【摘要】：目前,引發(fā)奶牛乳房炎隱性感染居多,其中木糖葡萄球菌是血漿凝固酶陰性葡萄球菌中一種,是引起奶牛乳房炎的病原菌之一,具有很強(qiáng)的生物被膜形成能力,其在機(jī)體內(nèi)可成為潛在感染源,引起機(jī)體對其免疫耐受和耐藥性的產(chǎn)生,使得乳房炎持久感染而不愈。因此尋找一種中藥干預(yù)其生物被膜的形成至關(guān)重要。紫丁香葉(Syringa oblata Lindl.)為木犀科丁香屬落葉灌木,是一種藥用價值高、副作用小和研究潛力大,在臨床上療效顯著的藥用植物,其有效成分易受到環(huán)境干預(yù)從而影響療效,紫丁香葉作為植物光合作用的場所,其體內(nèi)成分合成與光照強(qiáng)度具有一定關(guān)系,而蘆丁是紫丁香葉中干預(yù)豬鏈球菌生物被膜形成的主要藥效物質(zhì)基礎(chǔ)。因此,本試驗通過遮蔭調(diào)控自然光照強(qiáng)度,對紫丁香葉中以蘆丁為代表的黃酮類成分的合成路徑進(jìn)行研究,通過代謝組學(xué)和轉(zhuǎn)錄組學(xué)研究紫丁香葉應(yīng)對遮蔭脅迫的表達(dá)模式,以探討紫丁香葉黃酮類化合物的生物合成,以提高紫丁香葉中蘆丁含量。具體研究結(jié)果如下:(1)利用結(jié)晶紫染色法、高效液相色譜法(HPLC)和紫外分光光度計法(UV)研究蘆丁、2017年不同月份(5月~10月)和9月不同遮蔭(100%光照強(qiáng)度Z_0組、45%光照強(qiáng)度Z_1組和25%光照強(qiáng)度Z_2組)下紫丁香葉提取物對木糖葡萄球菌生物被膜的干預(yù)作用及紫丁香葉中蘆丁和總黃酮類化合物含量變化,結(jié)果表明0.8 mg/mL蘆丁能夠顯著干預(yù)木糖葡萄球菌ATCC 700404生物被膜形成(p0.05),同時與Z_0組紫丁香葉提取物相比,Z_1組紫丁香葉提取物干預(yù)木糖葡萄球菌ATCC 700404生物被膜形成(p0.05)能力最強(qiáng),蘆丁和總黃酮類化合物含量最高,通過組織化學(xué)定位法研究表明總黃酮類成分分布廣,說明遮蔭有利于提高植物中總黃酮類化合物成分,進(jìn)一步提高蘆丁含量。(2)利用LC-MS和RNA seq技術(shù)對Z_0和Z_1組紫丁香葉差異代謝物和差異基因進(jìn)行研究,結(jié)果表明紫丁香葉對光照脅迫的適應(yīng)是一個復(fù)雜的調(diào)控網(wǎng)絡(luò),其中包含黃酮類化合物生物合成途徑,通過對該途徑差異基因分析和實時熒光定量PCR驗證,結(jié)果表明4-香豆素-輔酶(4CL1,TRINITY_DN35155_c0_g1)、反式肉桂酸4-單加氧酶(CYP73A,TRINITY_DN29851_c0_g2)和類黃酮3'-單加氧酶(CYP75B1,TRINITY_DN31579_c2_g5)可能是調(diào)控紫丁香葉中蘆丁代謝物最相關(guān)的基因。綜上所述,在紫丁香葉遮蔭處理后,通過黃酮類化合物生物合成途徑調(diào)控,提高了總黃酮類化合物含量和蘆丁含量,加強(qiáng)了其干預(yù)木糖葡萄球菌生物被膜形成的能力,為紫丁香樹GAP種植及紫丁香葉再利用奠定理論基礎(chǔ)。
【圖文】：

3圖 1-1 植物中黃酮類化合物代謝途徑[33]igure 1-1 Flavonid metabolic pathway in plants[3體開始，由多種結(jié)構(gòu)基因和調(diào)節(jié)基因控制。苯丙氨酸氨裂解酶（PAL, Phenylalanine amm），經(jīng) 4-香豆素輔酶（4CL, 4-coumarate-CoA l-CoA ） ， 在 反 -肉 桂 酸 4-單 加 氧 酶 （ CYP生對香豆酰輔酶 A（p-Coumaroyl-CoA）[34]，，CoA 在查耳酮合酶（CHS, Chalcone synthase）genase）作用下形成二氫山奈酚（Dihydrokae反應(yīng)[35]。FLS, Flavonol synthase）催化形成蘆丁，同時roflavonol 4-reductase/flavanone 4-reductase）和此外，黃酮類化合物的合成還需要堿性螺旋-環(huán)通過結(jié)合于特定 DNA 序列來控制黃酮類化合

蘆丁對木糖葡萄球菌ATCC700404生物被膜的干預(yù)作用
【學(xué)位授予單位】：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：S853.7

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本文編號：2670681