發(fā)布時間：2020-05-16 17:45

【摘要】：八十年代至今,人工授精技術在生豬育種和繁殖上的應用受到世界范圍的認可,為生豬產(chǎn)業(yè)的迅猛發(fā)展奠定了穩(wěn)固的基礎。在人工授精過程中,最為關鍵的是精液的品質,決定精液質量的主要因素是精液保存的方法。由于豬精子質膜磷脂中多不飽和脂肪酸(Polyunsaturate Fatty Acids,PUFAs)含量較高,使得豬精子對低溫和過氧化物自由基(Reactive Oxygen Species,ROS)相對敏感,針對豬精子成分這一特殊性,其保存過程的條件一般為常溫液態(tài)環(huán)境。在常溫保存過程中精子呼吸作用產(chǎn)生的過量ROS會造成精子頂體和質膜氧化損傷,降低精子活力和運動能力,致使精子死亡,導致精液保存質量和人工授精效果下降;同時,常溫保存的條件致使精液中細菌迅速滋生,同樣會造成精子死亡。綜上,精子氧化損傷和細菌污染是目前豬精液常溫保存過程中需要解決的主要問題。針對上述問題,本研究通過向豬精液常溫保存稀釋液(Beltsville Thawing Solution,BTS)中添加石榴提取物安石榴甙(Punicalagin,PN),檢測豬精液常溫保存過程中精子與精液微生物不同方面的變化并探究其潛在的作用途徑,以期減緩豬精液保存過程中產(chǎn)生的氧化應激、細菌感染并延長精液有效保存時間,同時為我國精液常溫保存稀釋粉的研發(fā)提供理論基礎。本研究主要獲得如下幾點結果:1.安石榴甙通過清除精液ROS含量,緩解氧化損傷,提高精子活力。通過向BTS中添加不同濃度(0、10、15、20μmol/L)的安石榴甙,豬精液常溫液態(tài)保存7天過程中,檢測發(fā)現(xiàn)10、15、20μmol/L的安石榴甙添加濃度下,精子活力、頂體完整性以及質膜完整性水平均顯著高于對照組(P0.05),其中15μmol/L的效果最為顯著(P0.01)。在保存的7天中,檢測發(fā)現(xiàn)10、15、20μmol/L的安石榴甙添加濃度下,精子中ROS和膜脂過氧化產(chǎn)物丙二醛(Malondialdehyde,MDA)含量顯著降低(P0.05)、精子總抗氧化能力(Total Antioxidant Capacity,T-AOC)顯著增強(P0.05),其中15μmol/L的效果最為顯著(P0.01)。2.安石榴甙能夠抑制豬精液中細菌的繁殖。通過檢測不同濃度的安石榴甙對豬精液中細菌繁殖的影響發(fā)現(xiàn),精液常溫保存7天中,15μmol/L安石榴甙添加組細菌繁殖數(shù)量顯著低于對照組(P0.05),同等安石榴甙添加濃度對精液中兩種優(yōu)勢菌種繁殖亦具有較強的抑制作用。3.安石榴甙通過激活精子AMPK通路,增加能量供給,從而增強其運動性能。通過活力檢測發(fā)現(xiàn),豬精液常溫液態(tài)保存7天中,安石榴甙添加組精子運動性能指標如快速前進行性運動率(Progressive,PRO)、平均直線運動速率(Straight Linear Velocity,VSL)、平均曲線運動速率(Curvilinear Velocity,VCL)和精子平均路徑速度(Average Path Velocity,VAP)顯著高于對照組(P0.05)。檢測發(fā)現(xiàn),精液常溫保存7天過程中,安石榴甙添加組ATP含量極顯著高于對照組(P0.01),線粒體呼吸鏈相關基因NRF-1、PGC-1的mRNA和蛋白表達量顯著上升(P0.05),AMPK磷酸化水平升高(P0.05),其中15μmol/L的效果最為顯著(P0.01)。綜上,本研究表明在豬精液常溫保存過程中添加15μmol/L安石榴甙,能夠通過提升抗氧化能力來緩解氧化損傷、抑制細菌繁殖以及激活AMPK通路增強運動性能等途徑,提高豬精液常溫保存質量。
【學位授予單位】：西北農(nóng)林科技大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：S828

【參考文獻】

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1 賴舒;周岐新;張穎;尚京川;于濤;;石榴皮鞣質對實驗性胃損傷的作用[J];中國中藥雜志;2009年10期

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本文編號：2667085