【摘要】：旋毛蟲病是一種由旋毛形線蟲引起的人獸共患寄生蟲病,同時也是一種廣泛流行的食源性寄生蟲病,人感染旋毛蟲的主要原因是生食或半生食含有旋毛蟲包囊的肉制品,感染旋毛蟲后會表現(xiàn)出全身發(fā)熱、腹痛、腹瀉、眼瞼水腫、心肌炎、全身肌肉疼痛等癥狀,重癥患者甚至可因并發(fā)癥而死亡,對人體健康產生極大危害。當前臨床上應用最普遍的治療藥物是阿苯達唑和苯并咪唑,但副作用明顯,因此開發(fā)旋毛蟲新型藥物仍是研究熱點。植物源物質來源于自然,具有安全、低毒、對非靶標生物毒害較低、對環(huán)境無污染等優(yōu)點,從天然植物中獲取有效物質并用于病蟲害防治是目前國際上的一種趨勢。本研究在體外培養(yǎng)條件下,用具有藥理作用的20種天然植物提取物與旋毛蟲共培養(yǎng),篩選出能夠對旋毛蟲肌幼蟲、成蟲、新生幼蟲三個發(fā)育階段的蟲體具有殺傷作用的植物提取物,進而通過體內外試驗研究篩選提取物對旋毛蟲體內三個發(fā)育階段蟲體的殺傷效果并初步探索其殺傷機理,以期為防治旋毛蟲病提供新的治療藥物和新途徑。主要研究內容及結果如下:(1)對旋毛蟲各發(fā)育期蟲體具有殺傷作用的天然植物提取物體外篩選:分別收集旋毛蟲成蟲、新生幼蟲、肌幼蟲進行體外培養(yǎng),設空白對照組、DMSO組以及濃度分別為10、50、100mg/L的天然植物提取物組,置于37 5%CO℃2培養(yǎng)箱中24h,鏡檢并計算蟲體死亡率,統(tǒng)計分析結果表明血根堿(50mg/L)和蔓生白薇苷G(50、100mg/L)對旋毛蟲肌幼蟲有殺傷作用,作用24h后死亡率分別達到100±0.0%、87.3±4.9%、100±0.0%。血根堿、補骨脂素、扁桃苷、金絲桃苷對旋毛蟲成蟲有殺傷作用,其中血根堿、補骨脂素、扁桃苷濃度在10mg/L時作用24h后死亡率分別達到71.6±5.3%、97.4±6.5%、93.8±5.1%,在50mg/L時死亡率均達到100±0.0%;金絲桃苷濃度在50mg/L時作用24h后死亡率為87.6±5.8%,在100mg/L時死亡率達到100±0.0%。血根堿、桑根酮C對旋毛蟲新生幼蟲均有殺傷作用,其中10mg/L血根堿作用24h后死亡率達到100±0.0%;桑根酮C濃度在50mg/L和100mg/L時作用24h后蟲體死亡率分別為98.3±5.9%和100±0.0%。(2)血根堿對旋毛蟲各發(fā)育期蟲體殺傷效果和殺蟲機理研究:用血根堿作用于體外培養(yǎng)的旋毛蟲肌幼蟲、成蟲、新生幼蟲,結果可見血根堿在濃度14-30mg/L之間對旋毛蟲肌幼蟲殺傷作用隨濃度升高而增強,在濃度30mg/L時蟲體死亡率達到100%;在濃度3-15mg/L之間對旋毛蟲成蟲殺傷作用隨濃度升高而增強,在濃度15mg/L時蟲體死亡率達到100%,并且隨著血根堿濃度的升高,旋毛蟲成蟲產生新生幼蟲的數(shù)量逐漸減少;在濃度1.4-3mg/L之間對旋毛蟲新生幼蟲殺傷作用隨濃度升高而增強,在濃度3mg/L時蟲體死亡率達到100%。掃描電鏡觀察血根堿對體外培養(yǎng)旋毛蟲成蟲體表的損傷,可見血根堿作用后的旋毛蟲成蟲蟲體皺縮,環(huán)形皺褶加深,局部表皮潰爛,體表縱嵴消失,結構模糊,雄蟲交配附器葉狀小片塌陷、萎縮,無法辨認兩對乳突、生殖裂口,表明血根堿能夠嚴重侵蝕破壞旋毛蟲成蟲體表結構。體內實驗分為3個時期,每個時期選取8周齡雌性BALBc小鼠60只,隨機平均分為6組,設空白對照組、攻蟲組、DMSO組、阿苯達唑組,體內旋毛蟲成蟲期、幼蟲移行期、幼蟲成囊期分別設濃度為70和80mg/kg、80和100mg/kg、100和150mg/kg的血根堿治療組,分別于感染旋毛蟲后24h內3次、13d及35d連續(xù)3天給予血根堿治療,第7d、30d、46d天處死各組小鼠,收集蟲體并計數(shù),計算減蟲率。結果表明血根堿對體內旋毛蟲成蟲期、幼蟲移行期、幼蟲成囊期均具有較好治療效果,血根堿濃度在70mg/kg和80mg/kg時對旋毛蟲成蟲期的減蟲率分別為37.2%和36.9%;在80mg/kg和100mg/kg時對旋毛蟲幼蟲移行期的減蟲率分別為26.4%和39.6%;在100mg/kg組和150mg/kg是對旋毛蟲幼蟲成囊期的減蟲率分別為31.7%和42.3%。HE染色觀察小鼠十二指腸、舌肌和咬肌病理變化,測量腸絨毛長度和隱窩深度計算腸絨毛-隱窩比值(V/C),可見不同濃度血根堿治療后的小鼠組織病理均有不同程度的減輕,并且血根堿可以恢復腸絨毛長度,V/C顯著升高(P0.05)。PAS染色觀察十二指腸計數(shù)腸粘膜杯狀細胞數(shù)量,結果顯示血根堿能使腸粘膜杯狀細胞顯著增多(P0.05),增強黏膜免疫促進蟲體排出。ELISA法檢測小鼠血清中活性氧簇(ROS)含量,結果表明血根堿能在旋毛蟲幼蟲移行期升高ROS含量,維持體內ROS平衡。本研究篩選到血根堿、蔓生白薇苷G、補骨脂素、扁桃苷、金絲桃苷和桑根酮C對旋毛蟲有明顯殺傷效果,其中血根堿對體內、體外旋毛蟲三個發(fā)育時期蟲體均有殺傷作用,并且能夠減輕腸道和肌肉的病理變化,通過升高ROS含量,維持體內ROS平衡和增加腸粘膜杯狀細胞數(shù)量促進蟲體排出。
【圖文】：

mortality of Trichinella spiralis muscle larvae after sanguinarinedifferent concentrations for 24h空白對照組比較 P<0.05。.1 所示，空白對照組（圖 A）的肌幼蟲可見蟲體頭部有活動，，內部很完整，蟲體活力良好。血根堿濃度 30mg/L 組（圖 B）肌幼蟲蟲，每條蟲體持續(xù)觀察 30s 均沒有活動跡象。MSO 組空白對照組不同血根堿濃度組(mg/L)12 14 16 18 20 22 24 265.3±0.5 4.2±1.73.7±1.116.0±2.0*38.7±3.5*52.3±5.5*54.0±4.6*64.7±6.4*82.0±7.8*89.±2.*A B

A、15mg/L 組與空白對照組相比差異顯著(P<0.05）。表 2-2 旋毛蟲成蟲與不同濃度血根堿作用 24h 后的死亡率 mortality of Trichinella spiralis adult after sanguinarine treatmconcentrations for 24h空白對照組比較 P<0.05。.2 所示，空白對照組（圖 A）旋毛蟲成蟲蟲體活動頻率高，蟲體，活力良好。血根堿濃度 15mg/L 組（圖 B）旋毛蟲成蟲呈直線僵直不動。DMSO 組空白對照組不同血根堿濃度組(mg/L)1 3 5 7 9 11 5.4±0.8 4.3±1.13.3±1.718.3±2.1*28.3±1.5*47.3±4.9*63.0±5.6*83.3±4.5*B
【學位授予單位】：吉林農業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：S853.7

【參考文獻】

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1 謝傳效;;中西醫(yī)結合治療膽結石的療效觀察[J];中西醫(yī)結合心血管病電子雜志;2015年10期

2 姚雯;楊天衡;劉學波;;血根堿清除自由基及抑制生物大分子氧化的作用[J];食品科學;2014年09期

3 黃章瓊;郁建平;;血根堿對菜青蟲生長發(fā)育及幾種代謝酶系的影響[J];山地農業(yè)生物學報;2012年03期

4 孫文霞;袁仕善;黃瓊瑤;彭飛;劉年猛;楊盛清;;血水草血根堿對釘螺肝臟損傷的研究[J];中國血吸蟲病防治雜志;2011年01期

5 劉元元;郝智慧;張瑞麗;侯加法;鄧益鋒;;復方氯硝柳胺驅蟲片臨床藥效學試驗[J];畜牧與獸醫(yī);2011年01期

6 孫文霞;袁仕善;黃瓊瑤;楊潔;劉年猛;鐘志宏;;血水草生物堿及其血根堿抑菌作用的研究[J];實用預防醫(yī)學;2010年09期

7 薛劍;肖樹華;徐莉莉;張永年;強慧琴;;三苯雙脒和阿苯達唑治療感染旋毛蟲小鼠的療效觀察[J];中國寄生蟲學與寄生蟲病雜志;2010年01期

8 黃凱;楊新波;黃正明;;金絲桃苷藥理作用研究進展[J];醫(yī)藥導報;2009年08期

9 劉元元;薛飛群;張麗芳;鄒思湘;;硝唑尼特干混懸劑主要活性代謝物在狗體內的藥物動力學研究[J];中國獸醫(yī)雜志;2009年06期

10 王建華;王艷;潘永梅;;補骨脂素對大鼠成骨細胞增殖與分化的影響[J];天然產物研究與開發(fā);2007年05期

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1 張雪強;Wortmannilatone F與G31P聯(lián)合用藥對旋毛蟲抑殺作用和抗囊包形成與纖維化的實驗研究[D];大連醫(yī)科大學;2017年

2 蘆程;血根堿殺滅指環(huán)蟲機制及對金魚免疫毒理研究[D];西北農林科技大學;2013年

3 易岑;真菌提取物對旋毛蟲病治療的實驗研究[D];大連醫(yī)科大學;2013年

4 張戰(zhàn)峰;檳榔堿的合成及毒性與藥理藥效初步評價[D];中國農業(yè)科學院;2007年

本文編號：2641900