發(fā)布時間：2017-03-23 14:20

  本文關(guān)鍵詞：江西部分地區(qū)豬源糞腸球菌耐藥性及毒力基因檢測與分析，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：糞腸球菌以往被認為是人類及動物的共生菌,但近十幾年來,其引起人和動物發(fā)生感染性疾病的報道越來越多,這主要是與其耐藥性和毒力增強有一定的關(guān)聯(lián)。為了解和評估該地區(qū)糞腸球菌對人和豬養(yǎng)殖業(yè)的潛在威脅,本研究通過選擇性培養(yǎng)基、PCR技術(shù)分離鑒定糞腸球菌,再對分離株進行藥敏試驗,最后采用PCR技術(shù)檢測糞腸球菌的相關(guān)耐藥基因及毒力基因,結(jié)果如下:2014年至2015年間從江西省7個不同地區(qū)部分豬場采集349份新鮮豬糞樣,其中197份腹瀉糞樣和152份正常糞樣。經(jīng)兩重選擇性培養(yǎng)篩選和特異性PCR擴增確定,共分離并鑒定出226株糞腸球菌,分離率為64.8%,其中腹瀉糞便糞腸球菌分離率(72.6%)高于正常糞便分離率(54.6%)。各地區(qū)中九江地區(qū)采集的樣本分離率最高(82.2%),宜春地區(qū)次之(80.4%),撫州地區(qū)分離率最低(35.9%),且各地區(qū)分離率總的來說差異顯著。采用紙片擴散法對226株豬源糞腸球菌進行7種抗菌藥物藥敏試驗。試驗結(jié)果顯示,江西省豬源糞腸球菌分離株多重耐藥性嚴重,多重耐藥分離株有117株(78.32%);其中分離株對紅霉素和多西環(huán)素耐藥率較高,分別為97.35%和92.48%,對環(huán)丙沙星和氟苯尼考耐藥率相對較低,分別為65.04%和61.95%,統(tǒng)計發(fā)現(xiàn),糞腸球菌分離株對多西環(huán)素的耐藥率存在顯著性差異;本研究僅在贛州地區(qū)發(fā)現(xiàn)3株對氨芐西林耐藥的菌株;未發(fā)現(xiàn)對萬古霉素或替考拉寧耐藥菌株。226株糞腸球菌分離株有14種耐藥表型,其中以紅霉素+環(huán)丙沙星+多西環(huán)素+氟苯尼考耐藥表型在分離株中比較流行。通過PCR方法對226株糞腸球菌分離株進行氟苯尼考耐藥基因檢測。試驗結(jié)果顯示,豬源糞腸球菌中攜帶fexA 158株(69.91%)、cfr 13株(5.75%)和fexB 10株(4.42%)。在本試驗中表型對氟苯尼考耐藥的菌株均檢出了耐藥基因,而有22株攜帶耐藥基因的菌株未表現(xiàn)出對氟苯尼考的耐藥;江西省豬源糞腸球菌分離株對氟苯尼考耐藥的機制主要是fexA基因介導的特異性外排機制。運用PCR方法對226株糞腸球菌進行6種毒力基因檢測,試驗結(jié)果顯示,98.23%的糞腸球菌至少攜帶一種毒力基因,各基因檢出率由高到低依次為efaA、ace、gelE、agg、esp和clyA。有170株(75.22%)分離株攜帶3~5種毒力基因;共檢出25種不同毒力基因型,攜帶gelE+ace+efaA基因型的分離株在江西省較流行。對226株糞腸球菌分離株進行β溶血和明膠溶解表型檢測,發(fā)現(xiàn)相應的基因型和表現(xiàn)型存在不完全一致的現(xiàn)象。糞腸球菌分離株所攜帶的毒力基因數(shù)與耐藥率之間不存在統(tǒng)計學意義,說明攜帶毒力基因數(shù)的多少與抗菌藥物的耐藥性之間不存在關(guān)聯(lián)。
【關(guān)鍵詞】：豬源糞腸球菌 耐藥性 耐藥基因 毒力基因
【學位授予單位】：江西農(nóng)業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：S852.61
【目錄】：

• 摘要6-7
• Abstract7-9
• 第一章 文獻綜述9-16
• 1 糞腸球菌研究進展9-10
• 2 糞腸球菌的耐藥性的研究進展10-12
• 2.1 糞腸球菌耐藥性產(chǎn)生的原因10
• 2.2 糞腸球菌的耐藥機制10-12
• 2.2.1 糞腸球菌對氟苯尼考耐藥機制10-12
• 3 糞腸球菌毒力基因的研究進展12-14
• 3.1 細胞溶血素（Cyl）12-13
• 3.2 明膠酶E（gelE）13
• 3.3 腸球菌表面蛋白（Esp）13
• 3.4 聚集物質(zhì)（AS）13-14
• 3.5 膠原結(jié)合蛋白黏附素（Ace）14
• 3.6 心內(nèi)膜炎抗原（EfaA）14
• 4 研究目的及意義14-15
• 5 研究內(nèi)容和研究方法15-16
• 第二章 江西省豬源糞腸球菌的分離鑒定16-25
• 1 材料與方法16-20
• 1.1 材料16-18
• 1.1.1 試驗菌株16
• 1.1.2 質(zhì)控菌株16
• 1.1.3 主要試劑16-17
• 1.1.4 主要儀器設(shè)備17
• 1.1.5 主要細菌培養(yǎng)基和試劑的配制17-18
• 1.1.6 克隆載體18
• 1.1.7 Top10感受態(tài)細胞18
• 1.2 方法18-20
• 1.2.1 樣本采集18
• 1.2.2 豬源糞腸球菌分離和初步鑒定18-19
• 1.2.3 豬源糞腸球菌的PCR鑒定19-20
• 1.2.4 豬源糞腸球菌的保存20
• 1.2.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計學處理20
• 2 結(jié)果與分析20-24
• 2.1 豬源糞腸球菌的分離鑒定20-22
• 2.2 豬源糞腸球菌PCR鑒定結(jié)果22
• 2.3 豬源糞腸球菌分離的情況22-24
• 3 討論24-25
• 第三章 江西省豬源糞腸球菌耐藥性分析25-33
• 1 材料與方法25-27
• 1.1 材料25-26
• 1.1.1 試驗菌株25
• 1.1.2 質(zhì)控菌株25
• 1.1.3 主要試劑25
• 1.1.4 主要儀器設(shè)備25-26
• 1.1.5 主要細菌培養(yǎng)基和試劑的配制26
• 1.1.6 抗菌藥物藥敏紙片26
• 1.2 方法26-27
• 1.2.1 紙片擴散法26
• 1.2.2 耐藥性的判定26-27
• 1.2.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計學處理27
• 2 結(jié)果與分析27-31
• 2.1 豬源糞腸球菌的耐藥率27-29
• 2.2 豬源糞腸球菌分離株在不同地區(qū)的耐藥特點29-30
• 2.3 豬源糞腸球菌的多重耐藥性分析30-31
• 3 討論31-33
• 第四章 江西省豬源糞腸球菌耐藥基因的流行特征分析33-41
• 1 材料與方法33-36
• 1.1 材料33-34
• 1.1.1 試驗菌株33
• 1.1.2 質(zhì)控菌株33
• 1.1.3 主要試劑33-34
• 1.1.4 主要儀器設(shè)備34
• 1.1.5 主要細菌培養(yǎng)基和試劑的配制34
• 1.1.6 克隆載體34
• 1.1.7 Top10感受態(tài)細胞34
• 1.2 方法34-36
• 1.2.1 豬源糞腸球菌的復蘇培養(yǎng)34-35
• 1.2.2 豬源糞腸球菌氟苯尼考耐藥基因的PCR技術(shù)檢測35-36
• 2 結(jié)果與分析36-39
• 2.1 豬源糞腸球菌氟苯尼考耐藥基因PCR電泳結(jié)果36-38
• 2.2 豬源糞腸球菌氟苯尼考耐藥基因型在江西省不同地區(qū)的分布情況38-39
• 3 討論39-41
• 第五章 江西省豬源糞腸球菌毒力基因的流行特征分析41-54
• 1 材料與方法41-44
• 1.1 材料41-42
• 1.1.1 試驗菌株41
• 1.1.2 質(zhì)控菌株41
• 1.1.3 主要試劑41-42
• 1.1.4 主要儀器設(shè)備42
• 1.1.5 主要細菌培養(yǎng)基和試劑的配制42
• 1.1.6 克隆載體42
• 1.1.7 Top10感受態(tài)細胞42
• 1.2 方法42-44
• 1.2.1 豬源糞腸球菌的復蘇培養(yǎng)42
• 1.2.2 豬源糞腸球菌毒力基因的PCR技術(shù)檢測42-44
• 1.2.3 部分毒力基因存在和表型相關(guān)性試驗44
• 1.2.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計學處理44
• 2 結(jié)果與分析44-52
• 2.1 豬源糞腸球菌毒力基因PCR電泳結(jié)果44-49
• 2.2 豬源糞腸球菌分離株攜帶毒力基因在江西省的分布情況49-50
• 2.3 豬源糞腸球菌耐藥性與毒力基因關(guān)系50-51
• 2.4 部分毒力基因存在和表型相關(guān)性試驗結(jié)果51-52
• 2.4.1 β溶血表型和clyA基因相關(guān)性試驗結(jié)果51
• 2.4.2 明膠水解表型和gelE基因相關(guān)性試驗結(jié)果51-52
• 3 討論52-54
• 全文總結(jié)54-55
• 參考文獻55-62
• 致謝62

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