【摘要】：雞傳染性支氣管炎(IB)是由雞傳染性支氣管炎病毒(IBV)引起的一種僅發(fā)生于雞的急性、高度接觸性的呼吸道疾病。該病在我國的流行趨勢逐步上升,尤其是腎病變型IB已蔓延至全國各地,造成了嚴重的經(jīng)濟損失。目前用于評價雞傳染性支氣管炎疫苗免疫效果的抗體檢測方法主要是血凝抑制試驗(HI)。HI試驗所用的血凝素(HA)抗原需用胰蛋白酶或磷脂酶C處理制備,這一過程破壞IBV的纖突蛋白,不能真實反映IBV抗體水平。此外,IBV的血清型眾多,各血清型之間的差異很大,因此,使用HI試驗評價不同血清型IBV疫苗免疫后的抗體水平受到了質(zhì)疑。本研究旨在建立將IBV全病毒吸附于雞紅細胞載體上的間接血凝試驗(IHA)方法,并通過與HI比較特異性、敏感性,檢測W93和M41抗原的交叉關(guān)系及田間免疫血清抗體水平來確定IHA抗體與HI抗體之間的差異。通過使用建立的IHA方法和HI方法來檢測IBV的W93株活疫苗、M41株活疫苗和M41株滅活苗免疫后雞血清中抗體水平,闡明不同血清型疫苗免疫雞群IHA抗體與HI抗體的變化規(guī)律。試驗結(jié)果如下:1.建立了檢測血清中IBV抗體的IHA方法。將IBV不同毒株接種10日齡非免疫雞胚,48 h后收獲尿囊液,經(jīng)0.2%甲醛滅活后獲得IBV滅活病毒液。IHA抗原制備是將IBV滅活病毒液與2.5%鞣酸鞣化的雞紅細胞按1:2混勻,致敏1 h,檢測IBV陽性血清的IHA效價可達2~8。HA抗原制備是用IBV滅活病毒液經(jīng)1%胰酶處理制成,胰酶與抗原最佳比例為1:3,處理抗原的最佳時間是2 h,檢測IBV陽性血清的血凝價(HA)可達2~8-2~9。2.建立的IHA方法和HI方法均具有實用性。用建立的IHA方法和HI方法分別檢測IBV的W93株陽性血清、M41株陽性血清及IBV陰性血清,禽流感(AI)H9、禽流感(AI)H5、新城疫(ND)、傳染性法氏囊病(IBD)、產(chǎn)蛋下降綜合征(EDS-76)等病毒性的陽性血清。結(jié)果表明,用IBV的W93和M41毒株制備的抗原建立的IHA和HI方法特異性良好。分別用IHA和HI方法檢測10份免疫雞血清,結(jié)果顯示IHA效價在2~6~2~8,HI的效價在2~8~2~9,表明HI效價比IHA方法高2~4倍。用W93和M41制成的IHA抗原和HA抗原對6份疫苗免疫雞血清分別進行IHA和HI抗體檢測,IBV的W93株和M41株的HI結(jié)果完全一致,而IHA試驗結(jié)果存在1~2倍抗體滴度的差異。3.IBV不同疫苗免疫雞群中IHA和HI抗體消長規(guī)律存在差異。用IBV的W93株活疫苗、M41株活疫苗和M41株滅活苗分別免疫健康雛雞,免疫后不同時間(7、14、21、28、35、42 d)采血分離血清,用IHA和HI試驗檢測免疫雞血清抗體的消長規(guī)律。結(jié)果顯示W(wǎng)93和M41活疫苗免疫后抗體維持時間短,峰值不高,而M41株滅活苗免疫后,抗體水平峰值雖然不高,但維持時間較長�？傮w而言,雖然IHA和HI均可用于雞傳染性支氣管炎疫苗免疫后的效果評價,但HI試驗檢測抗體個體差異小,IHA試驗檢測抗體個體差異較大。
【圖文】：

IBV病毒粒子結(jié)構(gòu)示意圖

圖 1-2 間接血凝試驗原理示意圖(曹旭 2004)Fig.1-2 Principle of indirect hemagglutination test (Cao Xu 2004)1.5.3 分子生物學技術(shù)分子生物學技術(shù)在疾病診斷中有著突出優(yōu)點，其靈敏性高、特異性強、耗時短
【學位授予單位】：西北農(nóng)林科技大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：S858.31

【參考文獻】

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本文編號：2628007