發(fā)布時間：2020-05-17 14:58

【摘要】：在當今高度流動、相互依存和聯(lián)系密切的情形下,感染性疾病以非�？斓乃俣葌鞑�,對全球公共衛(wèi)生構成嚴重的威脅。除了研發(fā)抗感染新型藥物,有效監(jiān)控感染過程也是控制感染性疾病的關鍵。核酸適配體(aptamer)是通過指數(shù)富集配體系統(tǒng)進化技術(SELEX)從寡核苷酸文庫中篩選得到的一種單鏈寡核苷酸分子,它通過與靶分子特異性結合影響靶分子的生物活性和生物學功能。目前針對病原微生物的核酸適配體篩選和應用研究備受關注,它不僅應用于疾病的診斷,還在病原與宿主的相互作用研究中發(fā)揮了特定的作用。本研究建立了核酸適配體篩選和應用平臺,以番鴨細小病毒(MDPV)全病毒和水貂阿留申病毒(AMDV)VP2蛋白為靶標,篩選出了高親和力、特異性良好的核酸適配體,并分別建立了針對MDPV的Label-free金納米檢測方法和針對AMDV的雙夾心ELONA檢測方法。通過臨床樣品檢測,所建立的方法的特異性、敏感性、重復性良好。核酸適配體的抑制AMDV增殖活性結果表明,ADVa012在工作濃度達到4μM時抑制率可達47%,半衰期為31.68 h,且不會對CRFK細胞的增殖產生影響,結合位點分析結果顯示ADVa012與VP2蛋白結合的優(yōu)勢區(qū)域位于P4(aa397-aa474)區(qū)域。以上結果表明,本研究成功建立了針對不同靶標(全病毒和蛋白)的核酸適配體篩選技術平臺,成功篩選了 MDPV和AMDV VP2蛋白的核酸適配體,建立了基于核酸適配體的高靈敏檢測方法,也證明了篩選的ADVa012核酸適配體具有明顯的抗病毒作用。
【圖文】：

包括三步：（１）結合，靶標與寡核苷酸文庫結合；（２）分離，分離與逡逑靶標結合的序列；（３）擴增，將富集的序列進行擴增。最后獲得的擴逡逑增序列用于制備下一輪結合的次級庫，依次往復，如圖１．１所示。逡逑＊＊邋一一邋 一飛逡逑｜邐Ｃｌｏｎｅ邋ａｎｄ邐Ｎｕｃｌｅｉｃ邋ａｃｉｄ邐Ｔａｒｇｅｔ：逡逑ｓｅｑｕｅｎｃｅ邐ｌｉｂｒａｒｙ邐＾＾Ｓｍａｆｈｍｏｌｅｃｕｌｅｓ逡逑？邐■邐？邐＾邐ｓｓＤＮＡ邐Ｐｒｏｔｅｉｎｓ逡逑｜邐Ｉ邐Ｉ邐＼ｇ邐ＲＮＡ邐Ｖ邐Ｃｅｌｌｓ逡逑ｉ？ｊ邐Ｗ邐ＭｏｄＨｉｅｄ邋ＮＡｓ邐備逡逑�。蓿欤簦铮浚慑澹藉澹桑螅牛蹋牛兀斟义希ǎ洌幔模危粒╁澹纾澹ǎΓ玻板澹悖悖欤澹螅╁�§邋Ｕ逡逑：ｌｉＣ邋Ａ逡逑Ｉ邋Ｐｏｓ卜ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ邐丨邐Ｂｏｕｎｄ邐Ｕｎｂｏｕｎｄ逡逑｜邋ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ邐｜邐ａｐｌａｍｅｒｓ邐ａｐｔａｍｅｒｓ逡逑ｉ．邋邐邋邐邋邐邋邐邋Ｊ逡逑圖１．１邋ＳＥＬＥＸ篩選流程示意圖逡逑Ｆｉｇ．邋１．１邋Ｄｉａｇｒａｍ邋ｏｆ邋ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ邋ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ邋ｏｆ邋ｌｉｇａｎｄｓ邋ｂｙ邋ｅｘｐｏｎｅｎｔｉａｌ邋ｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔ邋（ＳＥＬＥＸ）逡逑２逡逑

包括三步：（１）結合，靶標與寡核苷酸文庫結合；（２）分離，分離與逡逑靶標結合的序列；（３）擴增，，將富集的序列進行擴增。最后獲得的擴逡逑增序列用于制備下一輪結合的次級庫，依次往復，如圖１．１所示。逡逑＊＊邋一一邋 一飛逡逑｜邐Ｃｌｏｎｅ邋ａｎｄ邐Ｎｕｃｌｅｉｃ邋ａｃｉｄ邐Ｔａｒｇｅｔ：逡逑ｓｅｑｕｅｎｃｅ邐ｌｉｂｒａｒｙ邐＾＾Ｓｍａｆｈｍｏｌｅｃｕｌｅｓ逡逑？邐■邐？邐＾邐ｓｓＤＮＡ邐Ｐｒｏｔｅｉｎｓ逡逑｜邐Ｉ邐Ｉ邐＼ｇ邐ＲＮＡ邐Ｖ邐Ｃｅｌｌｓ逡逑ｉ？ｊ邐Ｗ邐ＭｏｄＨｉｅｄ邋ＮＡｓ邐備逡逑�。蓿欤簦铮浚慑澹藉澹桑螅牛蹋牛兀斟义希ǎ洌幔模危粒╁澹纾澹ǎΓ玻板澹悖悖欤澹螅╁�§邋Ｕ逡逑：ｌｉＣ邋Ａ逡逑Ｉ邋Ｐｏｓ卜ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ邐丨邐Ｂｏｕｎｄ邐Ｕｎｂｏｕｎｄ逡逑｜邋ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ邐｜邐ａｐｌａｍｅｒｓ邐ａｐｔａｍｅｒｓ逡逑ｉ．邋邐邋邐邋邐邋邐邋Ｊ逡逑圖１．１邋ＳＥＬＥＸ篩選流程示意圖逡逑Ｆｉｇ．邋１．１邋Ｄｉａｇｒａｍ邋ｏｆ邋ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ邋ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ邋ｏｆ邋ｌｉｇａｎｄｓ邋ｂｙ邋ｅｘｐｏｎｅｎｔｉａｌ邋ｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔ邋（ＳＥＬＥＸ）逡逑２逡逑
【學位授予單位】：中國農業(yè)科學院
【學位級別】：博士后
【學位授予年份】：2018
【分類號】：S852.65

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本文編號：2668736