【摘要】：蝙蝠屬于翼手目(Chiroptera),是唯一真正具有飛翔能力的同時(shí)也是自然界種類第二多的哺乳動(dòng)物。蝙蝠被認(rèn)為是許多重要人獸共患病毒的自然宿主,例如SARS-冠狀病毒、絲狀病毒、布尼亞病毒、杯狀病毒、肝炎病毒等。本課題組前期通過病毒宏基因組學(xué)技術(shù)對中國各地蝙蝠攜帶病毒進(jìn)行病原生態(tài)研究,發(fā)現(xiàn)了多種細(xì)小病毒和圓環(huán)病毒,在種類和數(shù)量上體現(xiàn)了豐富的多樣性。因此,本課題對我國廣西、廣東、云南三個(gè)省份蝙蝠攜帶的細(xì)小病毒遺傳多樣性進(jìn)行研究,同時(shí)首次構(gòu)建了蝙蝠圓環(huán)病毒的感染性克隆研究其基因組中特殊結(jié)構(gòu)的功能。細(xì)小病毒(Parvoviridae)種類眾多,目前有13屬60種,其宿主范圍廣泛,包括多種昆蟲和哺乳動(dòng)物。研究人員曾在蝙蝠體內(nèi)發(fā)現(xiàn)了多株博卡病毒和腺相關(guān)病毒,但從未系統(tǒng)研究過。本研究在中國廣西、廣東、云南三個(gè)省份共采集了1311份蝙蝠樣品,分別屬于狐蝠科、蹄蝠科、蝙蝠科和菊頭蝠科。應(yīng)用高通量測序?qū)ζ渲兴鶖y帶的病毒進(jìn)行研究,共注釋到病毒序列285788條,其中脊椎動(dòng)物病毒32272條,植物病毒2049條,噬菌體237912條,昆蟲病毒13555條。在脊椎動(dòng)物病毒序列中,數(shù)量最大的是細(xì)小病毒,注釋到了21809條,遍及細(xì)小病毒亞科的8個(gè)屬。序列分析組裝后進(jìn)行驗(yàn)證,共發(fā)現(xiàn)18種不同的細(xì)小病毒,PCR檢測發(fā)現(xiàn)在蝙蝠群體中的陽性率為2.8%-100%。同源性分析顯示,該18種蝙蝠細(xì)小病毒與ICTV參考毒株氨基酸同源性皆低于85%,全部為細(xì)小病毒科新種。對其中的10種細(xì)小病毒進(jìn)行基因組擴(kuò)增,利用普通PCR和染色體步移(genomewalking)等技術(shù)獲得了其全部或部分編碼區(qū)。遺傳演化分析顯示,該十種新型細(xì)小病毒有4種屬于Dependoparvovirus屬,2種屬于Bocaparvovirus屬,一種屬于Amdoparvovirus屬,一種屬于Tetraparvovirus屬,一種屬于Protoparvovirus屬,還有一種可能與另一蝙蝠細(xì)小病毒構(gòu)成一個(gè)新的屬。圓環(huán)病毒(Circoviridae)是世界上最小的DNA病毒之一,基因組只有1.7-2.2kb,含有兩個(gè)主要的開放閱讀框。圓環(huán)病毒宿主廣泛,可以感染哺乳動(dòng)物、鳥類、魚、昆蟲等,同時(shí)一些圓環(huán)病毒感染也與人的疾病有關(guān)。由于缺少合適的細(xì)胞系,圓環(huán)病毒很難在體外進(jìn)行分離培養(yǎng),無法深入的研究其生活特性和致病性。因此本研究首次構(gòu)建了蝙蝠圓環(huán)病毒感染性克隆,研究其基因組中一段特殊的多聚嘧啶結(jié)構(gòu)(poly-T)的功能。該poly-T由25-29個(gè)連續(xù)的胸腺嘧啶脫氧核糖核苷酸組成,位于基因組兩個(gè)開放閱讀框3’基因間隔區(qū)。我們構(gòu)建了兩個(gè)串連雙拷貝的蝙蝠圓環(huán)病毒感染性克隆——野生型(wtBatACV)和poly-T缺失型(ΔTBatACV),通過電鏡觀察和圓環(huán)病毒核酸檢測證明兩株蝙蝠圓環(huán)病毒被成功拯救。通過體外轉(zhuǎn)染和間接免疫熒光實(shí)驗(yàn)觀察,顯示兩種感染性克隆包裝病毒粒的速度、能力沒有明顯差別,推測該poly-T結(jié)構(gòu)對圓環(huán)病毒“生命周期”沒有影響。細(xì)小病毒和圓環(huán)病毒作為兩大類小型DNA病毒在自然界中具有非常廣泛的分布和多樣性。本研究系統(tǒng)調(diào)查了我國蝙蝠細(xì)小病毒的遺傳多樣性,在中國南部沿海三個(gè)省份不同地區(qū)的4個(gè)科5個(gè)屬共17種蝙蝠中,詳細(xì)調(diào)查了細(xì)小病毒亞科8個(gè)屬的細(xì)小病毒在蝙蝠中的存在情況,并發(fā)現(xiàn)了18種新型細(xì)小病毒,為中國細(xì)小病毒種類和分布提供了重要的基本數(shù)據(jù)。同時(shí)本研究首次構(gòu)建了蝙蝠圓環(huán)病毒感染性克隆,成功拯救出蝙蝠圓環(huán)病毒粒子,從功能上鑒定了其基因組中的poly-T結(jié)構(gòu),增加了我們對圓環(huán)病毒基因組的認(rèn)識。
【圖文】：

樣品采集地理信息Fig.1.1Geographicinformationofsamplecollection

第二篇 研究內(nèi)容 第一章 廣東、廣西、云南蝙蝠病毒宏基因組分析（Vespertilionidae）、狐蝠科（Pteropodidae）和菊頭蝠科（Rhinolophidae）。蝙蝠科的成員包括長翼蝠屬（Miniopterus）和黃蝠屬（Scotomannes）；菊頭蝠科的成員有菊頭蝠屬（Rhinolophus）、三葉蹄蝠屬（Aselliscus）和蹄蝠屬（Hipposideros）；狐蝠科（Pteropodidae）有果蝠屬（Rousettus）和犬蝠屬（Cynopterus）。廣東省采集到的蝙蝠種類較少，只有中蹄蝠、棕果蝠和犬蝠。云南省和廣西壯族自治區(qū)采集到的蝙蝠種類豐富，，分別采集到 10、14 種不同的蝙蝠樣品。
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：S852.65

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 ;Epidemiological Investigation and Genome Analysis of Duck Circovirus in Southern China[J];Virologica Sinica;2011年05期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前1條

1 何彪;蝙蝠病毒組學(xué)及其新病毒的發(fā)現(xiàn)與鑒定[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2014年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

1 夏樂樂;蝙蝠輪狀病毒的分離與鑒定[D];吉林農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

本文編號：2641454