發(fā)布時間：2020-04-29 04:02

【摘要】：烯丙孕素是一種人工合成的孕激素,在臨床上廣泛應(yīng)用于母豬與母馬的同步發(fā)情。烯丙孕素在動物機體內(nèi)達(dá)峰時間較短,吸收比較快,生物利用度高;但烯丙孕素毒性較低,在動物的可食性組織中殘留較少。本試驗通過對國產(chǎn)烯丙孕素口服液與進口同類藥的藥動學(xué)比較研究,得到相對生物利用度等主要藥動學(xué)參數(shù)。本研究不但對藥物處方挑選、制劑工藝評價有著指導(dǎo)意義,并且通過相關(guān)藥動學(xué)參數(shù)對預(yù)測烯丙孕素在食品動物的休藥期與臨床合理用藥也具備重要參考價值。1.建立血漿中烯丙孕素含量的UPLC-MS/MS測定方法血漿中烯丙孕素以液液萃取法提取,采用Inertsil C4(3.0×150 mm,5Pm)色譜柱和梯度洗脫,三重四級桿質(zhì)譜儀的多重反應(yīng)監(jiān)測(MRM)模式定量分析,采用內(nèi)標(biāo)法定量。流動相A:5mM甲酸銨水溶液,流動相B:乙腈,流速:0.4ml/min,進樣量:10YL。本研究建立的烯丙孕素檢測方法在1 ng/mL～100ng/mL的濃度范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系,相關(guān)系數(shù)均大于0.999 2。烯丙孕素在低、中、高三個濃度(1ng/mL、50ng/mL、100ng/mL)空白血漿添加樣品的批間回收率分別為93.1%±3.98%、92.7%±5.75%、88.9%±3.69%,日內(nèi)變異系數(shù)分別為3.50%～14.35%、3.43%～6.20%和2.88%%～4.15%,日間變異系數(shù)在5.11%～8.86%之間。本方法的檢測限(LOD)為0.5ng/mL,定量限(LOQ)為1ng/mL�；|(zhì)效應(yīng)對烯丙孕素的含量測定有增強作用,烯丙孕素在低濃度(1ng/mL)為114.65%,中濃度(50 ng/mL)為109.23%,高濃度(100 ng/mL)為113.59%。將處理后的待測樣品放在樣品室(4℃)8h的時間內(nèi),低、中、高三個濃度添加水平的變異系數(shù)均小于11%,表明烯丙孕素在樣品室測定時間內(nèi)有較高的穩(wěn)定性。將待測樣品循環(huán)凍融3次后,低、中、高三個濃度添加水平的變異系數(shù)均小于9%,表明經(jīng)過3個循環(huán)凍融后,血漿樣品中烯丙孕素仍具有較高的穩(wěn)定性。本方法適用于準(zhǔn)確檢測豬血漿中烯丙孕素的含量。2.兩種烯丙孕素口服液在母豬體內(nèi)藥動學(xué)比較研究采用交叉實驗設(shè)計,將8只體重接近的后備母豬隨機分成兩組,每組4只。第一階段:第一組4只豬單劑量經(jīng)口灌服國產(chǎn)烯丙孕素口服液受試品,第二組4只豬經(jīng)口灌服烯丙孕素口服液參比品;第二階段:第一組4只豬經(jīng)口灌服烯丙孕素口服液參比品,第二組4只豬單劑量經(jīng)口灌服烯丙孕素口服液受試品。兩階段洗脫時間為1周。給藥前禁食12小時并采集一次空白血樣,給藥后按預(yù)定時間點采集血樣適量。豬血漿中烯丙孕素含量采用上述經(jīng)驗證的UPLC-MS/MS檢測方法測定。實測血藥濃度-時間數(shù)據(jù)采用Winnonlin5.2藥動學(xué)分析軟件擬合藥代動力學(xué)參數(shù)。豬單劑量口服烯丙孕素口服液受試品和參比品后,平均消除半衰期(t1/2)分別為6.44 h和6.43 h,達(dá)峰時間(Tmax)分別為0.84 h和1.09 h,達(dá)峰濃度(Cmax)分別為 55.41 ng/mL 和 57.39 ng/mL,清除率(Cl)分別為 2781.02 mL/h/kg 和 3727.67 mL/h/kg,表觀分布容積(Vd)分別為24924.69 mL/kg和36418.91 mL/kg,平均滯留時間(MRT0～t)分別為6.36 h和6.79 h,平均藥時曲線下面積(AUC0～t)分別為424.37 h*ng/mL和311.68 h*ng/mL。結(jié)果表明,烯丙孕素口服液灌服給藥后在豬體內(nèi)吸收和消除均迅速。以烯丙孕素參比品作對照,國產(chǎn)烯丙孕素受試品的相對生物利用度為136.29%,吸收程度好于進口的同類產(chǎn)品。受試品組和參比品組的主要藥動學(xué)參數(shù):t1/2、Tmax、Cmax、AUC0～t、AUC0～∝、和MRT0～t間均無顯著的統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05),表明烯丙孕素口服液受試品與進口同類產(chǎn)品間有相似的藥動學(xué)特征。
【圖文】：

ｒｒ＇邋／邋２．．邋Ｏ邋ｒａ逡逑ｉｆｉｊｙ邋ｍ邋ｔ邋Ｌ逡逑圖２－３睪酮質(zhì)譜圖逡逑Ｆｉｇ．２－３邋Ｍａｓｓ邋ｓｐｅｃｔｒｕｍ邋ｏｆ邋ｔｅｓｔｏｓｔｅｒｏｎｅ逡逑ｎ邋ｆ？ｒ？ｊ邋ｊ逡逑＊＇Ｕ＞．ｒＶｆ＞逡逑

＊ｎ邋■？邋．邋？ｔ％邋ｉ邋ｎ逡逑圖２－６空白血i}添加插丙孕素（１邋ｎｇ／ｍｌ）與內(nèi)標(biāo)（辜酮）總離子流圖逡逑Ｆｉｇ．邋２－６邋Ｔｏｔａｌ邋ｉｏｎ邋ｆｌｏｗ邋ｄｉａｇｒａｍ邋ｏｆ邋ａｌｔｒｅｎｏｇｅｓｔ邋（１邋ｎｇ／ｍｌ）邋ａｎｄ邋ｔｅｓｔｏｓｔｅｒｏｎｅ邋ｉｎ邋ｂｌａｎｋ邋ｐｌａｓｍａ逡逑３．４．２記憶效應(yīng)逡逑試驗結(jié)果見表２－６。由表２－６可見，烯丙孕素的記憶效應(yīng)均在最低定量下限的２０％以逡逑內(nèi)，且睪酮不超過定量下限內(nèi)標(biāo)峰面積的５％。在后續(xù)真實樣品分析中，，仍然會考察每一逡逑批樣品的ＵＰＬＣ－ＭＳ／ＭＳ系統(tǒng)的記憶效應(yīng)。逡逑表２－６記憶效應(yīng)檢測結(jié)果逡逑Ｔａｂｌｅ邋２－６邋Ｍｅｍｏｒｙ邋ｅｆｆｅｃｔ邋ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ逡逑實測峰面積逡逑加標(biāo)濃度（ｎｇ／ｍｌ）邋邐ｊ邐別－”上 圣白■基質(zhì)邐邋面積比（％）逡逑１．２８ｅ４邐９．４０ｅ２邐ＴＭ逡逑烯丙孕素邐１．２０ｅ４邐Ｎ／Ａ邐Ｎ／Ａ逡逑邐１．２３ｅ４邐Ｎ／Ａ邐Ｎ／Ａ邐逡逑４．９８ｅ４邐２．４０ｅ３邐４＾８２￣￣逡逑睪酮邐５．２４ｅ４邐２．５３ｅ３邐４．８３逡逑邐４．７８ｅ４邐Ｎ／Ａ邐Ｎ／Ａ邐逡逑注：Ｎ／Ａ為檢測不到（Ｎｏｔｅ：Ｎ／Ａ邋ｍｅａｎｓ邋ｃａｎ＇ｔ邋ｂｅ邋ｄｅｔｅｃｔｅｄ）逡逑３．４．３基質(zhì)效應(yīng)逡逑
【學(xué)位授予單位】：揚州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：S859.7

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8 Stevenson IH;張s鉈

本文編號：2644201