【摘要】：肌肉是家禽生產(chǎn)中重要的經(jīng)濟(jì)性狀之一,胚胎期骨骼肌的發(fā)育影響肌肉產(chǎn)量。雞GHR基因可雙向轉(zhuǎn)錄,不僅具有GHR mRNA(即GHR正義轉(zhuǎn)錄本,G HR-S),而且存在一種天然反義轉(zhuǎn)錄本(GHR-AS),兩種轉(zhuǎn)錄本部分序列反向互補(bǔ),且存在互作。目前GHR-AS在骨骼肌發(fā)育過程中的作用尚不清楚,本研究首先從組織水平分析GHR-AS的表達(dá)規(guī)律,然后采用差速貼壁法分離懷鄉(xiāng)雞腿肌的原代成肌細(xì)胞,分析GHR-AS對(duì)成肌細(xì)胞分化過程中的影響及可能的調(diào)控機(jī)制。論文主要研究結(jié)果如下:(1)GHR-AS在雞胚胎期的表達(dá)量比出殼后高,雞胚胎E12-E17是肌纖維形成的關(guān)鍵時(shí)期,表明GHR-AS可能參與雞骨骼肌發(fā)育過程。比較GHR-AS和G HR-S(GHR mRNA)的表達(dá)規(guī)律發(fā)現(xiàn)兩者呈顯著正相關(guān)關(guān)系。在肌肉組織中G HR-AS的表達(dá)量低于GHR-S,且差異顯著(P0.05)。(2)用含2%馬血清的DMEM培養(yǎng)基誘導(dǎo)懷鄉(xiāng)雞成肌細(xì)胞向肌纖維分化;在增殖期、分化期進(jìn)行亞細(xì)胞定位和半衰期檢測,發(fā)現(xiàn)GHR-AS在細(xì)胞核中的表達(dá)量高于細(xì)胞質(zhì),且GHR-AS的穩(wěn)定性低于GHR-S。(3)在雞成肌細(xì)胞分化過程中GHR-AS表達(dá)量呈上升趨勢。成肌細(xì)胞轉(zhuǎn)染過表達(dá)載體pGHR-AS后發(fā)現(xiàn)GHR-AS促進(jìn)成肌細(xì)胞分化,且分化標(biāo)記基因MyHC表達(dá)量呈上升趨勢,表明GHR-AS對(duì)肌纖維的形成具有促進(jìn)作用。(4)在雞原代成肌細(xì)胞中添加雞GH蛋白后,GHR-AS表達(dá)量升高,下游IGF1在mRNA和蛋白質(zhì)水平均升高,成肌細(xì)胞分化標(biāo)志基因MyHC表達(dá)量顯著上升,表明GHR-AS可能通過GH-GHR-IGF1通路在成肌細(xì)胞分化過程中起作用。5-雜氮-2’-脫氧胞苷能夠使成肌細(xì)胞中的GHR-AS表達(dá)量顯著上升且成肌細(xì)胞的分化過程增強(qiáng),表明GHR-AS受甲基化調(diào)控,去甲基化后有助于肌纖維的形成。本研究發(fā)現(xiàn)GHR-AS參與骨骼肌的發(fā)育過程,研究結(jié)果為家禽骨骼肌發(fā)育調(diào)控、確立肌肉發(fā)育的分子育種新靶點(diǎn)提供理論依據(jù)。
【圖文】：

圖 1-1 骨骼肌結(jié)構(gòu)(引自羅文, 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)博士論文, 2016)Figure 1-1 Skeletal muscle structure（Wen Luo, Doctoral dissertation ofsouth China agricultural university,2016）1.1.2 骨骼肌生長發(fā)育及分子調(diào)控過程骨骼肌的發(fā)育、生長和再生過程是一個(gè)緊密有序的過程（圖 1-2），體節(jié)是由中胚層細(xì)胞分化而來[3]，其中腹側(cè)體節(jié)分化形成生骨節(jié)，進(jìn)而分化形成軟骨、脊椎骨和肋骨，而背側(cè)體節(jié)在一系列細(xì)胞因子的調(diào)控和促進(jìn)下，如 Wnts 蛋白和音猬因子(Sonic hedgehog；Shh)共同作用下發(fā)育分化形成生皮肌節(jié)[4]。生皮肌節(jié)又分為生皮節(jié)和生肌節(jié)，生皮節(jié)最終分化成皮膚組織，在生皮肌節(jié)的中部和外側(cè)部的細(xì)胞則形成 MPC(Muscle progenitor cell)，表達(dá) Pax3 時(shí)，MPC 則處于增殖狀態(tài)，同時(shí)表達(dá) Pax7 和生肌決定因子（Myogenic factor 5，Myf 5）時(shí)，MPC 將會(huì)進(jìn)入下一個(gè)分化階段[5]，發(fā)育分化為生肌節(jié)[6, 7]。接著生肌節(jié)在 Myf 5 和成肌分化因子（Myogenic differentiationantigen，MyoD）的調(diào)控下分化為成肌細(xì)胞[8, 9]。成肌細(xì)胞通過增殖數(shù)量變多，當(dāng)增殖到一定數(shù)量則會(huì)退出細(xì)胞周期，很快進(jìn)入分化過程。

廣東海洋大學(xué)碩士學(xué)位論文最終形成成熟的肌纖維。成肌細(xì)胞向肌管分化的過程成為體外研究肌肉分化的理想模型。肌纖維數(shù)量在動(dòng)物胚胎期就已固定，出生后的骨骼肌生長發(fā)育只是肌纖維的增粗過程；若出生后肌肉受到損傷，原本處于靜止?fàn)顟B(tài)的衛(wèi)星細(xì)胞就會(huì)被激活發(fā)揮其作用。衛(wèi)星細(xì)胞是一種位于肌纖維基底膜和肌膜之間的干細(xì)胞，相互間不融合呈一種靜止?fàn)顟B(tài)。當(dāng)肌肉損傷，衛(wèi)星細(xì)胞就會(huì)被激活，經(jīng)過增殖、分化，，最終融合進(jìn)入初級(jí)肌管或肌纖維內(nèi)，從而使肌纖維變長和增粗。Pax7
【學(xué)位授予單位】：廣東海洋大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：S831.2

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本文編號(hào)：2622348