【摘要】：布魯氏菌病是由布魯氏菌引起的一種慢性人畜共患傳染病,呈全球性流行,該病既給畜牧養(yǎng)殖業(yè)帶來(lái)巨大經(jīng)濟(jì)損失,也給人的生命安全帶來(lái)了威脅。現(xiàn)有的布魯氏菌病診斷方法不能鑒別自然感染和疫苗免疫,相關(guān)研究具有重要意義。本研究從布魯氏菌S2疫苗全基因組序列中篩選出特有的、具有免疫原性的3個(gè)候選抗原基因并對(duì)其進(jìn)行生物信息學(xué)分析、重組表達(dá)和免疫原性鑒定;用重組蛋白S2RP2、S2RP3作為抗原,建立了羊種布魯氏菌感染與S2疫苗免疫感染的鑒別診斷方法,主要研究結(jié)果如下:(1)布魯氏菌S2疫苗S2JY1、S2JY2、S2JY3基因編碼產(chǎn)物均為非跨膜蛋白、無(wú)信號(hào)肽的親水性蛋白;S2JY1、S2JY3編碼產(chǎn)物為穩(wěn)定蛋白,S2JY2編碼產(chǎn)物為不穩(wěn)定蛋白;3個(gè)基因的編碼蛋白分別有7、19、15個(gè)抗原表位。(2)經(jīng)過(guò)SDS凝膠電泳檢測(cè),重組表達(dá)菌BL21(S2JY2)和BL21(S2JY3)均主要以包涵體的形式表達(dá),重組表達(dá)菌BL21(S2JY1)的表達(dá)量較低;用Ni+柱對(duì)重組蛋白S2RP2、S2RP3進(jìn)行了純化,獲得了較高純度的重組蛋白。(3)經(jīng)Western-Blot檢測(cè),重組蛋白S2RP2和S2RP3均與S2疫苗免疫血清反應(yīng),不與羊自然感染血清反應(yīng),具有較高的特異性和免疫原性。(4)以重組蛋白S2RP2、S2RP3作為抗原,建立了布魯氏菌iELISA鑒別診斷方法。重組抗原S2RP2、S2RP3的敏感性和特異性均達(dá)到95%以上,2種檢測(cè)抗原陽(yáng)性檢出率間無(wú)顯著差異(P≥0.05),說(shuō)明重組抗原S2RP2和S2RP3均可用于布魯氏菌S2疫苗免疫抗體的檢測(cè)。
【圖文】：

GYQMSETTRNMRRG（125～138），Y（140），LIEITHEDLRALT（153～165），G(172),KVENPADLVRPSTIAKFEPRDRALTPEEIGL （ 197 ～ 227 ），， MKRRNPHLV（280～288），S（308），DLPMSS（319～324）， QKEGQSLGKFG（339～349），TDWIEKCLAHEQKGVRAVYNKAEYRDQRRAML（368～399），MIDEWTIRKIRPKI（405～417）。2.2.1.3 蛋白跨膜區(qū)和信號(hào)肽預(yù)測(cè)應(yīng)用 TMHMM 預(yù)測(cè)跨膜區(qū)，結(jié)果圖 1、圖 2、圖 3 所示；利用 Signal P 軟件預(yù)測(cè)該蛋白的信號(hào)肽，結(jié)果圖 4、圖 5、圖 6 所示。S2JY1 Length: 145S2JY1 Number of predicted TMHs: 0S2JY1 Exp number of AAs in TMHs: 0.20874S2JY1 Exp number, first 60 AAs: 0.18349S2JY1 Total prob of N-in: 0.05987S2JY1 TMHMM2.0 outside 1 145

S2JY1 Number of predicted TMHs: 0S2JY1 Exp number of AAs in TMHs: 0.20874S2JY1 Exp number, first 60 AAs: 0.18349S2JY1 Total prob of N-in: 0.05987S2JY1 TMHMM2.0 outside 1 145圖 1 S2JY1 蛋白跨膜結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)Fig.1 The transmembarne domain analysis of S2JY1S2JY2 Length: 519S2JY2 Number of predicted TMHs: 0S2JY2 Exp number of AAs in TMHs: 0.00039S2JY2 Exp number, first 60 AAs: 0.00018S2JY2 Total prob of N-in: 0.00069S2JY2 TMHMM2.0 outside 1 519
【學(xué)位授予單位】：內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類(lèi)號(hào)】：S852.4

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2645673