【摘要】：水貂是重要的毛皮用經濟動物,目前以人工養(yǎng)殖為主。我國水貂養(yǎng)殖量居世界第一位,其中山東省的養(yǎng)殖量占全國70%以上。伴隨取皮后而產生的大量水貂胴體及其內臟引起了國內廣泛關注,它們作為副產品的開發(fā)較少。由于國內外對水貂胴體成分尚缺乏科學的認識和加工技術,水貂胴體利用或處理十分混亂,它們有被養(yǎng)殖戶直接加工于飼料中用于其它毛皮動物的喂養(yǎng),也有被加工成“野味食品”,也有被深埋或丟棄處理的,這給生態(tài)環(huán)境以及毛皮動物養(yǎng)殖帶來了相當大的生物安全隱患。本研究旨在對取皮后水貂胴體及內臟組織中主要病原菌大腸桿菌、沙門氏菌、肺炎克雷伯氏菌和金黃色葡萄球菌開展調查研究,為水貂胴體及內臟組織生物安全評估和科學利用提供依據。首先根據大腸桿菌的phoA基因、沙門氏菌的invA基因、肺炎克雷伯氏菌khe基因和金黃色葡萄球菌的nuc基因的保守序列設計四對特異性引物,優(yōu)化反應體系和退火溫度,建立檢測四種病原的多重PCR方法,對其特異性、敏感性和穩(wěn)定性進行分析;收集山東省水貂主產區(qū)諸城、文登、聊城、日照、海陽等地區(qū)水貂胴體及內臟樣品,對其四種病原菌開展檢測;對陽性樣品中病原菌進行常規(guī)分離培養(yǎng)、生化鑒定。結果顯示,所研制的多重PCR方法能擴增出四種病原菌的核酸片段大小分別為:622?bp(大腸桿菌)、801?bp(沙門氏菌)、303?bp(肺炎克雷伯氏菌)和464?bp(金黃色葡萄球菌),對貂源魏氏梭菌、綠膿桿菌和鏈球菌等無特異性擴增;該方法對相應四種病原菌的靈敏度分別為1.0?pg/μL、10.0 pg/μL、10.0?pg/μL和1.0 pg/μL,且結果穩(wěn)定、重復性較好。用該方法對收集的268份水貂胴體及內臟組織檢測發(fā)現,四種致病菌的陽性檢出率為37.69%(101/268),其中大腸桿菌的檢出率為33.96%(91/268),肺炎克雷伯氏菌為2.61%(7/268),沙門氏菌為0.75%(2/268),金黃色葡萄球菌為0.37%(1/268),肺炎克雷伯氏菌和大腸桿菌雙重感染為2.61%(7/268)。陽性樣品中分離鑒定出83株大腸桿菌,2株沙門氏菌,7株肺炎克雷伯氏菌和1株金黃色葡萄球菌。以上結果表明,成功建立能夠特異檢測貂源大腸桿菌、沙門氏菌、肺炎克雷伯氏菌和金黃色葡萄球菌的四重PCR方法;四種病原菌在取皮后水貂胴體及內臟組織中存在不同程度的感染,其中大腸桿菌感染率最高。
【圖文】：

圖 1 單一 PCR 退火溫度的優(yōu)化Fig. 1 Amplification of single PCR under the condition of different annealing temperatureM, D2000 DNA maker；1, 52.0 ℃；2, 52.9 ℃；3, 53.8 ℃；4, 54.9 ℃；5, 56.0 ℃；6, 57.0 ℃；7, 58.1 ℃；8, 59.2 ℃；9,60.1 ℃；10, 61.0 ℃A.大腸桿菌；B.肺炎克雷伯氏菌；C.沙門氏菌；D.金黃色葡萄球菌；

圖 2 多重 PCR 退火溫度的優(yōu)化Fig. 2 Amplification of multiplex PCR under the condition of different annealing temperatureM, D2000 DNA maker；1, 52.0 ℃；2, 52.9 ℃；3, 53.8 ℃；4, 54.9 ℃；5, 56.0 ℃；6, 57.0 ℃；7, 58.1 8, 59.2 ℃；9, 60.1 ℃；10, 61.0 ℃
【學位授予單位】：山東農業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：S852.61

【參考文獻】

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本文編號：2648111