發(fā)布時間：2020-04-01 21:43

【摘要】：本研究以內蒙古絨山羊皮膚成纖維細胞為研究對象,探討蛋氨酸、半胱氨酸和褪黑激素對細胞增殖、角蛋白以及相關基因mRNA表達的影響,進一步探索能量和營養(yǎng)感應分子AMPK-mTOR通路的變化規(guī)律。本論文試驗研究分為五部分。試驗一利用組織塊貼壁法對內蒙古絨山羊耳尖皮膚進行體外培養(yǎng)。對其進行觀察、純化以及鑒定,并繪制生長曲線。實驗二向生長期的成纖維細胞中添加半胱氨酸和蛋氨酸,研究了不同濃度的Cys和Met(1X=0.12 mM、5X=0.6 mM、10X=1.2 mM、20X=2.4 mM)對成纖維細胞的增殖、角蛋白及AMPK-mTOR信號通路相關基因mRNA表達量的影響。試驗三向成纖維細胞中添加不同比例的Cys和Met(1:1、1:3、1:5、3:1、5:1),研究了不同比例的兩種氨基酸對成纖維細胞的增殖、角蛋白及AMPK-mTOR信號通路相關基因mRNA表達量的影響。試驗四向成纖維細胞中添加褪黑激素,研究了不同濃度的MeL(0、100、300、500、700pg/m L)對成纖維細胞增殖、角蛋白及AMPK-mTOR信號通路相關基因mRNA表達量的影響。試驗五在試驗三和試驗四的基礎上選取對成纖維細胞增殖作用較強的濃度1:1、3:1、500pg/ml、700pg/ml組進行混合添加,研究了混合添加組對成纖維細胞的增殖、角蛋白及AMPK-mTOR信號通路相關基因mRNA表達量的影響。本試驗研究初步得到以下結果:(1)對培養(yǎng)好的細胞進行形態(tài)觀察,發(fā)現(xiàn)細胞呈長梭型,為典型的成纖維細胞形態(tài);并進行細胞計數(shù)和繪制細胞生長曲線,呈典型的“S”型。(2)與對照組相比,添加不同濃度的Cys可以顯著促進成纖維細胞的增殖(P0.05),在5X濃度組為最好�？梢燥@著上調PCNA、K10、K14、K15、P53、P21、BMP4、TGFβ、IVLmTOR等基因mRNA表達量;添加不同濃度的蛋氨酸可顯著抑制成纖維細胞的增殖,而顯著提高PCNA、CCND1、K14、K15,P21,BMP4、TGFβ、mTOR 的 mRNA 表達量;(3)與對照組相比,添加不同濃度的兩種氨基酸均可顯著促進成纖維細胞的增殖(P0.05)。當半胱氨酸的濃度不變,蛋氨酸的濃度逐漸升高時,細胞增殖率在1:1組為最高,隨后逐漸降低。添加不同濃度的兩種氨基酸可以顯著提高細胞PCNA、CCND1、CDC42、K15、P53、LOR、IVL、TGF、mTOR mRNA 的表達量。當?shù)鞍彼岬臐舛炔蛔?半胱氨酸的濃度逐漸升高時,細胞增殖率在3:1時細胞增殖率達到最高,可以顯著提高基因 PCNA、CDC42、K14、K15、P53、IVL、TGFβ mRNA 表達量;(4)與對照組相比,添加MeL可以顯著促進內蒙古絨山羊成纖維細胞的增殖(P0.05)。在濃度為10 pg/ml組的相對增殖率為最低,在濃度為500pg/ml組的相對增殖率達到最高。單一添加MeL可以顯著提高相關基因CCND1、K14、K15、P53、BMP4、LOR、mTOR、P53mRNA 的表達量。(5)與對照組相比,混合添加組均可顯著促進成纖維細胞的增殖(P0.05)。在1:1+500pg/ml組的相對增殖率達到最高,在1:1+700pg/m L組達到最低�；旌咸砑咏M還可以顯著提高相關基因PCNA、K14、mTOR mRNA的表達量。
【圖文】：

圖１表皮的超微結構逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋１邋Ｅｐｉｄｅｒｍａｌ邋ｕｌｔｒａｓｔｎｉｃｔｕｒｅ逡逑

圖２毛囊的結構逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋２邋Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ邋ｏｆ邋ｈａｉｒ邋ｆｏｌｌｉｃｌｅｓ逡逑
【學位授予單位】：內蒙古農業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：S827.5

【參考文獻】

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本文編號：2610979