【摘要】：本研究從單增李斯特菌原噬菌體φ10403s特殊的可逆性主動溶源現(xiàn)象入手,從氧化-還原的角度,研究在液體培養(yǎng)基及巨噬細胞的吞噬體和細胞漿中,氧化和還原對單增李斯特菌毒力基因轉錄的影響,以及對原噬菌體φ10403s切離、再溶源和進入裂解循環(huán)的影響,探討氧化還原在維持噬菌體-胞內(nèi)菌-巨噬細胞三者之間生存平衡的作用,結果如下:(1)毒力基因在吞噬體和添加過氧化氫的培養(yǎng)基中轉錄上調(diào),證明氧化應激是誘導細菌毒力基因轉錄的環(huán)境因素之一;毒力基因在細胞漿和添加低濃度谷胱甘肽的培養(yǎng)基中轉錄水平也上調(diào),證明低濃度谷胱甘肽也具有誘導毒力基因轉錄的作用;而在添加高濃度谷胱甘肽的培養(yǎng)基中,毒力基因轉錄水平下調(diào),證明高濃度谷胱甘肽對毒力基因的轉錄有抑制作用。因此,有效打破氧化還原平衡,均影響單增李斯特菌毒力基因的轉錄。(2)氧化應激是誘導噬菌體切離的環(huán)境壓力之一,同時氧化應激還會誘使噬菌體進入裂解循環(huán)。(3)巨噬細胞中的GSH(還原型谷胱甘肽)和單增李斯特菌gshF基因合成的GshF抑制了吞噬體中切離下來的噬菌體進入裂解循環(huán),同時在細胞漿中誘導游離的噬菌體重新整合回細菌基因組中。因此,在巨噬細胞的吞噬體內(nèi),氧化應激誘導了細菌毒力的表達和原噬菌體的切離,增強了細胞空泡逃逸的生存能力,同時引起的抗氧化應激及時的抑制了游離噬菌體進入裂解循環(huán),保證了噬菌體-細菌在宿主細胞內(nèi)的共生,并在細胞漿中生長繁殖。
【圖文】：

株重復 3 次（3）平皿蓋朝上放置在 37℃溫箱內(nèi)，培養(yǎng) 16h，觀察各菌落圈的大小，以 LM10403S作為對照，測定各菌落圈的大小。2.3 結果與討論2.3.1 成功構建Δhly-LM、ΔgshF-LM 和Δhly-ΔgshF-LM 突變菌株（1）構建重組質(zhì)粒 pKSV7-hly LA- RA、pKSV7-gshF LA- RA 和回補質(zhì)粒pHAL-2-gshF將所有含有重組質(zhì)粒的菌株轉接抽質(zhì)粒后，得到的產(chǎn)物用雙酶切法驗證，結果如圖 2-1~2-3 所示，雙酶切后均得到兩條清晰的條帶：較大片段為線性化質(zhì)粒（pKSV7 為 7kbp，pHAL-2 為 6kbp），較小片段則是 LA-RA 基因（hly LA-RA 為2184bp，gshF LA-RA 為 1012bp）和 gshF 基因片段（2730bp）。所有的較小片段均經(jīng)過測序驗證，測序結果與模板基因組 100%匹配。

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【學位授予單位】：上海交通大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：S852.6

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本文編號：2646782