【摘要】：旋毛蟲病是一種由旋毛形線蟲引起的人獸共患寄生蟲病,同時也是一種廣泛流行的食源性寄生蟲病,人感染旋毛蟲的主要原因是生食或半生食含有旋毛蟲包囊的肉制品,感染旋毛蟲后會表現(xiàn)出全身發(fā)熱、腹痛、腹瀉、眼瞼水腫、心肌炎、全身肌肉疼痛等癥狀,重癥患者甚至可因并發(fā)癥而死亡,對人體健康產(chǎn)生極大危害。當(dāng)前臨床上應(yīng)用最普遍的治療藥物是阿苯達(dá)唑和苯并咪唑,但副作用明顯,因此開發(fā)旋毛蟲新型藥物仍是研究熱點。植物源物質(zhì)來源于自然,具有安全、低毒、對非靶標(biāo)生物毒害較低、對環(huán)境無污染等優(yōu)點,從天然植物中獲取有效物質(zhì)并用于病蟲害防治是目前國際上的一種趨勢。本研究在體外培養(yǎng)條件下,用具有藥理作用的20種天然植物提取物與旋毛蟲共培養(yǎng),篩選出能夠?qū)πx肌幼蟲、成蟲、新生幼蟲三個發(fā)育階段的蟲體具有殺傷作用的植物提取物,進(jìn)而通過體內(nèi)外試驗研究篩選提取物對旋毛蟲體內(nèi)三個發(fā)育階段蟲體的殺傷效果并初步探索其殺傷機(jī)理,以期為防治旋毛蟲病提供新的治療藥物和新途徑。主要研究內(nèi)容及結(jié)果如下:(1)對旋毛蟲各發(fā)育期蟲體具有殺傷作用的天然植物提取物體外篩選:分別收集旋毛蟲成蟲、新生幼蟲、肌幼蟲進(jìn)行體外培養(yǎng),設(shè)空白對照組、DMSO組以及濃度分別為10、50、100mg/L的天然植物提取物組,置于37 5%CO℃2培養(yǎng)箱中24h,鏡檢并計算蟲體死亡率,統(tǒng)計分析結(jié)果表明血根堿(50mg/L)和蔓生白薇苷G(50、100mg/L)對旋毛蟲肌幼蟲有殺傷作用,作用24h后死亡率分別達(dá)到100±0.0%、87.3±4.9%、100±0.0%。血根堿、補骨脂素、扁桃苷、金絲桃苷對旋毛蟲成蟲有殺傷作用,其中血根堿、補骨脂素、扁桃苷濃度在10mg/L時作用24h后死亡率分別達(dá)到71.6±5.3%、97.4±6.5%、93.8±5.1%,在50mg/L時死亡率均達(dá)到100±0.0%;金絲桃苷濃度在50mg/L時作用24h后死亡率為87.6±5.8%,在100mg/L時死亡率達(dá)到100±0.0%。血根堿、桑根酮C對旋毛蟲新生幼蟲均有殺傷作用,其中10mg/L血根堿作用24h后死亡率達(dá)到100±0.0%;桑根酮C濃度在50mg/L和100mg/L時作用24h后蟲體死亡率分別為98.3±5.9%和100±0.0%。(2)血根堿對旋毛蟲各發(fā)育期蟲體殺傷效果和殺蟲機(jī)理研究:用血根堿作用于體外培養(yǎng)的旋毛蟲肌幼蟲、成蟲、新生幼蟲,結(jié)果可見血根堿在濃度14-30mg/L之間對旋毛蟲肌幼蟲殺傷作用隨濃度升高而增強(qiáng),在濃度30mg/L時蟲體死亡率達(dá)到100%;在濃度3-15mg/L之間對旋毛蟲成蟲殺傷作用隨濃度升高而增強(qiáng),在濃度15mg/L時蟲體死亡率達(dá)到100%,并且隨著血根堿濃度的升高,旋毛蟲成蟲產(chǎn)生新生幼蟲的數(shù)量逐漸減少;在濃度1.4-3mg/L之間對旋毛蟲新生幼蟲殺傷作用隨濃度升高而增強(qiáng),在濃度3mg/L時蟲體死亡率達(dá)到100%。掃描電鏡觀察血根堿對體外培養(yǎng)旋毛蟲成蟲體表的損傷,可見血根堿作用后的旋毛蟲成蟲蟲體皺縮,環(huán)形皺褶加深,局部表皮潰爛,體表縱嵴消失,結(jié)構(gòu)模糊,雄蟲交配附器葉狀小片塌陷、萎縮,無法辨認(rèn)兩對乳突、生殖裂口,表明血根堿能夠嚴(yán)重侵蝕破壞旋毛蟲成蟲體表結(jié)構(gòu)。體內(nèi)實驗分為3個時期,每個時期選取8周齡雌性BALBc小鼠60只,隨機(jī)平均分為6組,設(shè)空白對照組、攻蟲組、DMSO組、阿苯達(dá)唑組,體內(nèi)旋毛蟲成蟲期、幼蟲移行期、幼蟲成囊期分別設(shè)濃度為70和80mg/kg、80和100mg/kg、100和150mg/kg的血根堿治療組,分別于感染旋毛蟲后24h內(nèi)3次、13d及35d連續(xù)3天給予血根堿治療,第7d、30d、46d天處死各組小鼠,收集蟲體并計數(shù),計算減蟲率。結(jié)果表明血根堿對體內(nèi)旋毛蟲成蟲期、幼蟲移行期、幼蟲成囊期均具有較好治療效果,血根堿濃度在70mg/kg和80mg/kg時對旋毛蟲成蟲期的減蟲率分別為37.2%和36.9%;在80mg/kg和100mg/kg時對旋毛蟲幼蟲移行期的減蟲率分別為26.4%和39.6%;在100mg/kg組和150mg/kg是對旋毛蟲幼蟲成囊期的減蟲率分別為31.7%和42.3%。HE染色觀察小鼠十二指腸、舌肌和咬肌病理變化,測量腸絨毛長度和隱窩深度計算腸絨毛-隱窩比值(V/C),可見不同濃度血根堿治療后的小鼠組織病理均有不同程度的減輕,并且血根堿可以恢復(fù)腸絨毛長度,V/C顯著升高(P0.05)。PAS染色觀察十二指腸計數(shù)腸粘膜杯狀細(xì)胞數(shù)量,結(jié)果顯示血根堿能使腸粘膜杯狀細(xì)胞顯著增多(P0.05),增強(qiáng)黏膜免疫促進(jìn)蟲體排出。ELISA法檢測小鼠血清中活性氧簇(ROS)含量,結(jié)果表明血根堿能在旋毛蟲幼蟲移行期升高ROS含量,維持體內(nèi)ROS平衡。本研究篩選到血根堿、蔓生白薇苷G、補骨脂素、扁桃苷、金絲桃苷和桑根酮C對旋毛蟲有明顯殺傷效果,其中血根堿對體內(nèi)、體外旋毛蟲三個發(fā)育時期蟲體均有殺傷作用,并且能夠減輕腸道和肌肉的病理變化,通過升高ROS含量,維持體內(nèi)ROS平衡和增加腸粘膜杯狀細(xì)胞數(shù)量促進(jìn)蟲體排出。
【圖文】：

mortality of Trichinella spiralis muscle larvae after sanguinarinedifferent concentrations for 24h空白對照組比較 P<0.05。.1 所示，空白對照組（圖 A）的肌幼蟲可見蟲體頭部有活動，，內(nèi)部很完整，蟲體活力良好。血根堿濃度 30mg/L 組（圖 B）肌幼蟲蟲，每條蟲體持續(xù)觀察 30s 均沒有活動跡象。MSO 組空白對照組不同血根堿濃度組(mg/L)12 14 16 18 20 22 24 265.3±0.5 4.2±1.73.7±1.116.0±2.0*38.7±3.5*52.3±5.5*54.0±4.6*64.7±6.4*82.0±7.8*89.±2.*A B

A、15mg/L 組與空白對照組相比差異顯著(P<0.05）。表 2-2 旋毛蟲成蟲與不同濃度血根堿作用 24h 后的死亡率 mortality of Trichinella spiralis adult after sanguinarine treatmconcentrations for 24h空白對照組比較 P<0.05。.2 所示，空白對照組（圖 A）旋毛蟲成蟲蟲體活動頻率高，蟲體，活力良好。血根堿濃度 15mg/L 組（圖 B）旋毛蟲成蟲呈直線僵直不動。DMSO 組空白對照組不同血根堿濃度組(mg/L)1 3 5 7 9 11 5.4±0.8 4.3±1.13.3±1.718.3±2.1*28.3±1.5*47.3±4.9*63.0±5.6*83.3±4.5*B
【學(xué)位授予單位】：吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：S853.7

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2641900