【摘要】：乳酸菌在醫(yī)藥、農(nóng)業(yè)及食品等行業(yè)發(fā)揮著重要的作用,其安全性已經(jīng)受到認(rèn)可。豬流行性腹瀉病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)對(duì)仔豬的致死率極高,對(duì)養(yǎng)豬業(yè)有極大的經(jīng)濟(jì)損失,PEDV的防治成為養(yǎng)豬行業(yè)的一大難題。為從仔豬糞便中分離得到抗豬流行性腹瀉病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)的乳酸菌,本研究先用MRS培養(yǎng)基對(duì)乳酸菌進(jìn)行了初步的分離與純化,再將得到的乳酸菌通過(guò)MTT比色法、TCID_(50)法、間接免疫熒光法在體外細(xì)胞模型上對(duì)乳酸菌的抗病毒效果進(jìn)行評(píng)價(jià),從中得到3株抑制病毒的益生菌株。本試驗(yàn)為乳酸菌抗病毒作用的進(jìn)一步研究奠定了基礎(chǔ)。試驗(yàn)利用MRS培養(yǎng)基先從豬糞便中分離出36株具有益生菌特性的菌株。然后通過(guò)MTT比色法初步篩選出具有抗病毒作用的10株乳酸菌。對(duì)分離的10株乳酸菌進(jìn)行體外的耐酸耐膽鹽試驗(yàn),從中選出6株作為備用菌種。對(duì)6株菌進(jìn)行生化試驗(yàn)以及16S rDNA鑒定得出4株為植物乳桿菌,1株糞場(chǎng)球菌,1株戊糖片球菌,選其中三株菌進(jìn)行進(jìn)一步抗病毒試驗(yàn)。將分離鑒定的菌株進(jìn)行體外的抗病毒試驗(yàn)。首先利用MTT法計(jì)算出3株菌的最大無(wú)毒劑量,以此為起點(diǎn)將其進(jìn)行稀釋成不同濃度進(jìn)行試驗(yàn)。試驗(yàn)在體外Vero細(xì)胞上進(jìn)行。乳酸菌或其代謝產(chǎn)物通過(guò)三種方式(先加入乳酸菌或代謝產(chǎn)物后加入病毒;乳酸菌或者代謝產(chǎn)物和病毒同時(shí)加入;先加入病毒再加入乳酸菌或代謝產(chǎn)物)來(lái)評(píng)估PEDV對(duì)細(xì)胞的抑制作用。結(jié)果表明三種方式中有著不同的抑制效果,活菌試驗(yàn)中,乳酸菌預(yù)先處理組抑制率較好,代謝產(chǎn)物試驗(yàn)中,同時(shí)接入代謝產(chǎn)物和病毒組對(duì)PEDV抑制效果要比其他兩組抑制效果好。將PEDV與乳酸菌共培養(yǎng),然后檢測(cè)病毒的TCID_(50),結(jié)果顯示通過(guò)乳酸菌處理后的TCID_(50)/100μL分別為10~(-3.76)、10~(-3.82)、10~(-3.15),與對(duì)照組未經(jīng)過(guò)處理組病毒TCID_(50)/100μL(10~(-4.16))作對(duì)比,均有不同程度的降低,說(shuō)明了乳酸菌對(duì)病毒的毒力具有顯著的抑制作用。利用間接免疫熒光法檢測(cè)乳酸菌處理細(xì)胞后再感染病毒的效果,同時(shí)設(shè)立病毒與空白對(duì)照。通過(guò)觀察熒光的數(shù)量來(lái)判定乳酸菌的抑制作用。結(jié)果很明顯,加入乳酸菌及其代謝產(chǎn)物的處理組熒光數(shù)量比病毒對(duì)照組均有不同程度的降低,說(shuō)明乳酸菌和代謝產(chǎn)物對(duì)PEDV吸附細(xì)胞具有一定的阻斷作用。綜上所述,本試驗(yàn)從豬糞便中成功分離并篩選出3株具有抗PEDV作用的乳酸菌,它們的菌體及代謝產(chǎn)物可以降低病毒對(duì)細(xì)胞活力影響,阻斷PEDV對(duì)細(xì)胞的感染。
【學(xué)位授予單位】：河北農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類(lèi)號(hào)】：S852.6

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2642963