【摘要】：黃曲霉毒素因其分布廣毒性強,一直以來對畜牧生產(chǎn)都是一個不可忽視的威脅。而對于奶牛來說,黃曲霉毒素不僅毒害奶牛自身同時也可通過牛奶間接威脅人類健康。白藜蘆醇在近二十年間被科研人員進行了大量的研究,且已表現(xiàn)出對動物健康有一定的積極作用。本試驗以MAC-T細胞作為研究對象,結合黃曲霉毒素B1(AFB1)和白藜蘆醇對乳腺上皮細胞的作用效果進行一系列研究。旨在了解白藜蘆醇是否能夠抵御AFB1在乳腺上皮細胞上的毒害作用,以及最佳作用條件。分別用不同濃度的AFB1和不同濃度的白藜蘆醇處理MAC-T細胞。通過對每個處理下的細胞活力、形態(tài)以及抗性因子的表達等方面來評估其作用效果,挑選出恰當?shù)奶幚頋舛冗M行下一步研究。本試驗使用AFB1處理MAC-T細胞24 h,結果顯示大于等于4 mg/L的處理使細胞活力顯著下降。同樣在大于等于4 mg/L AFB1處理時,MAC-T細胞表現(xiàn)出總抗氧化能力和線粒體膜電位的顯著下降。但AFB1對細胞形態(tài)沒有明顯作用。通過qPCR檢測炎性因子及Nrf2信號通路基因轉錄水平,可見TNF-α、IL-1β和IL-6均沒有明顯的濃度相關性變化,Nrf2和Keap1基因的轉錄沒有顯著增加,相反其下游抗應激基因NQO1的轉錄量隨AFB1濃度增加而增加;IL-8在大于等于6 mg/L AFB1處理下發(fā)生顯著上調表達。在10 mg/L時HSP70發(fā)生顯著下調表達。本試驗使用白藜蘆醇對MAC-T細胞進行相同的檢測,發(fā)現(xiàn)隨著白藜蘆醇的濃度增加其細胞毒性也隨之增大,在濃度達到30 mg/L時顯著下降。而白藜蘆醇使細胞總抗氧化能力增加,在40 mg/L時達到顯著且線粒體膜電位發(fā)生顯著超極化。值得注意的是,白藜蘆醇在試驗中表現(xiàn)出抑制細胞增殖的現(xiàn)象。同時不同濃度的白藜蘆醇處理MAC-T時,以10 mg/L為界,細胞骨架產(chǎn)生兩種截然相反的變化,即,低濃度下促進細胞邊緣片狀偽足的形成,高濃度下抑制細胞邊緣片狀偽足形成。與上一試驗中AFB1處理結果類似,白藜蘆醇對炎性因子的轉錄調節(jié)并不一致。TNF-α顯著下調表達;IL-1β隨處理濃度增加而顯著增加;IL-8在處理濃度超過40 mg/L時發(fā)生上調表達。但是IL-6則在低處理濃度下表達上調高處理濃度下下調表達。對于Nrf2信號通路中的基因轉錄,在大于20 mg/L的白藜蘆醇作用下均發(fā)生顯著增加。綜合前兩個試驗的結果對AFB1和白藜蘆醇交互作用劑量進行選擇,進一步確定了4 mg/L AFB1與10 mg/L的白藜蘆醇得作用劑量組合。試驗結果證實了白藜蘆醇可以緩解AFB1在MAC-T細胞上的細胞毒性,包括減少MAC-T細胞在AFB1作用下增加的ROS,調節(jié)線粒體膜電位和抑制細胞凋亡。并且通過qPCR測定Nrf2信號傳導途徑中mRNA轉錄物的表達,白藜蘆醇也顯示出良好的調節(jié)作用。因此,證明白藜蘆醇對MAC-T細胞中的AFB1的毒性具有干預作用。結論:本研究表明白藜蘆醇可以改善AFB1對MAC-T細胞的損傷;但是需要控制白藜蘆醇的使用劑量,高劑量的白藜蘆醇依舊存在毒性。因此,使用時必須控制白藜蘆醇劑量。
【圖文】：

圖 1 幾種主要的黃曲霉毒素類型Figure 1 Several major aflatoxin typesAFB1 在黃曲霉毒素中具有最強的毒性，這也與其致癌力密切相關。毒素 B 1 是一種公認的高致癌特性、高遺傳毒性物質，會增加人類和動癥等慢性疾病的風險，1993 年已被國際癌癥研究機構（IARC）列為了癌物。AFB1 能夠引起植物和動物細胞的起染色體畸變和 DNA 損傷。A過對遺傳物質的破壞導致畸形發(fā)生，同時它也抑制蛋白質合成、影響細和胎兒發(fā)育。在懷孕奶牛中表現(xiàn)為死胎、畸形胎和流產(chǎn)等現(xiàn)象。2 黃曲霉毒素的產(chǎn)生黃曲霉毒素是對人類和動物的健康有很大危害的化合物，，它們會造成肝臟損傷，以及具有致突變，致畸和致癌作用。來自三個不同種屬的真

第一篇 文獻綜述 第 2 章 白藜蘆醇的研究概況異構體存在：順式-（Z）和反式-（E）。其可在腸道中可被糖苷酶分解釋放出白藜蘆醇，發(fā)揮其藥理作用。在紫外線的照射下反式結構會發(fā)生光異構化成順式結構。一項研究表明，紫外線照射順式白藜蘆醇會引起進一步的光化學反應，產(chǎn)生一種名為 Resveratrone‖的熒光分子。反式異構體生理活性強于順式異構體.
【學位授予單位】：吉林大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：S859.8

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本文編號：2632256