發(fā)布時間：2020-04-28 06:39

【摘要】：哺乳動物精子的發(fā)生受到眾多因素的調(diào)控。為保證優(yōu)良的精液品質(zhì),必須確保精子發(fā)生過程的順利進行。研究發(fā)現(xiàn)人源溶菌酶同源蛋白4(Human LysozymeLike 4,LYZL4)、人源溶菌酶同源蛋白6(Human Lysozyme-Like 6,LYZL6)以及增殖細胞核抗原(Proliferation cell nucleus antigen,PCNA)在雄性動物睪丸的正常發(fā)育以及精子發(fā)生過程中發(fā)揮著重要的作用。但是對于這幾個基因的研究主要還停留在模式動物小鼠和人方面,對牦牛而言這幾個基因的研究處于空缺狀態(tài)。因此,通過對牦牛睪丸組織形態(tài)學的觀察,研究牦牛睪丸組織的結(jié)構(gòu)功能和變化規(guī)律,從而為為牦牛的繁殖生理研究提供一定的補充;同時探究LYZL4、LYZL6以及PCNA基因在牦牛睪丸中的表達與定位,對闡明牦牛精子發(fā)生的分子調(diào)節(jié)機制具有重大意義。本研究選取健康狀況良好的6月齡、18月齡、30月齡及72月齡牦牛公牛各3頭。通過組織形態(tài)學探討不同月齡牦牛睪丸生精小管和間質(zhì)細胞的發(fā)育及其變化規(guī)律。應用熒光實時定量PCR(quantitative real-time PCR)和Western Blot在轉(zhuǎn)錄和翻譯水平上分別對LYZL4、LYZL6以及PCNA在不同月齡牦牛睪丸中的表達機制進行研究。同時采用免疫組織化學的方法對不同月齡牦牛睪丸中LYZL4、LYZL6以及PCNA蛋白的免疫陽性分布進行研究,從而初步探究這三個基因在牦牛睪丸中的調(diào)控機制。主要研究結(jié)果如下:1.在不同月齡中各細胞數(shù)量及支持細胞和曲細精管的長短徑均有著極顯著的變化(P0.01),而精原細胞、精母細胞以及間質(zhì)細胞長短徑?jīng)]有顯著性差異(P0.05)。通過組織切片觀察發(fā)現(xiàn),隨著牦牛年齡的不斷增加,曲細精管越發(fā)排列緊密,管腔明顯增大增粗。同時各級生精細胞也在逐漸增多,在72月齡時達到最多。說明72月齡是牦牛最佳的繁殖時期,表明各級生精細胞以及曲細精管是隨著年齡的變化而有規(guī)律的發(fā)生改變。2.72月齡牦牛睪丸中LYZL4基因的表達極顯著高于6月齡、18月齡和30月齡(P0.01);其表達量隨著年齡的增長而升高,在性成熟期間乃至成年牛中高表達。LYZL4蛋白主要定位于牦牛睪丸組織中的圓形精子細胞和間質(zhì)細胞,其蛋白表達在性成熟時期相對較高,30月齡和72月齡的蛋白表達量極顯著高于6月齡和18月齡(P0.01)。表明LYZL4參與精子發(fā)生的過程并且對牦牛睪丸的發(fā)育及成熟具有重要的調(diào)控作用。3.LYZL6基因高表達于成年牦牛的睪丸組織中,而性成熟前牦牛睪丸中LYZL6基因的表達量相對較低,72月齡睪丸與6、18和30月齡睪丸表達量存在極顯著差異(P0.01);LYZL6蛋白定位于初級精母細胞和睪丸的圓形精子細胞以及成熟附睪精子的頂體前區(qū)和中段。性成熟前蛋白的表達量極顯著低于性成熟后(P0.01)。表明LYZL6在牦牛睪丸中主要通過影響精母細胞的增值來調(diào)控精子的發(fā)生過程。4.PCNA基因在性成熟以及成年牦牛的睪丸組織中高表達,性成熟前和性成熟后的表達量存在較大的差異,30月齡和72月齡牦牛睪丸中的表達量極顯著高于6月齡和18月齡(P0.01)。PCNA蛋白性成熟后睪丸中表達量極顯著高于性成熟前(P0.01),而30月齡的蛋白表達顯著高于72月齡(P0.05)。免疫組化檢測發(fā)現(xiàn)其主要定位于初級精母細胞、次級精母細胞以及部分支持細胞,表明PCNA通過影響睪丸間質(zhì)細胞的增值和精母細胞的分裂來調(diào)控精子發(fā)生的過程。
【圖文】：

圖 1-1 睪丸結(jié)構(gòu)示意圖Figure 1-1 Schematic diagram of testicular structure在睪丸中產(chǎn)生的精子是未成熟的，，睪丸中產(chǎn)生的精子在附睪中進行孵育成熟。在睪丸和附睪中，有多種蛋白質(zhì)相助精子成熟并獲得受精能力。在過幾十年中，已經(jīng)研究了使用不同方法鑒定這些蛋白的特定功能及其作用。從

圖 1-2 曲細精管結(jié)構(gòu)示意圖Figure 1-2 Schematic diagram of the semi-fine tube structure1.1.2 生精上皮生精上皮（圖 1-3）由支持細胞及不同階段的生精細胞高度有序排列組成，其組織的復雜性是上皮中獨有的，包括非增殖狀態(tài)的支持細胞及各期生精細胞
【學位授予單位】：西北民族大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：S823.85

【參考文獻】

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本文編號：2643177