【摘要】：貓杯狀病毒(Feline calicivirus,FCV)隸屬于杯狀病毒科、水皰疹病毒屬,是一種引起貓科動(dòng)物口腔與上呼吸道疾病的重要病原。FCV感染后臨床癥狀主要表現(xiàn)為口腔潰瘍、慢性口炎、鼻炎、結(jié)膜炎、肺炎等,也會(huì)引發(fā)潰瘍性皮炎、急性關(guān)節(jié)炎、腸炎、流產(chǎn)以及跛行等臨床癥狀。該病發(fā)病率較高,死亡率低,但部分毒株感染后死亡率也可達(dá)到30%以上。FCV呈世界性分布,在貓科動(dòng)物中具有高度傳染性,主要感染6~84日齡的幼貓。幼貓感染后,在口腔與上呼吸道增殖,引發(fā)上呼吸道炎癥,感染后14~18 d臨床癥狀減輕,但仍可通過唾液、鼻眼分泌物持續(xù)排毒,成為危險(xiǎn)的傳染源。由于FCV常與貓皰疹病毒1型、貓細(xì)小病毒混合感染,給該病的預(yù)防及治療造成了困難。目前該病預(yù)防仍以疫苗注射為主,但國內(nèi)尚無獲得臨床批件的自主研發(fā)疫苗,仍需依賴進(jìn)口商品化疫苗,已無法滿足國內(nèi)市場的需求。因此,有必要開展貓傳染性鼻-結(jié)膜炎疫苗的研究。本實(shí)驗(yàn)室前期已分離5株FCV毒株,并對(duì)其致病性與免疫原性進(jìn)行了比較。本研究選擇具有較強(qiáng)致病性與良好免疫原性的FCV CH-JL2株為種毒株,進(jìn)行滅活疫苗的制備及免疫效果評(píng)估。本研究首先進(jìn)行了FCV CH-JL2株動(dòng)物感染試驗(yàn),通過滴鼻方式以0.5mL劑量分別接種6~11周齡健康未免疫中華田園貓,接種效價(jià)分別為10~8.97.97 TCID_(50)/mL、10~(7.97)TCID_(50)/mL與10~6.97.97 TCID_(50)/mL。連續(xù)觀察14 d,通過對(duì)臨床癥狀、體溫、排毒情況、組織病理變化以及組織中病毒分布情況的觀察與監(jiān)測,評(píng)價(jià)其致病性。結(jié)果顯示,不同滴度的FCV CH-JL2分離株感染貓均可發(fā)病,發(fā)病率依次為100%、50%與25%。病毒滴度為10~8.97.97 TCID_(50)/mL時(shí),FCV感染貓5 d后開始排毒,出現(xiàn)體溫升高、鼻眼分泌物增多、口腔潰瘍等典型臨床癥狀。但在感染貓的肺臟、心臟、脾臟、氣管等全身組織臟器中均未檢測到FCV。由此說明,FCV CH-JL2分離株不屬于FCV VSD毒株,感染貓后僅可引起上呼吸道感染,不能造成全身感染。其次,進(jìn)行病毒滅活條件的篩選和疫苗制備。確定滅活條件為:病毒液加入體積分?jǐn)?shù)為0.2%甲醛,置22℃恒溫?fù)u床中(120 r/min)滅活48 h;將滅活后的FCV CH-JL2株病毒液與氫氧化鋁佐劑按9:1比例混勻,制備滅活疫苗。滅活疫苗經(jīng)理化性能檢測、無菌檢驗(yàn)、外源病毒檢驗(yàn)均為合格,無任何污染,注射貓無不良反應(yīng)。再次,通過皮下注射和肌肉注射兩種方式對(duì)試驗(yàn)貓注射1mL(10~(6.5)TCID_(50)/mL)FCV滅活疫苗。以臨床觀察及抗體含量監(jiān)測為判定標(biāo)準(zhǔn),篩選最佳免疫途徑。結(jié)果顯示,兩種免疫方法產(chǎn)生抗體含量無明顯差異,但皮下注射方法出現(xiàn)硬結(jié)概率更低,在實(shí)際操作中更為方便可控。第三,以皮下注射方式分別給試驗(yàn)貓注射1mL病毒含量為10~8TCID_(50)/mL、10~7TCID_(50)/mL、10~6TCID_(50)/mL的FCV滅活疫苗,第21 d進(jìn)行二次免疫。每7 d采集試驗(yàn)貓外周血進(jìn)行血清抗體含量檢測。二免后第21 d進(jìn)行動(dòng)物感染試驗(yàn),根據(jù)臨床癥狀與RT-PCR檢測結(jié)果,統(tǒng)計(jì)感染情況并篩選最佳免疫劑量。結(jié)果表明,滅活疫苗病毒滴度為10~8TCID_(50)/mL時(shí),保護(hù)率為100%(5/5),可提供較好且穩(wěn)定的保護(hù)。最后,對(duì)實(shí)驗(yàn)室制備170601批次滅活疫苗進(jìn)行單劑量及單劑量重復(fù)接種安全性試驗(yàn)、超劑量接種安全性試驗(yàn),接種后連續(xù)14 d定點(diǎn)測量試驗(yàn)動(dòng)物體溫,并進(jìn)行臨床觀察。結(jié)果表明,疫苗接種后各組試驗(yàn)貓?bào)w溫正常,精神狀態(tài)及食欲良好,全身未見不良反應(yīng)。說明滅活疫苗單劑量及單劑量重復(fù)接種、超劑量接種對(duì)均貓安全。本研究成功制備了FCV CH-JL2株滅活疫苗,經(jīng)理化性能檢測、無菌檢驗(yàn)、外源病毒檢驗(yàn)及效力和安全性評(píng)價(jià),質(zhì)量合格,安全性良好,具有較強(qiáng)免疫原性,為疫苗的進(jìn)一步研發(fā)提供數(shù)據(jù)參考。
【圖文】：

病毒粒子結(jié)構(gòu)

同時(shí)還會(huì)引發(fā)上呼吸道疾病，在舌側(cè)或口腔其他位置出現(xiàn)水泡，水泡隨即破裂形成潰瘍，并伴有紅腫，通常會(huì)出現(xiàn)口臭和流涎等癥狀。治療及時(shí)，，2~3 周就能痊愈。感染強(qiáng)圖.1.2 基因結(jié)構(gòu)Fig.1.2genetic structure
【學(xué)位授予單位】：吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：S859.53

【參考文獻(xiàn)】

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6 謝守玉;張健

本文編號(hào)：2678270