(xiàn)在抗氧化酶基因表達(dá)的抑制、抗氧化酶活力的降低以及過(guò)氧化物產(chǎn)生的增加。其中高劑量的DFM嚴(yán)重抑制Sod、Gpx的表達(dá),降低抗氧化酶SOD、GSH-Px的活性,促進(jìn)過(guò)氧化物MDA的產(chǎn)生,嚴(yán)重影響小鼠肝臟的抗氧化功能。3、DFM對(duì)小鼠肝臟脂代謝功能的影響通過(guò)對(duì)肝臟中脂質(zhì)甘油三酯、膽固醇的含量及脂代謝相關(guān)基因Fas、Scd1、Acox1、Apob表達(dá)水平的測(cè)定,研究DFM對(duì)小鼠肝臟脂代謝功能的影響。(1)脂質(zhì)含量的變化:甘油三酯和膽固醇的含量隨DFM劑量的增加而增加,低劑量組、中劑量組、高劑量組中甘油三酯和膽固醇的含量均顯著高于空白對(duì)照組和陰性對(duì)照組(P0.05),低、中、高劑量組之間差異顯著(P0.05)。(2)脂代謝基因表達(dá)的變化:(1)Fas的表達(dá)隨著DFM劑量的增加而升高,低、中、高劑量組中Fas的表達(dá)均顯著高于空白對(duì)照組(P0.05),中劑量組與低劑量組之間無(wú)顯著差異(P0.05),高劑量組顯著高于中劑量組和低劑量組(P0.05);(2)Scd1的表達(dá)隨著DFM劑量的增加先升高后降低,低劑量組顯著高于空白對(duì)照組(P0.05),中劑量組與空白對(duì)照組無(wú)顯著差異(P0.05),高劑量組顯著低于空白對(duì)照組(P0.05),中劑量組顯著低于低劑量(P0.05),高劑量顯著低于低劑量組和中劑量組(P0.05);(3)Acox1的表達(dá)隨著DFM劑量的增加而降低,低、中、高劑量組中Acox1的表達(dá)均顯著低于空白對(duì)照組(P0.05),三個(gè)劑量組間差異顯著(P0.05);(4)Apob的表達(dá)隨著DFM劑量的增加而降低,低、中、高劑量組均顯著低于空白對(duì)照組(P0.05),三個(gè)劑量組間差異顯著(P0.05)。結(jié)果表明,DFM能夠影響小鼠肝臟的脂代謝功能,且影響程度與DFM的劑量呈正相關(guān)。影響表現(xiàn)在對(duì)脂肪酸合成相關(guān)基因Fas表達(dá)的促進(jìn),Acox1、Apob表達(dá)的抑制,影響肝臟中脂肪酸的合成、分解和脂質(zhì)的轉(zhuǎn)運(yùn),使肝臟中脂質(zhì)含量升高。
【圖文】：

第一章 文獻(xiàn)綜述機(jī)體的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)如糖類、脂肪和蛋白質(zhì)在氧化分解的過(guò)程中為機(jī)體提供能量，分解的過(guò)程需要各種氧化酶的催化才能進(jìn)行。氧化酶主要是需氧脫氫酶、不需氧脫氫酶和氧化酶。需氧脫氫酶在催化反應(yīng)時(shí)會(huì)把底物的氫脫掉并立即交給分子氧，從而生成過(guò)氧化氫。如黃嘌呤氧化酶、L-氨基酸氧化酶、D-氨基酸氧化酶和醛氧化酶。這些脫氫酶的輔基一般是黃素單核苷酸（FMN）和黃素腺嘌呤二核苷酸（FAD）等黃素酶類，生成過(guò)氧化氫的反應(yīng)如圖 1-3 所示。不需氧脫氫酶在氧化底物時(shí)以 NAD+、NADP+和 FAD 等為輔基，將底物的氫脫去，脫去的氫不直接與氧分子進(jìn)行反應(yīng)，而是進(jìn)入電子傳遞鏈中。氧化酶主要有電子傳遞鏈末端的細(xì)胞色素氧化酶，可以將細(xì)胞色素 C 氧化生成超氧陰離子自由基。

第一章 文獻(xiàn)綜述機(jī)體的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)如糖類、脂肪和蛋白質(zhì)在氧化分解的過(guò)程中為機(jī)體提供能量，分解的過(guò)程需要各種氧化酶的催化才能進(jìn)行。氧化酶主要是需氧脫氫酶、不需氧脫氫酶和氧化酶。需氧脫氫酶在催化反應(yīng)時(shí)會(huì)把底物的氫脫掉并立即交給分子氧，從而生成過(guò)氧化氫。如黃嘌呤氧化酶、L-氨基酸氧化酶、D-氨基酸氧化酶和醛氧化酶。這些脫氫酶的輔基一般是黃素單核苷酸（FMN）和黃素腺嘌呤二核苷酸（FAD）等黃素酶類，生成過(guò)氧化氫的反應(yīng)如圖 1-3 所示。不需氧脫氫酶在氧化底物時(shí)以 NAD+、NADP+和 FAD 等為輔基，，將底物的氫脫去，脫去的氫不直接與氧分子進(jìn)行反應(yīng)，而是進(jìn)入電子傳遞鏈中。氧化酶主要有電子傳遞鏈末端的細(xì)胞色素氧化酶，可以將細(xì)胞色素 C 氧化生成超氧陰離子自由基。
【學(xué)位授予單位】：西南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：S859.7

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2678836