【摘要】：藍(lán)舌病病毒(Bluetongue virus,BTV)引起家養(yǎng)或野生的反芻動(dòng)物發(fā)生藍(lán)舌病(Bluetongue,BT)。該病是由庫(kù)蠓等昆蟲(chóng)媒介傳播的,是一種典型的非接觸性病毒性傳染病。目前,這一疾病是OIE劃定的通報(bào)類(lèi)疫病之一,我國(guó)己將其規(guī)定為一類(lèi)動(dòng)物傳染病。藍(lán)舌病病毒屬于呼腸孤病毒科環(huán)狀病毒屬,BTV粒子為二十面立體對(duì)稱(chēng),圓形,無(wú)囊膜,直徑約53~60 nm,呈現(xiàn)中空的短圓柱狀。核心部分是由10個(gè)線性雙鏈RNA所組成。BTV外殼主要由VP2和VP5構(gòu)成,VP2是BTV型特異性抗原。病毒內(nèi)殼即核心衣殼主要由VP3和VP7構(gòu)成。VP7在核衣殼內(nèi)主要是以三聚體的形式存在,是BTV群特異性抗原。BT有26個(gè)血清型,且各血清型之間無(wú)交叉保護(hù)作用。制備具有群特異性阻斷效果的自主研發(fā)ELISA檢測(cè)試劑盒,為我國(guó)的流行病學(xué)調(diào)查和監(jiān)測(cè)提供快速、安全及有效的技術(shù)手段勢(shì)在必行。將已構(gòu)建好的表達(dá)8型藍(lán)舌病病毒VP7蛋白的重組大腸桿菌pET28a-8S7/BL21菌種進(jìn)行IPTG誘導(dǎo)表達(dá)后,利用樹(shù)脂對(duì)該蛋白進(jìn)行純化,間接ELISA結(jié)果表明該蛋白能夠與藍(lán)舌病病毒24個(gè)型的標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性血清發(fā)生特異性反應(yīng),表明表達(dá)的8型藍(lán)舌病病毒VP7蛋白具有良好的群特異性反應(yīng)原性。以VP7蛋白作為包被抗原、抗8型藍(lán)舌病病毒VP7蛋白的單克隆抗體6D11作為競(jìng)爭(zhēng)抗體,建立了檢測(cè)BTV的競(jìng)爭(zhēng)性ELISA檢測(cè)方法,并通過(guò)特異性實(shí)驗(yàn),符合率實(shí)驗(yàn)、重復(fù)性實(shí)驗(yàn)、敏感性分析、保存期實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證該檢測(cè)方法。利用本研究建立的C-ELISA檢測(cè)方法與商品化的藍(lán)舌病抗體ELISA檢測(cè)試劑盒相比較,同時(shí)檢測(cè)本實(shí)驗(yàn)室保存的不同地區(qū)的山羊、綿羊及牛的172份血清樣本,樣品檢測(cè)結(jié)果符合率達(dá)98.84%,說(shuō)明該方法可以用于BT的流行病學(xué)調(diào)查和監(jiān)測(cè)工作,該方法的建立為我國(guó)BT血清學(xué)監(jiān)測(cè)提供了安全、快速、準(zhǔn)確的技術(shù)手段。
【圖文】：

SDS-PAGE鑒定VP7蛋白純化

Western blot 鑒定 VP7 蛋白city of VP7 protein was iden定V1-24 陽(yáng)性血清對(duì) VP7 蛋白兔抗綿羊 IgG 1∶3000 稀 蛋白抗原性較好且具有群
【學(xué)位授予單位】：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類(lèi)號(hào)】：S852.4

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2637425