發(fā)布時間：2020-04-15 18:53

【摘要】：子宮是奶牛生殖系統(tǒng)重要的組成部分,是胚胎附植及發(fā)育的主要場所,其生理結(jié)構(gòu)與功能的完整性直接關(guān)系到奶牛的生產(chǎn)繁殖。奶牛產(chǎn)后因子宮頸松弛,子宮內(nèi)膜上皮受損,易導致子宮感染,造成嚴重經(jīng)濟損失。引起產(chǎn)后子宮內(nèi)感染的主要是大腸桿菌,其主要通過脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)發(fā)揮致病作用。甲硫腦啡肽(Met-enkephalin,MENK)是哺乳動物體內(nèi)天然生成的具有阿片樣作用的多肽,MENK及其受體已被證實存在于子宮內(nèi)膜中。有研究表明,MENK可抑制子宮細胞增殖,但MENK對奶牛子宮內(nèi)膜上皮細胞(BEEC)增殖的作用尚無研究。本試驗以BEEC為研究對象,探究在LPS作用下,MENK對細胞增殖活性、細胞周期、細胞增殖相關(guān)因子和信號通路的影響。試驗一研究MENK對LPS作用下BEEC的增殖影響機制,分為空白組、LPS組(1μg/mL),以及LPS(1 μg/mL)與不同濃度MENK共處理組。試驗二進一步利用MENK拮抗劑納洛酮(Naloxone,NAL),驗證MENK對細胞增殖變化的影響,分為空白組、LPS組(1 μg/mL),以及LPS(1 μμg/mL)、不同濃度MENK與NAL共處理組。采用CCK-8法檢測細胞活力變化;采用流氏細胞術(shù)檢測細胞周期變化;采用熒光定量PCR檢測細胞增殖相關(guān)因子的基因表達;采用Western blot檢測細胞增殖相關(guān)通路的變化。根據(jù)試驗一分組處理BEEC 24 h后,LPS處理組細胞增殖活性高于空白組(p0.01);與LPS處理組相比,LPS與MENK(10-6～10-4mol/L)共處理組細胞增殖活性降低(p0.01);MENK單獨處理(10-9～10-4mol/L)不影響細胞增殖活性(p0.05)。與空白組相比,LPS處理組G1期細胞數(shù)量極顯著降低(p0.01),S期細胞數(shù)量極顯著升高(p0.01),PI極顯著升高(p0.01);與LPS處理組相比,LPS和MENK(10-6～10-5mol/L)共處理組G1期細胞數(shù)量極顯著升高(p0.01),PI極顯著降低(p0.01)。與空白組相比,LPS處理組在3 h、6 h和12 h細胞EGFR、VEGF、FGF-2和TGF-β3基因表達量均升高(p0.05);與LPS處理組相比,LPS和MENK(10-6～10-5mol/L)共處理組細胞在6 h和12 h時EGFR、VEGF和FGF-2基因表達量下降(p0.05),TGF-β3基因表達量無顯著差異(p0.05)。與空白對照組相比,LPS處理組在30 min時β-catenin、c-Myc、Cyclin D1的蛋白表達,以及PI3K和Akt的磷酸化水平均升高(p0.05);與LPS處理組相比,LPS和MENK(10-7～10-5mol/L)共處理組β-catenin和c-Myc蛋白表達量下降(p0.01),LPS和MENK(10-6～10-5 mol/L)共處理組Cyclin D1蛋白表達量降低(p0.05),細胞PI3K磷酸化水平在LPS與10-6 mol/L～10-5 mol/L MENK共處理下降低(p0.05),Akt磷酸化水平在LPS與 10-5 mol/L MENK共處理下降低(p0.05)。以上結(jié)果表明,LPS可促進BEEC細胞的增殖活性和細胞周期進程,上調(diào)EGFR、VEGF和FGF-2基因的表達,誘導細胞Wnt/β-catenin和PI3K/Akt通路的激活,MNEK可抑制LPS誘導的BEEC細胞的增殖。根據(jù)試驗二分組處理BEEC 24 h后,LPS處理組細胞增殖活性極高于空白組(p0.01);與LPS處理組相比,LPS、MENK(10-4mol/L)和NAL(10-4mol/L)共處理組細胞增殖活性降低(p0.01);10-9～10-5mol/LNAL單獨處理BEEC不影響細胞增殖活性(p0.05)。與空白組相比,LPS處理組G1期細胞數(shù)量極顯著降低(p0.01),S期細胞數(shù)量極顯著升高(p0.01),PI極顯著升高(p0.01);與LPS處理組相比,LPS、MENK和NAL共處理組各期細胞數(shù)量無顯著變化(p0.05),PI無顯著差異(p0.05)。與空白組相比,LPS處理組細胞EGFR、VEGF、FGF-2和TGF-β3基因表達量在6h顯著升高(p0.05);與LPS處理組相比,LPS、MENK(10-8mol/L～10-5mol/L)和NAL(10-8mol/L～10-5mol/L)共處理組EGFR、VEGF、TGF-β3和FGF-2基因表達量無顯著差異(p0.05)。與空白對照組相比,LPS處理組30min時β-catenin、c-Myc和Cyclin D1的蛋白表達,以及PI3K和Akt的磷酸化水平量均升高(p0.05);與LPS處理組相比,LPS、MENK(10-8mol/L～10-5mol/L)和NAL(10-8mol/L～10-5mol/L)共處理組β-catenin、c-Myc和Cyclin D1的蛋白表達量,以及PI3K和Akt的磷酸化水平無顯著差異(p0.05)。這些結(jié)果提示MNEK可抑制LPS誘導的細胞增殖活性和Wnt/β-catenin及PI3K/Akt通路的激活,下調(diào)EGFR、VEGF和FGF-2基因的表達,且這種抑制作用可被NAL所阻斷。綜上,MNEK可抑制LPS誘導的細胞增殖和細胞周期進程,下調(diào)增殖相關(guān)因子EGFR、VEGF和FGF-2的表達,抑制增殖信號通路Wnt/β-catenin和PI3K/Akt的激活,且這種抑制作用可被NAL所阻斷,表明MENK可能通過阿片受體介導參與對LPS誘導的BEEC細胞增殖抑制作用。
【圖文】：

ｇｒｏｕｐ．逡逑３．２細胞周期變化逡逑如圖２－２所示，與空白組相比，ＬＰＳ處理組Ｇ１期細胞數(shù)量極顯著降低（ｐ＜０．０１），邋Ｓ逡逑期細胞數(shù)量極顯著升高（Ｐ＜０．０１），邋ＰＩ極顯著升高（／？＜0．0１）；與ＬＰＳ處理組相比，ＬＰＳ逡逑（ｌｐｇ／ｍＬ）、ＭＥＮＫ和ＮＡＬ共處理組處于各期細胞數(shù)量無顯著變化（ｐ＞０．０５）。逡逑

邐Ｔ？ｕ逡逑ＬＰＳ邋（邋“ｌｇ，，ｍＬ邋）邋＋ＭＥｉ５ｉＴ（Ｔ0＊５ｍｏＩ／Ｌ）＋ＮＡＬ（１０＊％ｌｏｌ／Ｌ）逡逑圖２－２邋ＮＡＬ對ＢＥＥＣ細胞周期的影響逡逑注：與空白組相比，“＊’＞＜０．０５，邋‘‘＊＊＞＜０．０１；與邋ＬＰＳ邋單獨處理組相比，“�！荆迹埃埃�，邋“＃�！荆迹埃埃卞义希疲椋珏澹保插澹裕瑁邋澹澹妫妫澹悖翦澹铮驽澹危粒体澹铮铄澹簦瑁邋澹悖澹欤戾澹悖悖欤邋澹铮驽澹拢牛牛缅义希危铮簦澹哼姡埃�，邋“＊＊’’／？＜０．０１，邋ｃｏｍｐａｒｅｄ邋ｗｉｔｈ邋ｃｏｎｔｒｏｌ邋ｇｒｏｕｐ；“�！�？＜０．０５，邐１，ｃｏｍｐａｒｅｄ邋ｗｉｔｈ邋ＬＰＳ逡逑ｇｒｏｕｐ邋．逡逑３．３細胞增殖相關(guān)因子的基因表達變化逡逑ＮＡＬ對ＢＥＥＣ細胞增殖相關(guān)因子基因表達的影響如圖２－３所示，與空白組相比，ＬＰＳ處逡逑理組ＥＧＦＲ、ＶＥＧＦ、ＦＧＦ－２和ＴＧＦ－ｐ３基因的表達均顯著升高（／；＜０．０５）；與ＬＰＳ處理組相逡逑比
【學位授予單位】：揚州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：S858.23

【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 高揚,林嘉友,李莉;老化對甲硫腦啡肽增強大鼠NK細胞殺傷活性的影響(論著摘要)[J];中國神經(jīng)免疫學和神經(jīng)病學雜志;1998年01期

2 李剛,于杰,侯建證;Regulation　of　methionine　enkephalin　on　the　function　of　lymphocytes　and　macrophages　from　liver-impaired　mice[J];中國藥理學與毒理學雜志;1997年03期

3 李新;張紅;李曾欣;冷靜;;舒天寧沖劑對緊張性頭痛患者血漿甲硫腦啡肽的影響[J];山東醫(yī)藥;2008年22期

4 王邦茂,劉文天,黃乃俠,吳琳,杜寶恒,黃象謙;胎兒胃腸胰組織阿片肽的分布和發(fā)育[J];解剖學雜志;1997年02期

5 徐隆紹;甲硫腦啡肽類似物對正常人及庫興氏病人CRF誘導ACTH釋放的作用[J];國外醫(yī)學.內(nèi)分泌學分冊;1985年04期

6 陳啟盛;戴義隆;沈上;田蘇平;;嗎啡和甲硫腦啡肽在應(yīng)激性胃粘膜損害中的作用[J];南京醫(yī)學院學報;1990年03期

7 劉雪松,田津斌,方明,許偉,韓濟生;四種神經(jīng)肽的反相高效液相色譜法分離[J];分析試驗室;1997年06期

8 段小初,馮新為;甲硫腦啡肽對人單核細胞抗原提呈功能的影響[J];中國免疫學雜志;1990年05期

9 王宇卉,曹文輝;偏頭痛的生化研究進展[J];國外醫(yī)學.神經(jīng)病學神經(jīng)外科學分冊;1994年02期

10 畢蕾,朱立平;免疫系統(tǒng)與神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)之間的調(diào)節(jié)環(huán)路[J];上海免疫學雜志;1987年04期

相關(guān)會議論文 前2條

1 丁繼貞;陳潤生;;甲硫腦啡肽溶液構(gòu)象的二維核磁共振研究[A];第七屆全國波譜學學術(shù)會議論文摘要集[C];1992年

2 李鵬飛;崔希云;艾洪濱;;甲硫腦啡肽在束縛-浸水應(yīng)激致大鼠胃黏膜損傷中的作用[A];中國解剖學會2012年年會論文文摘匯編[C];2012年

相關(guān)碩士學位論文 前2條

1 柴立昂;甲硫腦啡肽對脂多糖作用下奶牛子宮內(nèi)膜上皮細胞增殖的影響[D];揚州大學;2019年

2 張穎;頭痛寧膠囊治療緊張型頭痛的臨床有效性和安全性研究[D];寧夏醫(yī)科大學;2010年

本文編號：2628869