【摘要】：藍舌病病毒(Bluetongue virus,BTV)引起家養(yǎng)或野生的反芻動物發(fā)生藍舌病(Bluetongue,BT)。該病是由庫蠓等昆蟲媒介傳播的,是一種典型的非接觸性病毒性傳染病。目前,這一疾病是OIE劃定的通報類疫病之一,我國己將其規(guī)定為一類動物傳染病。藍舌病病毒屬于呼腸孤病毒科環(huán)狀病毒屬,BTV粒子為二十面立體對稱,圓形,無囊膜,直徑約53~60 nm,呈現(xiàn)中空的短圓柱狀。核心部分是由10個線性雙鏈RNA所組成。BTV外殼主要由VP2和VP5構成,VP2是BTV型特異性抗原。病毒內殼即核心衣殼主要由VP3和VP7構成。VP7在核衣殼內主要是以三聚體的形式存在,是BTV群特異性抗原。BT有26個血清型,且各血清型之間無交叉保護作用。制備具有群特異性阻斷效果的自主研發(fā)ELISA檢測試劑盒,為我國的流行病學調查和監(jiān)測提供快速、安全及有效的技術手段勢在必行。將已構建好的表達8型藍舌病病毒VP7蛋白的重組大腸桿菌pET28a-8S7/BL21菌種進行IPTG誘導表達后,利用樹脂對該蛋白進行純化,間接ELISA結果表明該蛋白能夠與藍舌病病毒24個型的標準陽性血清發(fā)生特異性反應,表明表達的8型藍舌病病毒VP7蛋白具有良好的群特異性反應原性。以VP7蛋白作為包被抗原、抗8型藍舌病病毒VP7蛋白的單克隆抗體6D11作為競爭抗體,建立了檢測BTV的競爭性ELISA檢測方法,并通過特異性實驗,符合率實驗、重復性實驗、敏感性分析、保存期實驗驗證該檢測方法。利用本研究建立的C-ELISA檢測方法與商品化的藍舌病抗體ELISA檢測試劑盒相比較,同時檢測本實驗室保存的不同地區(qū)的山羊、綿羊及牛的172份血清樣本,樣品檢測結果符合率達98.84%,說明該方法可以用于BT的流行病學調查和監(jiān)測工作,該方法的建立為我國BT血清學監(jiān)測提供了安全、快速、準確的技術手段。
【圖文】：

SDS-PAGE鑒定VP7蛋白純化

Western blot 鑒定 VP7 蛋白city of VP7 protein was iden定V1-24 陽性血清對 VP7 蛋白兔抗綿羊 IgG 1∶3000 稀 蛋白抗原性較好且具有群
【學位授予單位】：東北農業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：S852.4

【參考文獻】

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本文編號：2637425