【摘要】：鴨坦布蘇病毒病是由鴨坦布蘇病毒(Duck Tembusu virus,DTMUV)引起的一種急性、接觸性新發(fā)傳染病。2010年,DTMUV首次在我國華東地區(qū)爆發(fā),隨后迅速蔓延至全國十幾個省市的禽養(yǎng)殖場。該病主要引起產(chǎn)蛋鴨的產(chǎn)蛋下降甚至停止,在肉鴨中主要表現(xiàn)為病毒性腦炎的癥狀,發(fā)病率90%以上,死亡率5-30%,給我國的養(yǎng)鴨業(yè)帶來了嚴重的經(jīng)濟損失。黃病毒E蛋白糖基化修飾可以影響到病毒的復制、跨種傳播和致病性,然而目前關于DTMUV E蛋白N154糖基化修飾在病毒復制、致病及引起宿主腦炎中的作用尚不完全清楚。本研究建立了DTMUV的反向遺傳系統(tǒng),構(gòu)建了DTMUV E蛋白N154糖基化位點的突變病毒,分析了E蛋白N154糖基化在DTMUV復制、致病性和病毒性腦炎形成中的作用,為研究DTMUV致病的分子機制和新型疫苗的開發(fā)奠定基礎。主要內(nèi)容如下:1.E蛋白糖基化在DTMUV復制中的作用通過TCID_(50)實驗測定DTMUV野生型病毒和E蛋白糖基化突變病毒在DEF和C6/36細胞上的生長曲線,發(fā)現(xiàn)在DEF和C6/36細胞中E蛋白糖基化突變病毒的滴度顯著低于野生型病毒。進一步研究發(fā)現(xiàn)消除E蛋白糖基化減弱了DTMUV在DEF和C6/36細胞上吸附、侵入和復制的能力,降低了DTMUV在DEF和C6/36細胞中裝配和釋放的效率。2.E蛋白糖基化在DTMUV誘導鴨神經(jīng)膠質(zhì)細胞炎癥反應中的作用分別將DTMUV E蛋白糖基化突變病毒和野生型病毒感染鴨神經(jīng)膠質(zhì)細胞,通過相對qRT-PCR熒光定量發(fā)現(xiàn)消除E蛋白糖基化減弱了DTMUV誘導的TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-12等促炎細胞因子和IL-8、CCL5等趨化因子的表達,提示消除E蛋白糖基化減弱了DTMUV誘導鴨神經(jīng)膠質(zhì)細胞的炎癥反應。3.E蛋白糖基化在DTMUV致病性中的作用感染試驗發(fā)現(xiàn)消除E蛋白糖基化顯著減輕了DTMUV感染鴨子的臨床癥狀,日增重降低減緩、死亡率顯著降低、病毒血癥減輕、腦、脾臟、肝臟和腎臟中的病毒載量顯著降低,表明E蛋白糖基化在DTMUV致病中發(fā)揮重要作用。4.E蛋白糖基化在DTMUV引起神經(jīng)毒性中的作用感染試驗發(fā)現(xiàn)消除E蛋白糖基化顯著減輕了DTMUV感染后鴨子的血管袖套、衛(wèi)星現(xiàn)象、噬神經(jīng)現(xiàn)象、膠質(zhì)細胞結(jié)節(jié)、炎性細胞浸潤、腦膜增厚等病理變化,免疫組織化學觀察發(fā)現(xiàn)消除E蛋白糖基化顯著降低了腦組織中DTMUV的載量,表明E蛋白糖基化在DTMUV引起的神經(jīng)毒性中發(fā)揮著重要作用。5.E蛋白糖基化在DTMUV引起鴨腦部炎癥反應中的作用分別取各試驗組鴨子的腦皮層,通過相對qRT-PCR熒光定量發(fā)現(xiàn)消除E蛋白糖基化減弱了DTMUV誘導的TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-12等促炎細胞因子和IL-8和CCL5等趨化因子的表達,提示E蛋白糖基化在DTMUV引起鴨腦部炎癥反應中發(fā)揮重要作用。綜上所述,本研究首次揭示了E蛋白糖基化對DTMUV復制周期、致病性、神經(jīng)毒性以及誘導宿主神經(jīng)炎癥反應的影響。對于我們更深入地理解DTMUV的致病機理具有重要意義,也將為抗DTMUV的疫苗設計及藥物篩選提供新的思路。
【圖文】：

鴨坦布蘇病毒病在中國華東地區(qū)首次爆發(fā)，并迅速建、江西、廣東、廣西、上海、江蘇、安徽、山東、河北、北京主要禽養(yǎng)殖場(Su et al 2011)，隨后有報道表明該病在馬來西亞和onnay et al 2014; Thontiravong et al 2015）。該病是由鴨坦布蘇病毒u virus, DTMUV）引起的一種禽類動物急性發(fā)病的傳染病，主要鴨產(chǎn)蛋量急劇下降甚至停止，同時伴有食欲不振、精神沉郁、高熱現(xiàn)頭頸震顫、四肢麻痹、共濟失調(diào)等神經(jīng)癥狀，發(fā)病率高達 90%般在 5-30% (Cao et al 2011; Yan et al 2011)。DTMUV 幾乎可以感野鴨在內(nèi)的所有品種的鴨，也可以感染雞、鵝、麻雀和鴿子等(Hiu et al 2012a; Liu et al 2013; Tang et al 2012; Yun et al 2012a; 同時 DTMUV 從多種蚊子體內(nèi)分離得到，，表明蚊子可能參與到程（Tang et al 2015），鴨坦布蘇病毒病為新發(fā)傳染病，目前還沒和藥物能有效預防和控制該病在我國的流行，給我國的養(yǎng)鴨業(yè)帶損失(Li et al 2016a; Li et al 2016b)。

圖 1-2 DTMUV 的形態(tài)結(jié)構(gòu)（Stiasny et al 2006）Fig.1-2 Morphological structure of DTMUV含瘟病毒屬、丙型肝炎病毒屬和黃病毒屬三個病毒屬，包括超過 70 種病毒。黃病毒屬大多數(shù)已和蜱）和脊椎動物宿主之間水平傳播，包括黃熱病JEV）、西尼羅河病毒（WNV）、ZIKV（ZIKV）、D（TBEV）等重要的嚴重威脅人類健康的病原(B; Stiasny et al 2006)。DTMUV 是黃病毒科黃病毒態(tài)特征：病毒粒子為直徑 40-50nm 的球形結(jié)構(gòu)，衣殼包裹，核衣殼的外層包有表面有棘突的脂質(zhì)UV 的基因組特征不分節(jié)段的單股正鏈 RNA 病毒，其基因組全長大碼區(qū)和中間唯一一個開放閱讀框（ORF）組成，
【學位授予單位】：華中農(nóng)業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：S852.65

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本文編號：2671571