【摘要】：蝙蝠種類多、分布廣,是多種人獸共患病的自然宿主,如嚴重急性呼吸綜合征病毒(Severe acute respiratory syndromes virus)、中東呼吸綜合征病毒(Middle-east respiratory syndromes vius)、尼帕病毒(Nipah virus)、狂犬病毒(Rabies virus)及埃博拉病毒(Ebola virus)等。廣西因獨特的地理位置具有十分豐富蝙蝠資源,但該地區(qū)蝙蝠的種類、分布及攜帶的病毒多樣性等還不完全清楚。本研究利用形態(tài)學(xué)和分子生物學(xué)方法,對在桂林、柳州、河池等地區(qū)的18個縣、區(qū)采集到的617只蝙蝠樣品進行分類和鑒定。結(jié)果鑒定出12種蝙蝠,分別為大蹄蝠(Hipposideros armiger)、中蹄蝠(Hipposidero larvatus灰蹄蝠(Hipposideros cineraceus)、果樹蹄蝠(Hipposiderospomona)、普氏蹄蝠(Hipposideros partti)、皮氏菊頭蝠(Rhinolophus pearsoni)、托氏菊頭蝠(Rhinolophus thomasi)、大耳菊頭蝠(Rhinolophus macrotis)、小菊頭蝠(Rhinolophus pusillus)、普通長翼蝠(Minipopterus schreibersii)、小黃蝠(Scotophilus kuhlii)和南長翼蝠(Miniopterus pusillus),其中小黃蝠共有133只(21.5%),果樹蹄蝠132只(21.4%),中蹄蝠129只(20.9%),其他蝙蝠數(shù)量在1-51只之間不等。應(yīng)用高通量測序技術(shù)(High-throughput sequencing,HTS)對這些蝙蝠的腸道組織開展宏病毒組學(xué)研究。結(jié)果共得到89825條reads注釋到病毒序列,其中有37426條(41.7%)reads與噬菌體相關(guān),49828條(55.47%)與真核生物病毒相關(guān),另外還有2571條(2.8%)reads未注釋到已知病毒序列。與真核生物相關(guān)的病毒序列,主要涉及副黏病毒科(Paramyxoviridae)、彈狀病毒科(Rhabdoviridae)、絲狀病毒科(Filoviridae)、冠狀病毒科(Cornaviridae)、細小病毒科(Parvoviridae)、雙順反子病毒科(Dicistroiridae)、軟腐病毒科(Iflaviridae)、小核糖核酸病毒科(Picornaviridae)、星狀病毒科(Astroviridae)、桿狀病毒科(Baculoviridae)和嗜肝病毒科(Hepadnaviridae)等30多個病毒科。其中脊椎動物病毒有51種,主要有蝙蝠冠狀病毒(Bat coronavirus)、蝙蝠星狀病毒(Bat astrovirus)、蝙蝠嗜肝病毒(Bat hepatitis B virus)、甲型肝炎病毒(Hepatitis A virus)和人雙埃柯病毒(Human parechovirus)等。昆蟲病毒有18種,主要為茶尺蠖病毒(Ectropis obiqua virus)和直尺蠖病毒(Perina nuda virus)。植物病毒主要為斐濟病毒屬(Fijvirus)的斐濟病毒(Fijivirus)。噬菌體主要是一些腸道細菌的噬菌體,涉及基尾噬菌體科(Myoviridae)、短尾噬菌體科(Podoviridae)、長尾噬菌體科(Siphoviridae)、絲狀噬菌體科(Inoviridae)、微小噬菌體科(Microviridae)和光滑噬菌體科(Leviviridae)。將這些脊椎動物病毒相關(guān)的reads進行組裝后,得到485條Contigs,比對發(fā)現(xiàn)共有342條(75%)Contigs能夠比對到NCBI數(shù)據(jù)庫中已知的病毒序列�；谶@些序列信息,進行分析后發(fā)現(xiàn),廣西蝙蝠中的蝙蝠星狀病毒與已知的蝙蝠星狀病毒的差異較大,可能是新的蝙蝠星狀病毒;廣西的蝙蝠冠狀病毒與Bat coronavirus(BtCoV/512/2005)核苷酸相似性為98%,親緣關(guān)系較近;廣西蝙蝠中的杯狀病毒和嗜肝病毒與已知病毒相似性較高,可能是已知病毒的變異株;廣西蝙蝠中的蝙蝠博卡病毒與已知蝙蝠博卡病毒相似性較低,可能是蝙蝠博卡病毒中新的病毒株。利用PCR方法,對廣西蝙蝠攜帶的微小RNA病毒目(Piconrnfaviriales)中的相關(guān)病毒進行驗證。結(jié)果顯示廣西蝙蝠主要攜帶七種微小RNA病毒,分別為:甲型肝炎病毒(Hepatovirus A virus)、南蝠微小RNA病毒(Ia io picornavirus)、Shanbavirus、蝙蝠雙�？虏《�(Bat parechovirus)、直尺蠖小RNA樣病毒(Perina nuda picorna-like virus)、茶尺蠖小 RNA樣病毒(Ectropis oblique picorna-like virus)和虱P病毒(Himetobi P virrus)。并在中蹄蝠中首次分離到一株蝙蝠源甲型肝炎病毒。對擴增得到的序列進行遺傳進化分析,結(jié)果顯示廣西蝙蝠的Hepatovirus A virus屬于Hepatovirirus H種,Bat picornavirus 可能是Sfapelovirus 病毒屬中新的 Bat sapelovirus,Bat parechovirus 可能是Pasivirus病毒屬中新的Bat pasivirus,Shanbavirus與已知的Shanbavirus相似性較低,可能是一株新的Bat shanbavirus。本研究初步了解了廣西地區(qū)蝙蝠的種類和分布,以及攜帶的病毒多樣性,為進一步填補國內(nèi)蝙蝠攜帶病毒的拼圖,做好廣西的蝙蝠病毒病疫情預(yù)警提供參考。蜱蟲與多種重要的人獸共患病有關(guān)。為了解我國黑龍江省大興安嶺林區(qū)的蜱蟲種類及相關(guān)的蜱傳病毒,本研究利用分子生物學(xué)方法,對大興安嶺地區(qū)的4個代表性采樣點采集的蜱蟲進行了分類鑒定,利用新一代測序技術(shù)(Next generation sequencing,NGS)和聚合酶鏈反應(yīng)(Polymerase chain reaction,PCR)對所采集的蜱蟲開展了宏病毒組學(xué)調(diào)查。結(jié)果顯示大興安嶺林區(qū)共鑒定出五種婢蟲,分別為:全溝硬碑(Ixodes persulcatus)、草原革蜱(Dermacentor nuttalli)、森林革蜱(Dermacentor silvarum)、長角血蜱(Haemaphysalis longicornis)和嗜群血蜱(Haemaphysalis concinna)。高通量測序共得到3568561條高質(zhì)量的reads,經(jīng)過濾比對后,共有6577條(2.16%)注釋到病毒序列。遺傳進化分析表明這些病毒與正內(nèi)羅畢病毒(Orthonairovirus)、白蛉病毒(Phlebovirus)、鹿蜱單股負鏈樣病毒(deer tick Mononegavirales-like virus)和荊門碑蟲病毒(Jingmen tick virus)密切相關(guān),但是這些病毒對人和動物健康是否相關(guān)還需進一步的研究。本研究的結(jié)果為研究大興安嶺地區(qū)的蜱蟲和蜱傳病毒提供參考,為今后通過媒介控制來防控蜱傳病毒提供依據(jù)。結(jié)論:1、在廣西共采集到617只蝙蝠,鑒定出蹄蝠科,菊頭蝠科和蝙蝠科中的12種蝙蝠。初步了解廣西地區(qū)的蝙蝠種類和分布。2、通過蝙蝠腸道組織的宏病毒組學(xué)研究,發(fā)現(xiàn)廣西的蝙蝠攜帶有星狀病毒、冠狀病毒、杯狀病毒、嗜肝病毒和博卡病毒等脊椎動物病毒,還有大量的昆蟲病毒、植物病毒以及噬菌體。初步了解廣西蝙蝠攜帶的病毒譜。3、對廣西地區(qū)蝙蝠攜帶的微小RNA病毒的研究顯示,其主要攜帶7種相關(guān)病毒,其中小黃蝠攜帶6種微小RNA病毒,是未來蝙蝠源微小RNA病毒的重點監(jiān)測對象。對這7種微小RNA病毒的進化分析結(jié)果顯示,這些病毒多為已知病毒屬中的新病毒。另外,在廣西的中蹄蝠中首次分離到—株蝙蝠源甲型肝炎病毒。4、在黑龍江大興安嶺地區(qū)共采集到1881只蜱蟲,鑒定出全溝硬蜱、草原革蜱、森林革蜱、長角血蜱和嗜群血蜱5種硬蜱。初步了解了大興安嶺地區(qū)蜱蟲種類及分布。5、通過高通量測序共得到6577條注釋到病毒的序列,涉及11個脊椎動物病毒科,還有大量未分類的病毒。初步了解大興安嶺蜱蟲攜帶的病毒譜。6、對高通量測序檢測出的豐度較高的四種蜱傳病毒:正內(nèi)羅畢病毒(Orthonairovirus)、白鈴病毒(Phlebovirus)、鹿碑單股負鏈樣病毒(deer tick Mononegavirales-like virus)和荊門碑蟲病毒(Jingmen tick virus)進行了全基因擴增和遺傳進化分析,結(jié)果顯示這四種病毒為新的蜱傳病毒。
【圖文】：

圖１蜱蟲傳播疾病途徑示意圖［ｎ６］逡逑Ｆｉｇ．ｌ邋Ｔｈｅ邋ｐａｔｈｗａｙ邋ｏｆ邋ｄｉｓｅａｓｅ邋ｔｒａｎｓｍｉｔｔｅｄ邋ｂｙ邋ｔｉｃｋｓ逡逑

圖３－１蝙蝠采樣點示意圖逡逑Ｆｉｇ．３－１邋Ｍａｐ邋ｏｆ邋ｂａｔ邋ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ邋ｓｉｔｅｓ逡逑使用細胞色素ｂ基因?qū)λ杉尿饦悠愤M行ＰＣＲ鑒定后，結(jié)果如下：在廣西的興安縣米集到中蹄幅（／／ｉ如ｏｓ１／辦ｍｓ１邋／ａｍｚ／ｗｓ）邋２１只，大耳菊頭蝠逡逑
【學(xué)位授予單位】：廣西大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：S852.65

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本文編號：2612761