【摘要】：無形體是胞內(nèi)寄生菌,可寄生在人或牛羊等宿主的血細(xì)胞、粒細(xì)胞內(nèi),導(dǎo)致宿主發(fā)熱,白細(xì)胞、粒細(xì)胞減少,多功能臟器衰竭,嚴(yán)重者導(dǎo)致死亡。蜱是無形體主要的媒介生物,在青海省活動(dòng)活躍,本實(shí)驗(yàn)對(duì)青海地區(qū)蜱種的分布情況與無形體攜帶狀況進(jìn)行調(diào)查研究。蜱的分類鑒定。2017年4-8月在青海省13個(gè)縣市用布旗法采集蜱,通過形態(tài)學(xué)并結(jié)合16S rRNA分子生物學(xué)方法鑒定蜱的分類。本研究共采集蜱1959只,分別屬于血蜱屬和革蜱屬,包括青海血蜱(H.qinghaiensis)1141只,銀盾革蜱(D.niveus)786只,野兔血蜱(H.leporispalustris)32只,青海血蜱占總數(shù)的58.24%,為優(yōu)勢(shì)蜱種。無形體巢氏PCR方法與熒光定量PCR方法的建立。分析無形體不同種GroEL基因序列,選取保守序列設(shè)計(jì)巢氏PCR與熒光定量PCR兩種引物,用巢氏陽(yáng)性模板構(gòu)建的標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)粒,建立檢測(cè)無形體病原的SYBR實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法,并對(duì)熒光定量PCR方法進(jìn)行敏感性、重復(fù)性、特異性三個(gè)方面進(jìn)行評(píng)價(jià)。結(jié)果表明,熒光定量PCR方法靈敏度高,可以最低檢測(cè)到1x10copies/μL的標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)粒,比巢氏PCR敏感10倍;變異系數(shù)均小于2%,重復(fù)性好;用陽(yáng)性模板與其他四種病原體做DNA模板,除了陽(yáng)性模板外其余都是陰性,特異性良好;建立的標(biāo)準(zhǔn)曲線斜率為-3.21,R~2=0.994,表明閾值與模板濃度的線性關(guān)系良好。青海蜱傳無形體分子流行病學(xué)調(diào)查。將同一地區(qū)的同一蜱種以10只為一管分裝,得到211管蜱樣本。使用熒光定量PCR檢測(cè)蜱樣本攜帶的無形體病原,檢測(cè)出45個(gè)無形體陽(yáng)性,感染率2.50%,大通縣無形體感染率最高6.44%,統(tǒng)計(jì)學(xué)分析不同地區(qū)與不同蜱種之間差異率P值均小于0.05,差異顯著,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。使用巢氏PCR擴(kuò)增出22個(gè)陽(yáng)性片段,感染率1.17%。核苷酸系統(tǒng)進(jìn)化分析表明本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)了14個(gè)牛無形體(A.bovis),與澳大利亞株K2425499同源性為99%,8個(gè)羊無形體(A.ovis),與CP015994、KJ410289、MG869402和MG383808同源性為95%,與這四株為姐妹枝,為青海地區(qū)的牛、羊無形體流行病學(xué)提供了數(shù)據(jù)基礎(chǔ)。
【圖文】：

本次采集的蜱種為青海血蜱、銀盾革蜱為長(zhǎng)的 1.6-1.8 倍，基突短粗，須肢長(zhǎng)約為寬的 1.4見圖 1.1）。圖 1.1 青海血蜱的背部與腹部Fig.1.1 The back and abdomen of H.qinghaiensis蜱為方形，長(zhǎng)寬相等，表面刻點(diǎn)明顯，基突發(fā)達(dá)，須肢顯，黑白分明。（見圖 1.2）。

0 μl 的 Buffer W1 加入吸附柱，12000 rpm 離心 1min，0 μl 的 Buffer W2（已加入無水乙醇）加入吸附柱，1，重復(fù)此步驟。0 rpm 空離 2min，將吸附柱放入備好的離心管中，，懸空雙蒸水（65℃水浴鍋熱浴好的），室溫下靜置 5 min，0℃保存?zhèn)溆�。序成功的重組質(zhì)粒送往庫(kù)美生物有限公司進(jìn)行測(cè)序。果鑒定結(jié)果蜱種形態(tài)學(xué)鑒定，本次采集的蜱種為青海血蜱、銀盾血蜱寬約為長(zhǎng)的 1.6-1.8 倍，基突短粗，須肢長(zhǎng)約為寬的 1斑（見圖 1.1）。
【學(xué)位授予單位】：吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：S852.7

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本文編號(hào)：2666680