【摘要】：鴨坦布蘇病毒病是由鴨坦布蘇病毒(Duck Tembusu virus,DTMUV)引起的一種急性、接觸性新發(fā)傳染病。2010年,DTMUV首次在我國(guó)華東地區(qū)爆發(fā),隨后迅速蔓延至全國(guó)十幾個(gè)省市的禽養(yǎng)殖場(chǎng)。該病主要引起產(chǎn)蛋鴨的產(chǎn)蛋下降甚至停止,在肉鴨中主要表現(xiàn)為病毒性腦炎的癥狀,發(fā)病率90%以上,死亡率5-30%,給我國(guó)的養(yǎng)鴨業(yè)帶來(lái)了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。黃病毒E蛋白糖基化修飾可以影響到病毒的復(fù)制、跨種傳播和致病性,然而目前關(guān)于DTMUV E蛋白N154糖基化修飾在病毒復(fù)制、致病及引起宿主腦炎中的作用尚不完全清楚。本研究建立了DTMUV的反向遺傳系統(tǒng),構(gòu)建了DTMUV E蛋白N154糖基化位點(diǎn)的突變病毒,分析了E蛋白N154糖基化在DTMUV復(fù)制、致病性和病毒性腦炎形成中的作用,為研究DTMUV致病的分子機(jī)制和新型疫苗的開(kāi)發(fā)奠定基礎(chǔ)。主要內(nèi)容如下:1.E蛋白糖基化在DTMUV復(fù)制中的作用通過(guò)TCID_(50)實(shí)驗(yàn)測(cè)定DTMUV野生型病毒和E蛋白糖基化突變病毒在DEF和C6/36細(xì)胞上的生長(zhǎng)曲線,發(fā)現(xiàn)在DEF和C6/36細(xì)胞中E蛋白糖基化突變病毒的滴度顯著低于野生型病毒。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)消除E蛋白糖基化減弱了DTMUV在DEF和C6/36細(xì)胞上吸附、侵入和復(fù)制的能力,降低了DTMUV在DEF和C6/36細(xì)胞中裝配和釋放的效率。2.E蛋白糖基化在DTMUV誘導(dǎo)鴨神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞炎癥反應(yīng)中的作用分別將DTMUV E蛋白糖基化突變病毒和野生型病毒感染鴨神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞,通過(guò)相對(duì)qRT-PCR熒光定量發(fā)現(xiàn)消除E蛋白糖基化減弱了DTMUV誘導(dǎo)的TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-12等促炎細(xì)胞因子和IL-8、CCL5等趨化因子的表達(dá),提示消除E蛋白糖基化減弱了DTMUV誘導(dǎo)鴨神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞的炎癥反應(yīng)。3.E蛋白糖基化在DTMUV致病性中的作用感染試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)消除E蛋白糖基化顯著減輕了DTMUV感染鴨子的臨床癥狀,日增重降低減緩、死亡率顯著降低、病毒血癥減輕、腦、脾臟、肝臟和腎臟中的病毒載量顯著降低,表明E蛋白糖基化在DTMUV致病中發(fā)揮重要作用。4.E蛋白糖基化在DTMUV引起神經(jīng)毒性中的作用感染試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)消除E蛋白糖基化顯著減輕了DTMUV感染后鴨子的血管袖套、衛(wèi)星現(xiàn)象、噬神經(jīng)現(xiàn)象、膠質(zhì)細(xì)胞結(jié)節(jié)、炎性細(xì)胞浸潤(rùn)、腦膜增厚等病理變化,免疫組織化學(xué)觀察發(fā)現(xiàn)消除E蛋白糖基化顯著降低了腦組織中DTMUV的載量,表明E蛋白糖基化在DTMUV引起的神經(jīng)毒性中發(fā)揮著重要作用。5.E蛋白糖基化在DTMUV引起鴨腦部炎癥反應(yīng)中的作用分別取各試驗(yàn)組鴨子的腦皮層,通過(guò)相對(duì)qRT-PCR熒光定量發(fā)現(xiàn)消除E蛋白糖基化減弱了DTMUV誘導(dǎo)的TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-12等促炎細(xì)胞因子和IL-8和CCL5等趨化因子的表達(dá),提示E蛋白糖基化在DTMUV引起鴨腦部炎癥反應(yīng)中發(fā)揮重要作用。綜上所述,本研究首次揭示了E蛋白糖基化對(duì)DTMUV復(fù)制周期、致病性、神經(jīng)毒性以及誘導(dǎo)宿主神經(jīng)炎癥反應(yīng)的影響。對(duì)于我們更深入地理解DTMUV的致病機(jī)理具有重要意義,也將為抗DTMUV的疫苗設(shè)計(jì)及藥物篩選提供新的思路。
【圖文】：

鴨坦布蘇病毒病在中國(guó)華東地區(qū)首次爆發(fā)，并迅速建、江西、廣東、廣西、上海、江蘇、安徽、山東、河北、北京主要禽養(yǎng)殖場(chǎng)(Su et al 2011)，隨后有報(bào)道表明該病在馬來(lái)西亞和onnay et al 2014; Thontiravong et al 2015）。該病是由鴨坦布蘇病毒u virus, DTMUV）引起的一種禽類動(dòng)物急性發(fā)病的傳染病，主要鴨產(chǎn)蛋量急劇下降甚至停止，同時(shí)伴有食欲不振、精神沉郁、高熱現(xiàn)頭頸震顫、四肢麻痹、共濟(jì)失調(diào)等神經(jīng)癥狀，發(fā)病率高達(dá) 90%般在 5-30% (Cao et al 2011; Yan et al 2011)。DTMUV 幾乎可以感野鴨在內(nèi)的所有品種的鴨，也可以感染雞、鵝、麻雀和鴿子等(Hiu et al 2012a; Liu et al 2013; Tang et al 2012; Yun et al 2012a; 同時(shí) DTMUV 從多種蚊子體內(nèi)分離得到，，表明蚊子可能參與到程（Tang et al 2015），鴨坦布蘇病毒病為新發(fā)傳染病，目前還沒(méi)和藥物能有效預(yù)防和控制該病在我國(guó)的流行，給我國(guó)的養(yǎng)鴨業(yè)帶損失(Li et al 2016a; Li et al 2016b)。

圖 1-2 DTMUV 的形態(tài)結(jié)構(gòu)（Stiasny et al 2006）Fig.1-2 Morphological structure of DTMUV含瘟病毒屬、丙型肝炎病毒屬和黃病毒屬三個(gè)病毒屬，包括超過(guò) 70 種病毒。黃病毒屬大多數(shù)已和蜱）和脊椎動(dòng)物宿主之間水平傳播，包括黃熱病JEV）、西尼羅河病毒（WNV）、ZIKV（ZIKV）、D（TBEV）等重要的嚴(yán)重威脅人類健康的病原(B; Stiasny et al 2006)。DTMUV 是黃病毒科黃病毒態(tài)特征：病毒粒子為直徑 40-50nm 的球形結(jié)構(gòu)，衣殼包裹，核衣殼的外層包有表面有棘突的脂質(zhì)UV 的基因組特征不分節(jié)段的單股正鏈 RNA 病毒，其基因組全長(zhǎng)大碼區(qū)和中間唯一一個(gè)開(kāi)放閱讀框（ORF）組成，
【學(xué)位授予單位】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：S852.65

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本文編號(hào)：2671571