【摘要】：抗生素和其他抗菌藥物的發(fā)展降低了各種動(dòng)物的發(fā)病率和死亡率,也增加了人類壽命。隨著抗生素在動(dòng)物中的廣泛使用,細(xì)菌對(duì)喹諾酮類藥物的耐藥性也日趨嚴(yán)重,特別是大腸桿菌對(duì)喹諾酮類藥物的耐藥率呈逐年增加的趨勢(shì)。大腸桿菌(Escherichia coli)是危害畜禽甚至人類健康最常見的致病菌之一,因其復(fù)雜的抗原性,多樣的血清型、易變且多變的臨床癥狀和病理變化,并且易與病毒性疾病和其它細(xì)菌性疾病并發(fā),給畜牧業(yè)養(yǎng)殖帶來經(jīng)濟(jì)損失,防治E.coli感染己成為一個(gè)世界難題。本試驗(yàn)通過結(jié)合前期實(shí)驗(yàn)室的研究,選擇粉防己堿進(jìn)行研究。首先,研究其是否對(duì)喹諾酮類藥物耐藥的大腸桿菌有耐藥逆轉(zhuǎn)作用;其次,研究粉防己堿對(duì)耐喹諾酮類藥大腸桿菌耐藥基因的影響;同時(shí),研究粉防己堿對(duì)大腸桿菌外膜的通透性的影響;最后,通過對(duì)耐藥菌逆轉(zhuǎn)機(jī)制的初步探究,為開發(fā)粉防己堿作為耐喹諾酮類藥物大腸桿菌的耐藥逆轉(zhuǎn)劑研制提供理論依據(jù)。1、粉防己堿對(duì)臨床分離耐喹諾酮類藥大腸桿菌的耐藥性逆轉(zhuǎn)作用參照CLSI2013方法,采用微量肉湯稀釋法測(cè)定環(huán)丙沙星、恩諾沙星、粉防己堿對(duì)實(shí)驗(yàn)室的大腸桿菌的最小抑菌濃度(MIC);使用含1/2×MIC濃度喹諾酮類藥營(yíng)養(yǎng)肉湯、1/2×MIC濃度粉防己堿營(yíng)養(yǎng)肉湯、1/2×MIC濃度喹諾酮類藥聯(lián)合1/2MIC×濃度粉防己堿營(yíng)養(yǎng)肉湯、營(yíng)養(yǎng)肉湯對(duì)大腸桿菌進(jìn)行殺菌試驗(yàn),繪制時(shí)間-殺菌曲線;結(jié)果:從試驗(yàn)的時(shí)間-殺菌曲線結(jié)果看,1/2×MIC濃度的粉防己堿對(duì)大腸桿菌的抑菌效果微弱,但和1/2×MIC濃度的環(huán)丙沙星、1/2×MIC濃度的恩諾沙星聯(lián)合后可以降低喹諾酮類藥物對(duì)耐藥菌的MIC,提高耐藥菌的敏感性。結(jié)論:粉防己堿具有增強(qiáng)喹諾酮類藥物乳酸環(huán)丙沙星、恩諾沙星對(duì)耐喹諾酮類大腸桿菌的殺滅作用。2、粉防己堿處理臨床分離的耐藥大腸桿菌用1/4×MIC濃度的粉防己堿培養(yǎng)耐藥大腸桿菌,以獲得對(duì)粉防己堿耐藥性穩(wěn)定的大腸桿菌菌株,最后用喹諾酮類藥物測(cè)定粉防己堿處理后腸桿菌的MIC。將上面分組的細(xì)菌用1/4×MIC TET濃度的肉湯培養(yǎng),獲得性狀穩(wěn)定的大腸桿菌。同時(shí),用空白肉湯培養(yǎng)組做陰性對(duì)照。結(jié)果:空白肉湯培養(yǎng)后喹諾酮類對(duì)大腸桿菌的MIC沒有變化;粉防己堿對(duì)培養(yǎng)后的大腸桿菌12-2、16-1、46-1-2、77-1、19-2-1、3-1-3的MIC值均降低,分別降低32、20、32、16、32、20倍。恩諾沙星對(duì)培養(yǎng)后的大腸桿菌12-2、16-1、46-1-2、77-1、19-2-1、3-1-3的MIC值均降低,分別降低10、4、40、40、2、1.25倍。結(jié)論:粉防己堿聯(lián)合喹諾酮類藥使用時(shí)可以增加抗菌藥的殺菌作用,降低耐喹諾酮類藥大腸桿菌對(duì)恩諾沙星的耐藥性,粉防己堿有逆轉(zhuǎn)耐喹諾酮類藥大腸桿菌耐藥性的作用。3、粉防己堿對(duì)大腸桿菌耐喹諾酮類藥的基因的影響用臨床耐藥大腸桿菌用1/4×MIC濃度粉防己堿培養(yǎng)后作為研究對(duì)象,比較粉防己堿培養(yǎng)前后大腸桿菌的喹諾酮類藥物耐藥基因aac(6’)-Ib-cr、oqx AB、qnr A、qep A存在情況,及aac(6’)-Ib-cr、oqx AB m RNA的表達(dá)量。結(jié)果:在粉防己堿培養(yǎng)后大腸桿菌46-1-2耐耐喹諾酮類藥基因aac(6’)-Ib-cr、oqx AB丟失,大腸桿菌77-1耐耐喹諾酮類藥基因oqx AB丟失;在粉防己堿培養(yǎng)后耐喹諾酮類藥大腸桿菌12-2的耐藥基因aac(6’)-Ib-cr m RNA的表達(dá)量降低。結(jié)論:粉防己堿對(duì)耐喹諾酮類藥大腸桿菌耐藥逆轉(zhuǎn)作用機(jī)制與降低耐喹諾酮類藥基因aac(6’)-Ib-cr m RNA的表達(dá)量有關(guān)。4、粉防己堿對(duì)大腸桿菌外膜通透性的影響以粉防己堿加入前后大腸桿菌作為研究對(duì)象,粉防己堿的PBS液處理大腸桿菌,另一組加入PBS液做陰性對(duì)照;再加入頭孢硝噻吩,用酶標(biāo)儀檢測(cè)測(cè)熒光隨時(shí)間的變化。比較加入粉防己堿的大腸桿菌外膜通透性變化情況。結(jié)果:加入粉防己堿處理的大腸桿菌和陰性對(duì)照相比,在490nm處的吸光度熒光隨時(shí)間的增加更多。結(jié)論:粉防己堿對(duì)耐藥大腸桿菌外膜通透性有一定影響,并且會(huì)在一定程度上增加大腸桿菌外膜的通透性,但對(duì)本試驗(yàn)中的細(xì)菌對(duì)喹諾酮類藥的耐藥性無影響。
【圖文】：

化培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。③并分別在 0、1、2、3、4h 時(shí)吸取培養(yǎng)物 1mL，加入滅菌生理鹽水進(jìn)行 1倍稀釋（x=1，2，3，4......），經(jīng)過多次稀釋后吸取 100μL 均勻涂抹于計(jì)數(shù)瓊脂平皿中。通過預(yù)實(shí)驗(yàn)確定不同時(shí)間點(diǎn)菌液的稀釋倍數(shù)，使培養(yǎng)后計(jì)數(shù)平皿的細(xì)菌菌落個(gè)數(shù)于 40～200 之間。④統(tǒng)計(jì)不同時(shí)間點(diǎn)的菌落數(shù)，以培養(yǎng)時(shí)間為橫坐標(biāo)，細(xì)菌菌濃度為縱坐標(biāo)繪制營(yíng)養(yǎng)肉湯、乳酸環(huán)丙沙星、粉防己堿、及乳酸環(huán)丙沙星聯(lián)合粉防己堿對(duì)大腸桿菌的時(shí)間-殺菌曲線,每次做 3 組平行試驗(yàn)。3.1.2.4 結(jié)果繪制的不同濃度藥物及聯(lián)合使用時(shí)對(duì)耐藥大腸桿菌的影響與時(shí)間的關(guān)系曲線，如圖 3-1-1 至 3-1-6。由本次試驗(yàn)的時(shí)間-殺菌曲線可見大腸桿菌在營(yíng)養(yǎng)肉中正常生長(zhǎng)；在 1/2×MIC 濃度的環(huán)丙沙星、1/2×MIC 濃度的粉防己堿對(duì)大腸桿菌沒有明顯的抑制作用；在 1/2×MIC 濃度的環(huán)丙沙星下，，加了 160 μg/mL 的防己堿肉湯中耐藥菌的生長(zhǎng)受到明顯抑制。

圖 3-1-2 粉防己堿聯(lián)合環(huán)丙沙星對(duì)大腸桿菌 19-2-1 的時(shí)間-殺菌曲線Fig3-1-2 Time kill kinetics curves of E.coli(19-2-1) for CIP with and without tetrandrine
【學(xué)位授予單位】：西南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：S853.74

【參考文獻(xiàn)】

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4 劉云寧;李小鳳;韓旭穎;姜愛雯;王淑珍;;大腸埃希菌對(duì)氟喹諾酮類藥物耐藥機(jī)制的研究進(jìn)展[J];河北醫(yī)藥;2015年02期

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6 季萍;張瓊;張朝霞;;新疆地區(qū)2012年度細(xì)菌耐藥監(jiān)測(cè)分析[J];中國(guó)抗生素雜志;2014年05期

7 姚明曉;苑廣盈;聞新棉;;主動(dòng)外排系統(tǒng)介導(dǎo)細(xì)菌多重耐藥的研究進(jìn)展[J];現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué);2014年01期

8 譚蓉;鄭志昌;楊繼紅;孫為民;宋琪雯;;aac(6')-Ib-cr基因是微生物對(duì)喹諾酮類抗菌藥的又一耐藥途徑[J];藥品評(píng)價(jià);2013年16期

9 佟海山;徐峰;鄧旭明;;基因突變和外膜結(jié)構(gòu)改變對(duì)細(xì)菌耐藥性影響的研究[J];中國(guó)獸醫(yī)雜志;2013年07期

10 游春芳;周利民;張肅川;殷明剛;伍歡;;大腸埃希菌中質(zhì)粒介導(dǎo)的喹諾酮耐藥基因qnrB的檢測(cè)[J];四川醫(yī)學(xué);2013年05期

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10 肖霞;粉防己堿逆轉(zhuǎn)藥物難治性癲癇耐藥的研究[D];復(fù)旦大學(xué);2012年

本文編號(hào)：2633547