【摘要】：牛多殺性巴氏桿菌主要引起牛肺炎,在世界各地廣泛流行和分布,影響著養(yǎng)牛業(yè)的發(fā)展。多殺性巴氏桿菌根據(jù)莢膜抗原可分為A、B、D、E和F型5個血清型。多殺性巴氏桿菌的毒力因子種類繁多,但對其致病機(jī)制及相關(guān)毒力因子的作用仍有待于進(jìn)一步研究。本研究在確定牛莢膜A型多殺性巴氏桿菌的基礎(chǔ)上,通過動物試驗及部分多殺性巴氏桿菌毒力基因的擴(kuò)增篩選出強(qiáng)毒株與弱毒株,并將強(qiáng)、弱毒株進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組測序分析。將差異表達(dá)基因進(jìn)行分析,篩選毒力基因并富集到KEGG_-map上,綜合分析多殺性巴氏桿菌的致病機(jī)制。1.牛源多殺性巴氏桿菌的分離鑒定本研究采集疑似感染牛肺炎的病料進(jìn)行細(xì)菌的分離,通過生化鑒定及多殺性巴氏桿菌特異性引物對分離菌株進(jìn)行鑒定,共分離出12株多殺性巴氏桿菌,并采用PCR技術(shù)對12株多殺性巴氏桿菌進(jìn)行莢膜血清型鑒定,結(jié)果表明12株菌株均為莢膜A型多殺性巴氏桿菌。2.基于強(qiáng)、弱毒株轉(zhuǎn)錄組學(xué)分析通過動物試驗及多殺性巴氏桿菌部分毒力基因擴(kuò)增篩選出強(qiáng)毒株與弱毒株,利用轉(zhuǎn)錄組學(xué)分析,從cDNA文庫中篩選到72個差異表達(dá)的基因。顯著性分析發(fā)現(xiàn),在強(qiáng)、弱毒株中共有69個表達(dá)基因下調(diào)和3個表達(dá)基因上調(diào)。本次測序結(jié)果顯示弱毒株與強(qiáng)毒株相比毒力基因Znua與Rope表達(dá)顯著下調(diào)。3.DnaJ蛋白的提純及功能驗證在轉(zhuǎn)錄組學(xué)測序結(jié)果中弱毒株Dnaj表達(dá)下調(diào)最為顯著。在本研究中,將Dnaj基因與pET-28a載體連接,構(gòu)建重組質(zhì)粒,并將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)入DE3細(xì)胞中,經(jīng)IPTG誘導(dǎo)表達(dá),獲得大小約為37.8kDa的重組蛋白。通過親和層析法(Ni-NAT)純化DnaJ蛋白。將純化的蛋白免疫小鼠,通過Western blot對DnaJ蛋白的免疫原性做出初步分析。
【圖文】：

化試驗結(jié)果圖 1.1 染色結(jié)果A）革蘭氏染色鏡檢結(jié)果（1 000×）（B）美蘭染色鏡檢結(jié)果（1 000×）Fig.1.1 The dyeing resultsA）Gram staining result（1 000×）（B）Methylene blue staining result（1 0

濃度試驗結(jié)果分析圖 1.3 hyaD-hyac 基因擴(kuò)增結(jié)果M: DL-2000 Marker; Pm-1—Pm-12:多殺性巴氏桿菌Fig.1.3 PCR amplification of hyaD-hyacM: DL-2000 Marker; Pm-1—Pm-12: Pasteurella multocida
【學(xué)位授予單位】：吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：S852.61

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2613829