發(fā)布時(shí)間：2020-04-15 02:09

【摘要】：雞傳染性支氣管炎(IB)是由雞傳染性支氣管炎病毒(IBV)引起的一種僅發(fā)生于雞的急性、高度接觸性的呼吸道疾病。該病在我國(guó)的流行趨勢(shì)逐步上升,尤其是腎病變型IB已蔓延至全國(guó)各地,造成了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。目前用于評(píng)價(jià)雞傳染性支氣管炎疫苗免疫效果的抗體檢測(cè)方法主要是血凝抑制試驗(yàn)(HI)。HI試驗(yàn)所用的血凝素(HA)抗原需用胰蛋白酶或磷脂酶C處理制備,這一過程破壞IBV的纖突蛋白,不能真實(shí)反映IBV抗體水平。此外,IBV的血清型眾多,各血清型之間的差異很大,因此,使用HI試驗(yàn)評(píng)價(jià)不同血清型IBV疫苗免疫后的抗體水平受到了質(zhì)疑。本研究旨在建立將IBV全病毒吸附于雞紅細(xì)胞載體上的間接血凝試驗(yàn)(IHA)方法,并通過與HI比較特異性、敏感性,檢測(cè)W93和M41抗原的交叉關(guān)系及田間免疫血清抗體水平來確定IHA抗體與HI抗體之間的差異。通過使用建立的IHA方法和HI方法來檢測(cè)IBV的W93株活疫苗、M41株活疫苗和M41株滅活苗免疫后雞血清中抗體水平,闡明不同血清型疫苗免疫雞群IHA抗體與HI抗體的變化規(guī)律。試驗(yàn)結(jié)果如下:1.建立了檢測(cè)血清中IBV抗體的IHA方法。將IBV不同毒株接種10日齡非免疫雞胚,48 h后收獲尿囊液,經(jīng)0.2%甲醛滅活后獲得IBV滅活病毒液。IHA抗原制備是將IBV滅活病毒液與2.5%鞣酸鞣化的雞紅細(xì)胞按1:2混勻,致敏1 h,檢測(cè)IBV陽性血清的IHA效價(jià)可達(dá)2~8。HA抗原制備是用IBV滅活病毒液經(jīng)1%胰酶處理制成,胰酶與抗原最佳比例為1:3,處理抗原的最佳時(shí)間是2 h,檢測(cè)IBV陽性血清的血凝價(jià)(HA)可達(dá)2~8-2~9。2.建立的IHA方法和HI方法均具有實(shí)用性。用建立的IHA方法和HI方法分別檢測(cè)IBV的W93株陽性血清、M41株陽性血清及IBV陰性血清,禽流感(AI)H9、禽流感(AI)H5、新城疫(ND)、傳染性法氏囊病(IBD)、產(chǎn)蛋下降綜合征(EDS-76)等病毒性的陽性血清。結(jié)果表明,用IBV的W93和M41毒株制備的抗原建立的IHA和HI方法特異性良好。分別用IHA和HI方法檢測(cè)10份免疫雞血清,結(jié)果顯示IHA效價(jià)在2~6~2~8,HI的效價(jià)在2~8~2~9,表明HI效價(jià)比IHA方法高2~4倍。用W93和M41制成的IHA抗原和HA抗原對(duì)6份疫苗免疫雞血清分別進(jìn)行IHA和HI抗體檢測(cè),IBV的W93株和M41株的HI結(jié)果完全一致,而IHA試驗(yàn)結(jié)果存在1~2倍抗體滴度的差異。3.IBV不同疫苗免疫雞群中IHA和HI抗體消長(zhǎng)規(guī)律存在差異。用IBV的W93株活疫苗、M41株活疫苗和M41株滅活苗分別免疫健康雛雞,免疫后不同時(shí)間(7、14、21、28、35、42 d)采血分離血清,用IHA和HI試驗(yàn)檢測(cè)免疫雞血清抗體的消長(zhǎng)規(guī)律。結(jié)果顯示W(wǎng)93和M41活疫苗免疫后抗體維持時(shí)間短,峰值不高,而M41株滅活苗免疫后,抗體水平峰值雖然不高,但維持時(shí)間較長(zhǎng)�？傮w而言,雖然IHA和HI均可用于雞傳染性支氣管炎疫苗免疫后的效果評(píng)價(jià),但HI試驗(yàn)檢測(cè)抗體個(gè)體差異小,IHA試驗(yàn)檢測(cè)抗體個(gè)體差異較大。
【圖文】：

IBV病毒粒子結(jié)構(gòu)示意圖

圖 1-2 間接血凝試驗(yàn)原理示意圖(曹旭 2004)Fig.1-2 Principle of indirect hemagglutination test (Cao Xu 2004)1.5.3 分子生物學(xué)技術(shù)分子生物學(xué)技術(shù)在疾病診斷中有著突出優(yōu)點(diǎn)，其靈敏性高、特異性強(qiáng)、耗時(shí)短
【學(xué)位授予單位】：西北農(nóng)林科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：S858.31

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2628007