【摘要】：本研究的目的是確定屎腸球菌EF1細(xì)胞壁脂磷壁酸提取和純化的適宜條件,為獲取高純度且質(zhì)量穩(wěn)定的脂磷壁酸提供切實可行的方法。采用活菌計數(shù)法研究屎腸球菌EF1的生長規(guī)律;用離心法收集細(xì)菌細(xì)胞研究細(xì)菌生物量;用水飽和正丁醇提取脂磷壁酸,研究細(xì)胞破壁時間和正丁醇萃取時間對提取物得率的影響;研究疏水作用層析和離子交換作用層析對脂磷壁酸的純化效果,為日后獲取高純度且質(zhì)量穩(wěn)定的脂磷壁酸用于機(jī)理研究奠定基礎(chǔ)。主要研究結(jié)果如下:(1)屎腸球菌EF1在MRS培養(yǎng)基37℃靜止培養(yǎng)24 h達(dá)到對數(shù)生長末期,36 h之后進(jìn)入穩(wěn)定期。在對數(shù)生長末期的生物量最高,為3.22 g/L,比穩(wěn)定期增加22.43%(P0.01)。細(xì)菌離心15 min得到的生物量比12 min提高12.20%(P0.05)。(2)細(xì)胞破壁70 min和正丁醇提取60 min的屎腸球菌EF1的脂磷壁酸得率最高,為2.27%(P0.01)。(3)屎腸球菌EF1的脂磷壁酸粗提物用辛基瓊脂糖凝膠層析時,用35%正丙醇乙酸鈉緩沖液洗脫脂磷壁酸比用15-60%線性梯度洗脫效果更好。DEAE離子交換層析對脂磷壁酸的進(jìn)一步純化效果不明顯。結(jié)論:屎腸球菌EF1宜在對數(shù)生長末期收獲,離心15 min收集細(xì)胞。細(xì)胞破壁時間和正丁醇提取時間對該菌株的脂磷壁酸提取得率有顯著交互效應(yīng)。脂磷壁酸粗提物用辛基瓊脂糖凝膠層析時,適宜采用等度洗脫,不必要再進(jìn)行DEAE離子交換層析。
【圖文】：

廣西大學(xué)碩士學(xué)位論文益生屎月務(wù)球菌的細(xì)胞壁月旨y壁酸提取和匕條件的研究逡逑乙酰氨基葡萄糖和Ｎ－乙酰胞壁酸交替單元組成［３］。革蘭氏陽性菌細(xì)胞壁的肽聚糖逡逑一共有４０－８０層，厚度約２０－８０邋ｎｍ，占細(xì)胞干重的９０％左右［４＿５］。細(xì)胞壁這些厚逡逑厚的肽聚糖層不僅決定了細(xì)菌細(xì)胞壁的強(qiáng)度，而且還穩(wěn)定細(xì)胞膜，維持細(xì)胞的逡逑特定形狀［３］。磷壁酸是革蘭氏陽性菌細(xì)胞壁特有的成分（革蘭氏陰性菌沒有該成逡逑分），占肽聚糖層的２０－４０％，能夠增強(qiáng)細(xì)胞壁的韌性［６＿７１，在決定細(xì)胞形狀、完逡逑整性、調(diào)節(jié)細(xì)胞分裂以及生存能力方面都起重要的作用［８＿９］。磷壁酸的特性見下逡逑文（１．１．２）。相對革蘭氏陽性菌而言，革蘭氏陰性菌的細(xì)胞壁較薄，層肽聚糖僅逡逑有數(shù)層，厚度５－１０邋ｎｍ，只占細(xì)胞干重的１０％左右。但是結(jié)構(gòu)卻更復(fù)雜，除了肽逡逑聚糖層外，還有油脂蛋白、脂質(zhì)雙層和脂多糖構(gòu)成的外膜結(jié)構(gòu)（如圖１．２所示）逡逑Ｐ，３，５］逡逑0逡逑Ｇｒ；ｎｎ邋（＋）邋（邋ｅｌｌ－Ｗｉｉｌｌ邐Ｇｉ邋ａｍ邋（－）邋ｃｅＩｌ－＞ＶｉＵｌ逡逑

１．２．２．１生物大分子的標(biāo)準(zhǔn)純化流程［}卞義弦桓霰曜嫉納锎蠓腫喲炕鞒貪ㄑ返牟痘�、中秴s炕途復(fù)炕鰣義轄錐危ㄈ繽跡保鄧荊�。但薁楷震t齟炕錐尾⒉皇薔遠(yuǎn)懶⒒蛘弒夭豢繕俚�。辶x顯謔導(dǎo)視τ彌�，常常将捕获藉F魏橢卸卻炕錐魏隙�，，如从细胞培养上清掷C義戲擲氪炕∈蟮タ寺】固宓模桑紓牽切停ú捎們綴筒鬮齷蛘呃胱詠換徊鬮霾痘癜繡義系鞍綴�，不需要中间纯化，因为采用高选择芯壞捕获方法可裔j比コ罅康腦渝義現(xiàn)實鞍字屎偷頭腫恿康腦又�，达到高效的纯化效果。）。而峨s諛承┤菀追擲氳膩義涎罰恍柚蔥幸徊醬炕僮骷茨艽锏僥勘攴腫擁鬧票敢�，如磫洋肠杆菌细胞辶x夏ぶ蟹擲氪炕さ鞍祝榘彼岜曇塹南赴匱躉福ㄖ恍柩≡袷實鋇娜ノ奐梁灣義細(xì)哐≡裥緣納捉櫓�，采觽兙Y蛻準(zhǔn)純篩呋厥章實夭痘衲さ鞍祝⑶彝被鼓苠義瞎蝗コ又實鞍字�、ＤＮＡ、类脂和殿^腫恿吭又�，达抵v芬蟮淖愎壞拇慷齲�。辶x弦虼

本文編號：2629747