【摘要】：哺乳動(dòng)物精子的發(fā)生受到眾多因素的調(diào)控。為保證優(yōu)良的精液品質(zhì),必須確保精子發(fā)生過程的順利進(jìn)行。研究發(fā)現(xiàn)人源溶菌酶同源蛋白4(Human LysozymeLike 4,LYZL4)、人源溶菌酶同源蛋白6(Human Lysozyme-Like 6,LYZL6)以及增殖細(xì)胞核抗原(Proliferation cell nucleus antigen,PCNA)在雄性動(dòng)物睪丸的正常發(fā)育以及精子發(fā)生過程中發(fā)揮著重要的作用。但是對(duì)于這幾個(gè)基因的研究主要還停留在模式動(dòng)物小鼠和人方面,對(duì)牦牛而言這幾個(gè)基因的研究處于空缺狀態(tài)。因此,通過對(duì)牦牛睪丸組織形態(tài)學(xué)的觀察,研究牦牛睪丸組織的結(jié)構(gòu)功能和變化規(guī)律,從而為為牦牛的繁殖生理研究提供一定的補(bǔ)充;同時(shí)探究LYZL4、LYZL6以及PCNA基因在牦牛睪丸中的表達(dá)與定位,對(duì)闡明牦牛精子發(fā)生的分子調(diào)節(jié)機(jī)制具有重大意義。本研究選取健康狀況良好的6月齡、18月齡、30月齡及72月齡牦牛公牛各3頭。通過組織形態(tài)學(xué)探討不同月齡牦牛睪丸生精小管和間質(zhì)細(xì)胞的發(fā)育及其變化規(guī)律。應(yīng)用熒光實(shí)時(shí)定量PCR(quantitative real-time PCR)和Western Blot在轉(zhuǎn)錄和翻譯水平上分別對(duì)LYZL4、LYZL6以及PCNA在不同月齡牦牛睪丸中的表達(dá)機(jī)制進(jìn)行研究。同時(shí)采用免疫組織化學(xué)的方法對(duì)不同月齡牦牛睪丸中LYZL4、LYZL6以及PCNA蛋白的免疫陽性分布進(jìn)行研究,從而初步探究這三個(gè)基因在牦牛睪丸中的調(diào)控機(jī)制。主要研究結(jié)果如下:1.在不同月齡中各細(xì)胞數(shù)量及支持細(xì)胞和曲細(xì)精管的長(zhǎng)短徑均有著極顯著的變化(P0.01),而精原細(xì)胞、精母細(xì)胞以及間質(zhì)細(xì)胞長(zhǎng)短徑?jīng)]有顯著性差異(P0.05)。通過組織切片觀察發(fā)現(xiàn),隨著牦牛年齡的不斷增加,曲細(xì)精管越發(fā)排列緊密,管腔明顯增大增粗。同時(shí)各級(jí)生精細(xì)胞也在逐漸增多,在72月齡時(shí)達(dá)到最多。說明72月齡是牦牛最佳的繁殖時(shí)期,表明各級(jí)生精細(xì)胞以及曲細(xì)精管是隨著年齡的變化而有規(guī)律的發(fā)生改變。2.72月齡牦牛睪丸中LYZL4基因的表達(dá)極顯著高于6月齡、18月齡和30月齡(P0.01);其表達(dá)量隨著年齡的增長(zhǎng)而升高,在性成熟期間乃至成年牛中高表達(dá)。LYZL4蛋白主要定位于牦牛睪丸組織中的圓形精子細(xì)胞和間質(zhì)細(xì)胞,其蛋白表達(dá)在性成熟時(shí)期相對(duì)較高,30月齡和72月齡的蛋白表達(dá)量極顯著高于6月齡和18月齡(P0.01)。表明LYZL4參與精子發(fā)生的過程并且對(duì)牦牛睪丸的發(fā)育及成熟具有重要的調(diào)控作用。3.LYZL6基因高表達(dá)于成年牦牛的睪丸組織中,而性成熟前牦牛睪丸中LYZL6基因的表達(dá)量相對(duì)較低,72月齡睪丸與6、18和30月齡睪丸表達(dá)量存在極顯著差異(P0.01);LYZL6蛋白定位于初級(jí)精母細(xì)胞和睪丸的圓形精子細(xì)胞以及成熟附睪精子的頂體前區(qū)和中段。性成熟前蛋白的表達(dá)量極顯著低于性成熟后(P0.01)。表明LYZL6在牦牛睪丸中主要通過影響精母細(xì)胞的增值來調(diào)控精子的發(fā)生過程。4.PCNA基因在性成熟以及成年牦牛的睪丸組織中高表達(dá),性成熟前和性成熟后的表達(dá)量存在較大的差異,30月齡和72月齡牦牛睪丸中的表達(dá)量極顯著高于6月齡和18月齡(P0.01)。PCNA蛋白性成熟后睪丸中表達(dá)量極顯著高于性成熟前(P0.01),而30月齡的蛋白表達(dá)顯著高于72月齡(P0.05)。免疫組化檢測(cè)發(fā)現(xiàn)其主要定位于初級(jí)精母細(xì)胞、次級(jí)精母細(xì)胞以及部分支持細(xì)胞,表明PCNA通過影響睪丸間質(zhì)細(xì)胞的增值和精母細(xì)胞的分裂來調(diào)控精子發(fā)生的過程。
【圖文】：

圖 1-1 睪丸結(jié)構(gòu)示意圖Figure 1-1 Schematic diagram of testicular structure在睪丸中產(chǎn)生的精子是未成熟的，，睪丸中產(chǎn)生的精子在附睪中進(jìn)行孵育成熟。在睪丸和附睪中，有多種蛋白質(zhì)相助精子成熟并獲得受精能力。在過幾十年中，已經(jīng)研究了使用不同方法鑒定這些蛋白的特定功能及其作用。從

圖 1-2 曲細(xì)精管結(jié)構(gòu)示意圖Figure 1-2 Schematic diagram of the semi-fine tube structure1.1.2 生精上皮生精上皮（圖 1-3）由支持細(xì)胞及不同階段的生精細(xì)胞高度有序排列組成，其組織的復(fù)雜性是上皮中獨(dú)有的，包括非增殖狀態(tài)的支持細(xì)胞及各期生精細(xì)胞
【學(xué)位授予單位】：西北民族大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：S823.85

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2643177