發(fā)布時(shí)間：2020-04-26 13:06

【摘要】：念珠菌作為一種條件致病菌是引起真菌性奶牛乳房炎的主要病原菌之一。念珠菌致病性強(qiáng)弱與其毒力因子的攜帶情況有關(guān),這些毒力因子主要有二相性、溶血活性、細(xì)胞表面疏水性和磷脂酶活性等�？巳崾夏钪榫榷喾N念珠菌對(duì)多種抗真菌藥物具有天然耐藥性。營(yíng)養(yǎng)條件、pH值以及離子等能夠影響念珠菌耐藥性及毒力因子的表達(dá)。非白念的感染率日益上升,而對(duì)于非白念的相關(guān)研究較少。本課題通過(guò)對(duì)寧夏地區(qū)奶牛乳房炎非白色念珠菌分離株毒力因子、耐藥性及生理學(xué)特性研究,從而為了解和治療由念珠菌引起的奶牛乳房炎打下基礎(chǔ)。通過(guò)采集482份疑似感染真菌性乳房炎的奶牛奶樣,經(jīng)分離鑒定得到的60株念珠菌中包括14株克柔氏念珠菌(C.krusei)、6株近平滑念珠菌(C.parapsilosis)和4株近鄒褶念珠菌(Candida rugosa)等9種念珠菌;毒力因子檢測(cè)發(fā)現(xiàn),克柔氏念珠菌分離株CK1和近平滑念珠菌分離株CP1攜帶所檢測(cè)的全部毒力因子,近鄒褶念珠菌分離株CA1攜帶除磷脂酶外的三種毒力因子;藥物敏感性試驗(yàn)發(fā)現(xiàn),試驗(yàn)株CK1對(duì)酮康唑和伊曲康唑耐藥,對(duì)于試驗(yàn)所選四種耐藥基因(CDR1、CDR2、MDR1和ERG11)出現(xiàn)高表達(dá);CP1和CA1耐藥性較弱,對(duì)五種抗真菌藥物表現(xiàn)為敏感及劑量依賴。采用三唑類藥物、咪唑類藥物、氟尿嘧啶類藥物和多烯類藥物聯(lián)合作用,通過(guò)計(jì)算抑菌濃度指數(shù)分別得到協(xié)同、相加、無(wú)關(guān)和拮抗四種作用結(jié)果。通過(guò)模擬奶牛乳房?jī)?nèi)環(huán)境設(shè)置不同溫度及pH條件組,并分別添加Cu2+和抗生素作用于試驗(yàn)株,結(jié)果發(fā)現(xiàn)溫度達(dá)到42℃時(shí)只有克柔氏念珠菌能夠在沙氏瓊脂培養(yǎng)基表面生長(zhǎng),Cu2+濃度達(dá)到3.2μg/mL時(shí)開(kāi)始抑制念珠菌的生長(zhǎng),抗生素的添加能夠促進(jìn)試驗(yàn)株的生長(zhǎng)。隨著溫度、pH及Cu2+濃度的升高,各念珠菌對(duì)抗真菌藥物的敏感性升高。研究結(jié)果表明,感染寧夏地區(qū)奶牛真菌性乳房炎的病原菌主要為克柔氏念珠菌及近平滑念珠菌,該地區(qū)引起真菌性奶牛乳房炎的致病菌以非白色念珠菌為主。分離株攜帶多種毒力因子,克柔氏念珠菌表現(xiàn)出強(qiáng)疏水性;念珠菌分離株表現(xiàn)為多重耐藥,克柔氏念珠菌分離株耐藥性尤其嚴(yán)重,與其多藥耐藥基因及唑類藥物耐藥基因高表達(dá)有關(guān);念珠菌所攜帶的毒力因子及耐藥性強(qiáng)弱會(huì)因多種生理?xiàng)l件的改變而改變,溫度和pH的變化是影響念珠菌生長(zhǎng)情況、耐藥性及毒力因子表達(dá)情況的重要因素。Cu2+具有抑制念珠菌的生長(zhǎng)、增強(qiáng)念珠菌對(duì)抗真菌藥物的敏感性以及抑制毒力因子表達(dá)的作用�？股氐氖褂媚軌蛑苯哟龠M(jìn)念珠菌的生長(zhǎng),并且易使念珠菌產(chǎn)生耐藥性,這也是導(dǎo)致奶牛乳房炎癥狀嚴(yán)重的原因之一。
【圖文】：

圖２－１克柔氏念珠菌顯色狀態(tài)逡逑Ｆｉｇ邋２－１邋Ｃｏｌｏｒｉｍｅｔｒｉｃ邋ｓｔａｔｅ邋ｏｆ邋Ｃａｎｄｉｄａ邋ｋｒｕｓｅｉ逡逑

２．３．２．２革蘭氏染色鑒定結(jié)果逡逑將２５６株疑似酵母菌菌株經(jīng)革蘭氏染色后，通過(guò)顯微鏡觀察到全部呈陽(yáng)性，且細(xì)胞形態(tài)相似，逡逑菌體較大，呈卵圓形或橢圓形，部分菌株可形成菌絲態(tài)。（圖２－２）。逡逑圖２－２革蘭氏染色鏡檢（ｌＯＯＯｘ）逡逑Ｆｉｇ邋２－２邋Ｇｒａｍ邋ｓｔａｉｎ邋ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ邋（１００0ｘ）逡逑２．３．２．３分子生物學(xué)鑒定結(jié)果逡逑得到的２５６組基因組ＤＮＡ通過(guò)超微量分光光度計(jì)進(jìn)行濃度與純度的檢測(cè)ＯＤ２６０／ＯＤ２８０比值逡逑均在１．７－１．９之間。經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳后，得到約２５０ｂｐ大小的條帶，，大小與兩株標(biāo)準(zhǔn)株一致。（圖逡逑２－３）。逡逑Ｍｌ邋２邐３邐４邐５邐６邐７邐８邐９邐１０邐１１邐１２邐１３逡逑：（ＭＨ�。猓疬姡捱姡�，廣．．逡逑ｂｐ邐＞逡逑圖２－３邋ＩＴＳ區(qū)ＰＣＲ結(jié)果逡逑Ｆｉｇ邋２－３邋ＩＴＳ邋ｒｅｇｉｏｎ邋ＰＣＲ邋ｒｅｓｕｌｔ逡逑２．３．２．４基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時(shí)間質(zhì)譜（ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦＭＳ）鑒定結(jié)果逡逑通過(guò)質(zhì)譜鑒定后，２５６株疑似酵母菌中６０株念珠菌被鑒定為念珠菌屬，其中克柔氏念珠菌（Ｃ．逡逑ｋｒｕｓｅｉ）邋２３．３３％邋（〗４／６０）和近平滑念珠菌（Ｃ．邋ｐａｒａｐｓｉ】ｏｓｉｓ）】０％邋（６／６０）是本次分離所占比例最逡逑高的兩種菌。此外還分離出７種不常見(jiàn)的念珠菌菌種：解脂念珠菌（Ｃａｎｄｉｄａ邋ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａ）邋８．３３％逡逑（５／６０），葡萄牙念珠菌（Ｃａｎｄｉｄａ邋ｌｕｓｉｔａｎｉａｅ）邋８．３３％（５／６０），近部措念珠菌（Ｃａｎｄｉｄａｒｕｇｏｓａ）６．６７％逡逑（４／６０）
【學(xué)位授予單位】：寧夏大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：S852.611

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本文編號(hào)：2641530