高原鼢鼠對抗凝血?dú)⑹髣┑目剐匝芯?/H1>
發(fā)布時(shí)間：2020-04-07 17:04
【摘要】：高原鼢鼠(Eospalax baileyi)是分布于青藏高原的優(yōu)勢鼠種,近年來,在人類活動(dòng)干擾及氣候因素等影響下,局部地方種群密度高、數(shù)量大,危害突出。藥物防治是現(xiàn)行控制高原鼢鼠的重要措施之一,如何避免由于殺鼠劑的長期使用導(dǎo)致的抗性種群發(fā)生等問題,建立有效的高原鼢鼠抗藥性檢測手段和方法,適時(shí)科學(xué)評估其抗藥性的發(fā)生情況,對優(yōu)化高原鼢鼠防控策略,合理治理高原鼢鼠抗性種群,維護(hù)草地生態(tài)系統(tǒng)平衡等均具有重要意義。本研究在綜述嚙齒動(dòng)物抗藥性產(chǎn)生的原因、行為、遺傳等方面抗性產(chǎn)生的方式等基礎(chǔ)上,測定了祁連山東緣高原鼢鼠對抗凝血滅鼠劑溴敵隆的敏感性與適口性水平,檢測了青藏高原東緣8個(gè)地區(qū)高原鼢鼠VKORC1和CYP3A2基因外顯子的核苷酸變異情況,測序鑒別其基因型,對比褐家鼠(Rattus norvegicus)和裸鼴鼠(Heterocephalus glaber)氨基酸序列并結(jié)合已知突變分析其抗藥性。獲得以下主要結(jié)論:1.連續(xù)喂食1、3、5、和7 d 0.0005%的溴敵隆毒餌后,高原鼢鼠毒餌取食量有下降趨勢,不同性別高原鼢鼠對溴敵隆的敏感性無顯著性差異(t= 1.232,P=0.329),其半致死喂食期(LFP50)和99%致死喂食期(LFP99)的估計(jì)值分別為0.492 d和11.897 d;高原鼢鼠取食毒餌后,死亡高峰期出現(xiàn)在第6~9 d。0.0005%溴敵隆對高原鼢鼠的首遇適口性為0.66,再遇適口性為0.77,均達(dá)到良好攝食系數(shù),實(shí)驗(yàn)室校正滅鼠率均達(dá)100%。溴敵隆對祁連山東緣地區(qū)高原鼢鼠的毒效高、適口性好,所檢測的高原鼢鼠岱乾種群無抗性發(fā)生。2.對青藏高原東緣8個(gè)地區(qū)高原鼢鼠VKORC1基因三個(gè)外顯子的核苷酸變異情況檢測發(fā)現(xiàn):1129只高原鼢鼠個(gè)體中,有276只個(gè)體的VKORC1氨基酸序列與其野生型有差異。地理分布上,有5個(gè)種群的VKORC1基因檢測出了所有基因型突變,共界定了4個(gè)基因型。高原鼢鼠VKORC1氨基酸存在4個(gè)錯(cuò)義突變位點(diǎn),其中在4個(gè)高原鼢鼠種群中檢測到了與抗藥性相關(guān)的基因型氨基酸突變Phe63Cys。對比褐家鼠氨基酸序列,發(fā)現(xiàn)高原鼢鼠VKORC1氨基酸序列有18個(gè)錯(cuò)義突變位點(diǎn)。本研究初步檢測了4個(gè)種群存有抗性,抗性個(gè)體(62)占所測樣本的5.5%(n=1129),說明高原鼢鼠局部地區(qū)種群已出現(xiàn)抗性個(gè)體但尚未形成抗性種群。3.對青藏高原東緣8個(gè)地區(qū)高原鼢鼠CYP3A2基因進(jìn)行兩個(gè)外顯子的核苷酸變異情況檢測發(fā)現(xiàn),870只高原鼢鼠個(gè)體中,有381只個(gè)體的CYP3A2氨基酸序列與其野生型有差異。地理分布上,所有地理種群的CYP3A2基因均檢測出了突變,共界定了6個(gè)基因型,高原鼢鼠CYP3A2種內(nèi)存在8個(gè)氨基酸錯(cuò)義突變位點(diǎn),對比褐家鼠氨基酸序列,發(fā)現(xiàn)高原鼢鼠CYP3A2基因序列有11個(gè)錯(cuò)義突變位點(diǎn),表明CYP3A2基因介導(dǎo)的細(xì)胞色素還原氧化酶的改變使高原鼢鼠對抗凝血?jiǎng)╊愃幬镉胁煌拇x程度,可作為進(jìn)一步驗(yàn)證抗性情況的候選標(biāo)記。
【圖文】：
到高原鼢鼠三個(gè)外顯子基因序列，第一外顯子為 147 bp，，第二外顯子為 106 bp，第三外顯子為 157 bp（圖 3.1）。所得到合適的高原鼢鼠 VKORC1 外顯子使用非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳進(jìn)行檢測，得到了高原鼢鼠3個(gè)外顯子的SNP（圖3.2）。
圖 3.1 高原鼢鼠外顯子 PCR 產(chǎn)物瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果注：A，B，C 分別為 VKORC 基因的外顯子 1，2 和 3。M 為 DNAmarker 2000Fig 3.1Agarose gel electrophoresis results of exon PCR products in Plateau zokorNote：A, B, and C are exons 1, 2, and 3 of the VKORC gene, respectively. M Is DNAMarker2000圖 3.2 高原鼢鼠三個(gè)外顯子聚丙烯酰胺凝膠電泳 SNP 結(jié)果Fig 3.2 SNP results of polyacrylamide gel electrophoresis in three exons of Plateau zokor3.3.2 VKORC1 基因外顯子多態(tài)性 SNP 分析在全部 1129 個(gè)高原鼢鼠樣本的 VKORC1 基因外顯子多態(tài)性結(jié)合測序圖譜分Vkorc1 Exon1BB BB BB BC ACVkorc1 Exon3AB BB BB BB BB BCVkorc1 Exon2AB AB AB BB AB
【學(xué)位授予單位】：甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：S812.6
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本文編號：2618159
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【圖文】：
到高原鼢鼠三個(gè)外顯子基因序列，第一外顯子為 147 bp，，第二外顯子為 106 bp，第三外顯子為 157 bp（圖 3.1）。所得到合適的高原鼢鼠 VKORC1 外顯子使用非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳進(jìn)行檢測，得到了高原鼢鼠3個(gè)外顯子的SNP（圖3.2）。
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