【摘要】：八十年代至今,人工授精技術(shù)在生豬育種和繁殖上的應(yīng)用受到世界范圍的認(rèn)可,為生豬產(chǎn)業(yè)的迅猛發(fā)展奠定了穩(wěn)固的基礎(chǔ)。在人工授精過(guò)程中,最為關(guān)鍵的是精液的品質(zhì),決定精液質(zhì)量的主要因素是精液保存的方法。由于豬精子質(zhì)膜磷脂中多不飽和脂肪酸(Polyunsaturate Fatty Acids,PUFAs)含量較高,使得豬精子對(duì)低溫和過(guò)氧化物自由基(Reactive Oxygen Species,ROS)相對(duì)敏感,針對(duì)豬精子成分這一特殊性,其保存過(guò)程的條件一般為常溫液態(tài)環(huán)境。在常溫保存過(guò)程中精子呼吸作用產(chǎn)生的過(guò)量ROS會(huì)造成精子頂體和質(zhì)膜氧化損傷,降低精子活力和運(yùn)動(dòng)能力,致使精子死亡,導(dǎo)致精液保存質(zhì)量和人工授精效果下降;同時(shí),常溫保存的條件致使精液中細(xì)菌迅速滋生,同樣會(huì)造成精子死亡。綜上,精子氧化損傷和細(xì)菌污染是目前豬精液常溫保存過(guò)程中需要解決的主要問(wèn)題。針對(duì)上述問(wèn)題,本研究通過(guò)向豬精液常溫保存稀釋液(Beltsville Thawing Solution,BTS)中添加石榴提取物安石榴甙(Punicalagin,PN),檢測(cè)豬精液常溫保存過(guò)程中精子與精液微生物不同方面的變化并探究其潛在的作用途徑,以期減緩豬精液保存過(guò)程中產(chǎn)生的氧化應(yīng)激、細(xì)菌感染并延長(zhǎng)精液有效保存時(shí)間,同時(shí)為我國(guó)精液常溫保存稀釋粉的研發(fā)提供理論基礎(chǔ)。本研究主要獲得如下幾點(diǎn)結(jié)果:1.安石榴甙通過(guò)清除精液ROS含量,緩解氧化損傷,提高精子活力。通過(guò)向BTS中添加不同濃度(0、10、15、20μmol/L)的安石榴甙,豬精液常溫液態(tài)保存7天過(guò)程中,檢測(cè)發(fā)現(xiàn)10、15、20μmol/L的安石榴甙添加濃度下,精子活力、頂體完整性以及質(zhì)膜完整性水平均顯著高于對(duì)照組(P0.05),其中15μmol/L的效果最為顯著(P0.01)。在保存的7天中,檢測(cè)發(fā)現(xiàn)10、15、20μmol/L的安石榴甙添加濃度下,精子中ROS和膜脂過(guò)氧化產(chǎn)物丙二醛(Malondialdehyde,MDA)含量顯著降低(P0.05)、精子總抗氧化能力(Total Antioxidant Capacity,T-AOC)顯著增強(qiáng)(P0.05),其中15μmol/L的效果最為顯著(P0.01)。2.安石榴甙能夠抑制豬精液中細(xì)菌的繁殖。通過(guò)檢測(cè)不同濃度的安石榴甙對(duì)豬精液中細(xì)菌繁殖的影響發(fā)現(xiàn),精液常溫保存7天中,15μmol/L安石榴甙添加組細(xì)菌繁殖數(shù)量顯著低于對(duì)照組(P0.05),同等安石榴甙添加濃度對(duì)精液中兩種優(yōu)勢(shì)菌種繁殖亦具有較強(qiáng)的抑制作用。3.安石榴甙通過(guò)激活精子AMPK通路,增加能量供給,從而增強(qiáng)其運(yùn)動(dòng)性能。通過(guò)活力檢測(cè)發(fā)現(xiàn),豬精液常溫液態(tài)保存7天中,安石榴甙添加組精子運(yùn)動(dòng)性能指標(biāo)如快速前進(jìn)行性運(yùn)動(dòng)率(Progressive,PRO)、平均直線運(yùn)動(dòng)速率(Straight Linear Velocity,VSL)、平均曲線運(yùn)動(dòng)速率(Curvilinear Velocity,VCL)和精子平均路徑速度(Average Path Velocity,VAP)顯著高于對(duì)照組(P0.05)。檢測(cè)發(fā)現(xiàn),精液常溫保存7天過(guò)程中,安石榴甙添加組ATP含量極顯著高于對(duì)照組(P0.01),線粒體呼吸鏈相關(guān)基因NRF-1、PGC-1的mRNA和蛋白表達(dá)量顯著上升(P0.05),AMPK磷酸化水平升高(P0.05),其中15μmol/L的效果最為顯著(P0.01)。綜上,本研究表明在豬精液常溫保存過(guò)程中添加15μmol/L安石榴甙,能夠通過(guò)提升抗氧化能力來(lái)緩解氧化損傷、抑制細(xì)菌繁殖以及激活A(yù)MPK通路增強(qiáng)運(yùn)動(dòng)性能等途徑,提高豬精液常溫保存質(zhì)量。
【學(xué)位授予單位】：西北農(nóng)林科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：S828

【參考文獻(xiàn)】

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1 賴舒;周岐新;張穎;尚京川;于濤;;石榴皮鞣質(zhì)對(duì)實(shí)驗(yàn)性胃損傷的作用[J];中國(guó)中藥雜志;2009年10期

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本文編號(hào)：2667085