【摘要】：花生四烯酸(Arachidonic acid,AA)經(jīng)過細(xì)胞色素 P450(Cytochrome P450,CYP)表氧化酶途徑生成環(huán)氧二十碳三烯酸(Epoxyeicosatrienoic acids,EETs)及20-羥基二十碳四烯酸(20-HETE)。細(xì)胞的生長和分化、調(diào)節(jié)體溫及血壓等重要的生理作用均有這些代謝產(chǎn)物參與及發(fā)揮作用。此外,這些代謝產(chǎn)物在糖尿病等一系列人類重大疾病中,也發(fā)揮著相當(dāng)重要的作用。隨著人們對AA及其代謝產(chǎn)物的深入探索,在胰島β細(xì)胞的功能及胰島素抵抗中,AA及其代謝產(chǎn)物的作用受到了更多的關(guān)注和重視。本研究旨在分析AA細(xì)胞色素P450表氧化酶代謝產(chǎn)物EETs和20-HETE對胰島β細(xì)胞增殖和胰島素分泌的影響及其機(jī)制,為防治2型糖尿病提供理論依據(jù)。本研究以體外培養(yǎng)的胰島β細(xì)胞為研究對象,經(jīng)過細(xì)胞培養(yǎng)、傳代和活細(xì)胞計數(shù)后,用不同濃度EETs和20-HETE處理胰島β細(xì)胞,在培養(yǎng)到12h、24h和48h時,用CCK-8法檢測EETs和20-HETE/EETs對胰島β細(xì)胞增殖的影響;western blot檢測EETs和20-HETE/EETs對胰島(3細(xì)胞增殖影響的機(jī)制;ELISA檢測EETs和20-HETE/EETs對胰島β細(xì)胞分泌胰島素的影響和機(jī)制。結(jié)果顯示:(1)在12h和24h時,濃度為100nM的14,15-EET對胰島β細(xì)胞增殖具有顯著促進(jìn)作用,其中12h時為差異最明顯,而其他濃度的EETs和20-HETE的差異不顯著。在48h時,各組之間均沒有明顯差異性。(2)EETs處理組PI3K表達(dá)水平顯著上升,當(dāng)20-HETE/EETs聯(lián)合處理時,PI3K表達(dá)水平顯著降低;抑制劑處理組顯著阻止了 PI3K表達(dá)水平,但磷酸化AKT表達(dá)水平有較顯著增加;PI3K蛋白表達(dá)量在11,12-EET和14,15-EET中均無明顯差異。(3)在12h、24h和48h時,11,12-EET和14,15-EET均極顯著的增強(qiáng)了胰島β細(xì)胞分泌胰島素的能力,且在48h時最為顯著。其中,11,12-EET的作用略占優(yōu)勢。1:1020-HETE/11,12EET組在12h時對胰島β細(xì)胞分泌胰島素能力有顯著影響,但在24h和48 h時不顯著。而20-HETE/14,15EET組在三個時間段均無顯著影響。(4)在12h和24h時,11,12-EET組和14,15-EET組的胰島素含量明顯增加,20-HETE/11,12-EET組和20-HETE/14,15-EET組的胰島素含量無顯著增加。分別將11,12-EET和14,15-EET組與相對應(yīng)的抑制劑組作比較,差異均顯著。在48h時,11,12-EET 組、14,15-EET 組、20-HETE/11,12-EET 組和 20-HETE/14,15-EET 組的胰島素含量均有顯著增加。分別將11,12-EET、14,15-EET組、20-HETE/11,12-EET組和20-HETE/14,15-EET組與相對應(yīng)的抑制劑組作比較,差異均顯著。本研究表明,濃度為100nM的14,15-EET呈時間依賴性促進(jìn)胰島β細(xì)胞的增殖;11,12-EET和20-HETE/EET在促進(jìn)胰島β細(xì)胞增殖的過程中沒有顯著作用。11,12-EET和14,15-EET均極顯著地增強(qiáng)了胰島β細(xì)胞分泌胰島素的能力。其中,11,12-EET的作用略占優(yōu)勢。20-HETE/EET對胰島β細(xì)胞分泌胰島素的能力沒有顯著的影響。11,12-EET和14,15-EET可能是通過PI3K信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路促進(jìn)胰島β細(xì)胞胰島素分泌能力。這些說明11,12-EET和14,15-EET在胰島β細(xì)胞增殖和胰島素分泌的過程中發(fā)揮著重要的作用。
【圖文】：

內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文邐９—逡逑細(xì)胞的影響均不顯著，說明溶劑對胰島Ｐ細(xì)胞無影響。與空白組相比較，在逡逑和２４ｈ時，，濃度為ｌＯＯｎＭ的１４，１５－ＥＥＴ對胰島ｐ細(xì)胞的增殖具有顯著促進(jìn)作逡逑＜０．０１），其中１２ｈ時為差異最大，而其他組的差異不顯著。在４８ｈ時，各組逡逑沒有明顯差異性。隨著細(xì)胞培養(yǎng)時間的推移，１００邋ｎＭ邋１４，１５－ＥＥＴ組的ＣＣＫ－８逡逑活性有下降趨勢，其他組則沒有顯著差異。逡逑１２ｈ逡逑

卜時OC民~8相對活性FigZCCK-呂代加dy.朋tivityat24h
【學(xué)位授予單位】：內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：S852.2

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本文編號：2641774