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白藜蘆醇干預(yù)黃曲霉毒素B1對(duì)牛乳腺上皮細(xì)胞損傷的研究

發(fā)布時(shí)間:2020-04-18 15:47
【摘要】:黃曲霉毒素因其分布廣毒性強(qiáng),一直以來(lái)對(duì)畜牧生產(chǎn)都是一個(gè)不可忽視的威脅。而對(duì)于奶牛來(lái)說(shuō),黃曲霉毒素不僅毒害奶牛自身同時(shí)也可通過(guò)牛奶間接威脅人類(lèi)健康。白藜蘆醇在近二十年間被科研人員進(jìn)行了大量的研究,且已表現(xiàn)出對(duì)動(dòng)物健康有一定的積極作用。本試驗(yàn)以MAC-T細(xì)胞作為研究對(duì)象,結(jié)合黃曲霉毒素B1(AFB1)和白藜蘆醇對(duì)乳腺上皮細(xì)胞的作用效果進(jìn)行一系列研究。旨在了解白藜蘆醇是否能夠抵御AFB1在乳腺上皮細(xì)胞上的毒害作用,以及最佳作用條件。分別用不同濃度的AFB1和不同濃度的白藜蘆醇處理MAC-T細(xì)胞。通過(guò)對(duì)每個(gè)處理下的細(xì)胞活力、形態(tài)以及抗性因子的表達(dá)等方面來(lái)評(píng)估其作用效果,挑選出恰當(dāng)?shù)奶幚頋舛冗M(jìn)行下一步研究。本試驗(yàn)使用AFB1處理MAC-T細(xì)胞24 h,結(jié)果顯示大于等于4 mg/L的處理使細(xì)胞活力顯著下降。同樣在大于等于4 mg/L AFB1處理時(shí),MAC-T細(xì)胞表現(xiàn)出總抗氧化能力和線粒體膜電位的顯著下降。但AFB1對(duì)細(xì)胞形態(tài)沒(méi)有明顯作用。通過(guò)qPCR檢測(cè)炎性因子及Nrf2信號(hào)通路基因轉(zhuǎn)錄水平,可見(jiàn)TNF-α、IL-1β和IL-6均沒(méi)有明顯的濃度相關(guān)性變化,Nrf2和Keap1基因的轉(zhuǎn)錄沒(méi)有顯著增加,相反其下游抗應(yīng)激基因NQO1的轉(zhuǎn)錄量隨AFB1濃度增加而增加;IL-8在大于等于6 mg/L AFB1處理下發(fā)生顯著上調(diào)表達(dá)。在10 mg/L時(shí)HSP70發(fā)生顯著下調(diào)表達(dá)。本試驗(yàn)使用白藜蘆醇對(duì)MAC-T細(xì)胞進(jìn)行相同的檢測(cè),發(fā)現(xiàn)隨著白藜蘆醇的濃度增加其細(xì)胞毒性也隨之增大,在濃度達(dá)到30 mg/L時(shí)顯著下降。而白藜蘆醇使細(xì)胞總抗氧化能力增加,在40 mg/L時(shí)達(dá)到顯著且線粒體膜電位發(fā)生顯著超極化。值得注意的是,白藜蘆醇在試驗(yàn)中表現(xiàn)出抑制細(xì)胞增殖的現(xiàn)象。同時(shí)不同濃度的白藜蘆醇處理MAC-T時(shí),以10 mg/L為界,細(xì)胞骨架產(chǎn)生兩種截然相反的變化,即,低濃度下促進(jìn)細(xì)胞邊緣片狀偽足的形成,高濃度下抑制細(xì)胞邊緣片狀偽足形成。與上一試驗(yàn)中AFB1處理結(jié)果類(lèi)似,白藜蘆醇對(duì)炎性因子的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)并不一致。TNF-α顯著下調(diào)表達(dá);IL-1β隨處理濃度增加而顯著增加;IL-8在處理濃度超過(guò)40 mg/L時(shí)發(fā)生上調(diào)表達(dá)。但是IL-6則在低處理濃度下表達(dá)上調(diào)高處理濃度下下調(diào)表達(dá)。對(duì)于Nrf2信號(hào)通路中的基因轉(zhuǎn)錄,在大于20 mg/L的白藜蘆醇作用下均發(fā)生顯著增加。綜合前兩個(gè)試驗(yàn)的結(jié)果對(duì)AFB1和白藜蘆醇交互作用劑量進(jìn)行選擇,進(jìn)一步確定了4 mg/L AFB1與10 mg/L的白藜蘆醇得作用劑量組合。試驗(yàn)結(jié)果證實(shí)了白藜蘆醇可以緩解AFB1在MAC-T細(xì)胞上的細(xì)胞毒性,包括減少M(fèi)AC-T細(xì)胞在AFB1作用下增加的ROS,調(diào)節(jié)線粒體膜電位和抑制細(xì)胞凋亡。并且通過(guò)qPCR測(cè)定Nrf2信號(hào)傳導(dǎo)途徑中mRNA轉(zhuǎn)錄物的表達(dá),白藜蘆醇也顯示出良好的調(diào)節(jié)作用。因此,證明白藜蘆醇對(duì)MAC-T細(xì)胞中的AFB1的毒性具有干預(yù)作用。結(jié)論:本研究表明白藜蘆醇可以改善AFB1對(duì)MAC-T細(xì)胞的損傷;但是需要控制白藜蘆醇的使用劑量,高劑量的白藜蘆醇依舊存在毒性。因此,使用時(shí)必須控制白藜蘆醇劑量。
【圖文】:

黃曲霉毒素,畸形發(fā)生,慢性疾病,肝臟損傷


圖 1 幾種主要的黃曲霉毒素類(lèi)型Figure 1 Several major aflatoxin typesAFB1 在黃曲霉毒素中具有最強(qiáng)的毒性,這也與其致癌力密切相關(guān)。毒素 B 1 是一種公認(rèn)的高致癌特性、高遺傳毒性物質(zhì),會(huì)增加人類(lèi)和動(dòng)癥等慢性疾病的風(fēng)險(xiǎn),1993 年已被國(guó)際癌癥研究機(jī)構(gòu)(IARC)列為了癌物。AFB1 能夠引起植物和動(dòng)物細(xì)胞的起染色體畸變和 DNA 損傷。A過(guò)對(duì)遺傳物質(zhì)的破壞導(dǎo)致畸形發(fā)生,同時(shí)它也抑制蛋白質(zhì)合成、影響細(xì)和胎兒發(fā)育。在懷孕奶牛中表現(xiàn)為死胎、畸形胎和流產(chǎn)等現(xiàn)象。2 黃曲霉毒素的產(chǎn)生黃曲霉毒素是對(duì)人類(lèi)和動(dòng)物的健康有很大危害的化合物,,它們會(huì)造成肝臟損傷,以及具有致突變,致畸和致癌作用。來(lái)自三個(gè)不同種屬的真

白藜蘆醇,異構(gòu)體,順式


第一篇 文獻(xiàn)綜述 第 2 章 白藜蘆醇的研究概況異構(gòu)體存在:順式-(Z)和反式-(E)。其可在腸道中可被糖苷酶分解釋放出白藜蘆醇,發(fā)揮其藥理作用。在紫外線的照射下反式結(jié)構(gòu)會(huì)發(fā)生光異構(gòu)化成順式結(jié)構(gòu)。一項(xiàng)研究表明,紫外線照射順式白藜蘆醇會(huì)引起進(jìn)一步的光化學(xué)反應(yīng),產(chǎn)生一種名為 Resveratrone‖的熒光分子。反式異構(gòu)體生理活性強(qiáng)于順式異構(gòu)體.
【學(xué)位授予單位】:吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【學(xué)位授予年份】:2019
【分類(lèi)號(hào)】:S859.8

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