【摘要】：本論文以體外培養(yǎng)LPS誘導(dǎo)的小鼠腹腔巨噬細(xì)胞為應(yīng)激模型,研究添加不同濃度的沙蔥總黃酮對(duì)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞中炎癥介質(zhì)、細(xì)胞因子含量、相關(guān)基因表達(dá)以及NF-κB信號(hào)通路的影響,以期探討沙蔥總黃酮對(duì)LPS誘導(dǎo)的小鼠腹腔巨噬細(xì)胞炎癥的保護(hù)作用和抗炎作用。本論文由4個(gè)試驗(yàn)組成:試驗(yàn)1沙蔥總黃酮最佳添加濃度的篩選。應(yīng)用CCK-8法篩選沙蔥總黃酮對(duì)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞活力具有促進(jìn)作用的濃度,結(jié)果顯示,與對(duì)照組相比,沙蔥總黃酮濃度在12.5~200μg/mL范圍內(nèi)均能提高小鼠腹腔巨噬細(xì)胞活力。當(dāng)添加沙蔥總黃酮濃度為200μg/mL時(shí)細(xì)胞增值率呈現(xiàn)下降趨勢(shì),故本論文后續(xù)試驗(yàn)中,將沙蔥總黃酮的添加濃度確定為25~100μg/mL。試驗(yàn)2沙蔥總黃酮對(duì)LPS誘導(dǎo)的小鼠腹腔巨噬細(xì)胞培養(yǎng)上清液中相關(guān)炎癥因子的影響。設(shè)置對(duì)照組、LPS應(yīng)激模型組(1μg/mL LPS)、不同濃度沙蔥總黃酮預(yù)處理+LPS組(25、50、100μg/mL沙蔥總黃酮預(yù)處理細(xì)胞1h后加入1μg/mL LPS共同處理細(xì)胞),培養(yǎng)24h后,用Griess法檢測(cè)沙蔥總黃酮對(duì)模型細(xì)胞NO生成量的影響;用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測(cè)定細(xì)胞培養(yǎng)上清液中TNF-α、IL-6、IL-1β、IL-10含量。結(jié)果表明,沙蔥總黃酮能極顯著降低LPS誘導(dǎo)的小鼠腹腔巨噬炎癥細(xì)胞產(chǎn)生NO、TNF-α、IL-6、IL-1β的含量(p0.01)及提高了IL-10的含量(p0.01)。試驗(yàn)3沙蔥總黃酮對(duì)LPS誘導(dǎo)的小鼠腹腔巨噬細(xì)胞中相關(guān)炎癥因子基因表達(dá)量的影響。試驗(yàn)分組同試驗(yàn)2,培養(yǎng)時(shí)間為4~12h。用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)法檢測(cè)TNF-α、IL-6、IL-1β、IL-10、iNOS COX-2 mRNA表達(dá)量。結(jié)果表明,與LPS應(yīng)激模型組相比,沙蔥總黃酮能顯著降低LPS誘導(dǎo)的小鼠腹腔巨噬細(xì)胞內(nèi)iNOS、TNF-α、IL-6、IL-1β、COX-2等炎癥因子的基因表達(dá)量,同時(shí)能顯著提高IL-10的基因表達(dá)量。試驗(yàn)4沙蔥總黃酮對(duì)NF-κB信號(hào)通路的影響。試驗(yàn)設(shè)計(jì)同試驗(yàn)3,培養(yǎng)時(shí)間為4~12h,用RT-PCR法檢測(cè)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞中Myd88、NF-κB的表達(dá)量。試驗(yàn)結(jié)果表明,與LPS應(yīng)激模型組相比,沙蔥總黃酮組在培養(yǎng)4h時(shí)能夠極顯著降低(p0.01)NF-κB、Myd88基因mRNA表達(dá)量,但隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)NF-κB、Myd88基因mRNA表達(dá)量雖然降低,但與LPS應(yīng)激組相比差異不顯著(p0.05)。綜上所述,適宜濃度的沙蔥總黃酮對(duì)LPS誘導(dǎo)的小鼠腹腔巨噬細(xì)胞能直接抑制細(xì)胞因子含量及基因表達(dá)量,可能機(jī)制是通過(guò)抑制NF-κB信號(hào)通路來(lái)實(shí)現(xiàn)其抗炎作用。抑制促炎性細(xì)胞因子基因的表達(dá)。
【學(xué)位授予單位】：內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：S853.7

【參考文獻(xiàn)】

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4 鄢春e，

本文編號(hào)：2609684