【摘要】：奶牛乳房炎是嚴(yán)重危害奶牛養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展的三大疾病之一,其發(fā)病率高、流行面廣、傳染性強(qiáng)、危害性大。因此,有效控制奶牛乳房炎對(duì)提高奶牛生產(chǎn)性能、減少經(jīng)濟(jì)損失、促進(jìn)奶業(yè)持續(xù)健康發(fā)展起著至關(guān)重要的作用。目前臨床最多采取的治療方案仍為抗生素類藥物治療,該法在應(yīng)用初期雖然有效,而長(zhǎng)期應(yīng)用卻導(dǎo)致藥物殘留、細(xì)菌耐藥、容易復(fù)發(fā)等惡果。隨著人們對(duì)食品藥品安全意識(shí)的不斷增強(qiáng),以及中藥功效成分現(xiàn)代化分離與精制技術(shù)的高速迭代升級(jí),使得中藥天然產(chǎn)物以其高性價(jià)比和高安全性贏得了大眾的認(rèn)可。常規(guī)的給藥方式(口服、注射),常引起胃腸道刺激、肝臟首過效應(yīng)、順應(yīng)性差,使用不便等問題;而經(jīng)皮給藥是治療奶牛乳房炎更為直接、有效、安全,方便的給藥方式,但目前難以突破皮膚的角質(zhì)層屏障和生物利用度低的技術(shù)瓶頸,以至于市面上和科研領(lǐng)域均未見治療奶牛乳房炎的中藥提取物經(jīng)皮靶向給藥劑型。本研究旨在為治療奶牛乳房炎提供一種性能穩(wěn)定、安全效佳的靶向新劑型。研制出了具有抗菌、消炎、抗腫、鎮(zhèn)痛、抗病毒、抗真菌功效的苦參堿類生物堿(Sophora flavescens Ait.Alkaloids,SFAA)傳遞體凝膠劑,考察了其理化性質(zhì)、藥效、穩(wěn)定性、安全性,觀察了將其應(yīng)用于奶牛乳房炎的透皮靶向治療效果,并制定了質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)和說明書。本研究利用高效液相色譜儀,分別建立了用于制劑中苦參堿(MAT)和氧化苦參堿(OMT)含量檢測(cè)的分析方法;以逆向旋蒸法制備了SFAA傳遞體,應(yīng)用二次回歸正交旋轉(zhuǎn)組合設(shè)計(jì)優(yōu)化了其處方配比和工藝參數(shù);通過理化性質(zhì)檢測(cè)對(duì)其進(jìn)行質(zhì)量評(píng)價(jià):利用透射電子顯微鏡觀察其外觀形態(tài)、利用激光粒度儀檢測(cè)其粒徑和Zeta電位、檢測(cè)相對(duì)透膜速率以評(píng)價(jià)其變形性、應(yīng)用建立的HPLC檢測(cè)方法測(cè)定SFAA傳遞體的包封率;采用響應(yīng)面法優(yōu)化了SFAA傳遞體凝膠劑的制備工藝參數(shù):通過檢測(cè)體外藥物累積釋放度、累積透過量(Q_(24))、皮膚內(nèi)殘留量(Qs)和穩(wěn)態(tài)滲透速率(Js),評(píng)價(jià)其釋放性質(zhì)和透皮吸收效果;通過最低抑菌濃度試驗(yàn)(MIC)和最低殺菌濃度試驗(yàn)(MBC),評(píng)價(jià)其對(duì)引起奶牛乳房炎常見病原菌的抑殺效果;針對(duì)SFAA傳遞體凝膠劑的黏度、相對(duì)透膜速率和包封率的變化對(duì)其穩(wěn)定性進(jìn)行測(cè)試;通過皮膚刺激性試驗(yàn)、過敏性試驗(yàn)和急性毒性作用試驗(yàn)評(píng)價(jià)了SFAA傳遞體凝膠劑的安全性;針對(duì)隱性乳房炎,以SFAA傳遞體凝膠劑和萬乳康進(jìn)行了臨床對(duì)比試驗(yàn);針對(duì)臨床型乳房炎,以SFAA傳遞體凝膠劑和青鏈霉素進(jìn)行了臨床對(duì)比試驗(yàn),最后制訂了SFAA傳遞體凝膠劑質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)和說明書。相關(guān)研究結(jié)果如下:建立了一種快速測(cè)定SFAA傳遞體中主藥成分含量的HPLC分析方法,結(jié)果表明MAT和OMT分別在0.074~0.370μg·mL~(-1)和0.263~1.315μg·mL~(-1)內(nèi)峰面積與進(jìn)樣量線性關(guān)系良好。該方法重現(xiàn)性好、精密度和回收率高,為SFAA傳遞體的制備及其包封率的測(cè)算提供了快速定性定量的分析方法;制備SFAA傳遞體凝膠劑的最優(yōu)處方為磷脂質(zhì)量濃度2.75%,磷脂比3:1、1,2-丙二醇質(zhì)量濃度0.5%,水合時(shí)間34.4 min;透射電鏡觀察顯示:制備的SFAA傳遞體呈球形或橢球形,光滑且不黏連;平均粒徑為184.2±2.7 nm,分布均勻;Zeta電位為-47.4±2.3 mV,物理穩(wěn)定性較高;相對(duì)透膜速率為76.09±0.34%,RSD=1.00%,n=3,透過速率較高;MAT和OMT的包封率分別為80.43±0.98%和74.70±1.08%,包封效果較好;SFAA傳遞體凝膠劑的基質(zhì)處方最佳配比為凝膠基質(zhì)卡波姆質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.68%、促滲劑氮酮3.52%,保濕劑甘油3.56%,均勻透明、黏度適中、觸變性好。SFAA傳遞體凝膠劑的Q_(24)、Qs和Js分別是普通凝膠劑的2.22倍(P0.01)、5.27倍(P0.01)和1.51倍(P0.01),說明SFAA傳遞體凝膠劑更具緩釋效果;對(duì)大腸桿菌(E.coli)、金黃色葡萄球菌(S.aureus)、無乳鏈球菌(S.agalactiae)和停乳鏈球菌(S.dysgalactiae)的MIC分別為3.13 mg·mL~(-1)、6.25 mg·mL~(-1)、0.78 mg·mL~(-1)和0.78 mg·mL~(-1),MBC分別為6.25mg·mL~(-1)、6.25 mg·mL~(-1)、1.56 mg·mL~(-1)和0.78 mg·mL~(-1)。說明SFAA傳遞體凝膠劑具有良好的透皮吸收效果,對(duì)上述4種病原菌均有較強(qiáng)的抑/殺菌作用。該制劑在4℃或常溫25℃下可穩(wěn)定存放180 d,而在高溫40℃條件下包封率隨之下降較快,180 d下降了29.85個(gè)百分比。結(jié)果說明此制劑在低溫4℃或常溫25℃條件下穩(wěn)定性較高,可存放180 d。皮膚刺激性試驗(yàn)結(jié)果表明,高劑量組皮膚刺激程度平均積分值為0.3750.4,其他組別平均反應(yīng)值均為0,說明SFAA傳遞體凝膠劑低、中、高劑量組對(duì)完整皮膚或者破損皮膚均無刺激性;過敏性試驗(yàn)結(jié)果表明SFAA傳遞體凝膠劑致敏率為0;皮膚急性毒性試驗(yàn)結(jié)果表明各組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物均未出現(xiàn)任何異常反應(yīng)和死亡,SFAA傳遞體凝膠劑對(duì)大鼠的正常生長(zhǎng)無明顯影響(p0.05)。以上結(jié)果說明SFAA傳遞體凝膠劑無刺激性、無過敏性,且無毒性,外用安全。針對(duì)隱性乳房炎,SFAA傳遞體凝膠劑對(duì)奶牛隱性乳房炎的治愈率為86.67%,有效率為100%,治愈率比萬乳康對(duì)照組高20個(gè)百分點(diǎn);針對(duì)臨床型乳房炎,SFAA傳遞體凝膠劑對(duì)臨床型乳房炎的治愈率為73.33%,有效率為93.33%,治愈率比青鏈霉素對(duì)照組高6.66個(gè)百分點(diǎn)。SFAA傳遞體質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn):外觀性狀應(yīng)為球形或橢球形,光滑且不黏連;平均粒徑應(yīng)為180~190 nm;Zeta電位應(yīng)為-42~-50 mV;包封率應(yīng)為72%~77%;SFAA傳遞體凝膠劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn):外觀性狀應(yīng)為白色、半透明,均勻細(xì)膩、稍粘稠的膠體制劑;pH值應(yīng)為6.0~7.0;黏度應(yīng)為45~46 Pa·s;微生物限度:細(xì)菌數(shù)每1 g≤100 cfu,霉菌(Mold)和酵母菌(Yeast)每1 g≤100cfu,S.aureus和銅綠假單胞菌(P.Aeruginosa)每1 g不得檢出。
【圖文】：

30E F圖 3-1 各因素與指標(biāo)之間的響應(yīng)面 3D 效果圖Fig. 3-1 The 3D effect diagram of response surface between factors and indicatorsA B

31E F圖 3-2 各因素與指標(biāo)之間的等高線圖Fig. 3-2 The contour plot of factors and indicators3.2.3 最優(yōu)包封工藝?yán)米钏傧陆捣ㄟM(jìn)行最優(yōu)值預(yù)測(cè)，得到的最優(yōu)處方為：當(dāng) X1磷脂濃度（%）選擇 2.75 %，X2磷脂-膽固醇用量比選擇 3:1，X31,2-丙二醇濃度（%）選擇 0.5 %時(shí)，X4水合時(shí)間（min）選擇 34.4 min 時(shí)，Y（包封率）預(yù)測(cè)最大值為 81.77 %。通過工藝驗(yàn)證，按照最優(yōu)處方制備三批 SFAA 傳遞體，針對(duì)包封率進(jìn)行測(cè)定和計(jì)算，并計(jì)算偏差，，得出平均包封率為 81.15±1.63 %，較預(yù)測(cè)值略低，實(shí)驗(yàn)誤差小于 5 %，說明模型可靠。注：偏差/%=（預(yù)測(cè)值-實(shí)際值）/預(yù)測(cè)值×100 %。
【學(xué)位授予單位】：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：S859.53

【參考文獻(xiàn)】

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7 王sピ

本文編號(hào)：2653231