發(fā)布時間：2020-03-31 18:42

【摘要】：禽致病性大腸桿菌(Avian pathogenic Escherichia coli,APEC)常引起家禽發(fā)生多種腸道外疾病如心包炎、氣囊炎、肝周炎、蜂窩織炎及敗血癥,具有較高的感染率和死亡率,給養(yǎng)禽業(yè)帶來嚴重損失。以本實驗室構建的禽致病性大腸桿菌脂多糖缺失株E516△lpxL△lpxM(O1)、E058△lpxL△lpxM(O2)、E522△lpxL△lpxM(078)株作為制苗菌株等比例混合,分別輔以白油佐劑道達爾170、白油佐劑Marc52和鋁膠佐劑研制了相應三價滅活疫苗,并對三種佐劑疫苗進行了安全性和免疫效力比較試驗,以確定合適的疫苗佐劑。疫苗佐劑確定后,對該三價疫苗的免疫持續(xù)期進行研究�，F(xiàn)將研究結果報告如下:1、三種不同佐劑疫苗的安全性比較利用制備的三種不同佐劑滅活疫苗,分別以單劑量0.5 mL/羽和雙倍劑量1.0 mL/羽接種14日齡SPF雞進行安全性試驗。試驗結果表明,注射白油佐劑滅活疫苗組的雞,以單劑量0.5 mL/羽免疫,接種疫苗后12-24 h,部分雞出現(xiàn)短時精神沉郁,之后無任何不良反應:以雙倍劑量1 mL/羽免疫時,接種疫苗后5-8 h試驗雞出現(xiàn)精神不佳,24 h內恢復正常,由于雙倍劑量組免疫劑量較大,部分試驗雞注射部位出現(xiàn)0.1-1.2 cm大小不等的結節(jié),但未出現(xiàn)全身不良反應,免疫一周注射部位結節(jié)逐漸消失,生長狀況良好。注射鋁膠佐劑滅活疫苗組的雞,在整個觀察期內飲食和精神狀態(tài)均正常,注射部位亦未見異常。以上結果說明我們所研制的油佐劑疫苗具有良好的安全性。2、三種不同佐劑疫苗的免疫效力試驗以三種不同佐劑疫苗對14日齡SPF雞進行免疫,42日齡時分別以親本株E516(O1)、E058(02)和E522(078)攻毒,進行免疫保護試驗。試驗結果表明,白油佐劑道達爾170疫苗組攻毒后保護比均為7/10,白油佐劑Marc52疫苗組攻毒后保護比分別為5/10、5/10和7/10,鋁膠佐劑疫苗組攻毒后保護比分別為3/10、3/10和5/10,攻毒對照組攻毒后死亡比均為10/10。以上試驗結果表明,鋁膠佐劑疫苗對同源野生株攻毒雞的免疫保護效果差,白油佐劑道達爾170和白油佐劑Marc52疫苗尤其是前者對同源野生株攻毒雞可以提供良好的免疫保護。綜合安全性試驗和免疫保護試驗,我們確定白油佐劑道達爾170佐劑作為研制疫苗的佐劑。3、雞致病性大腸桿菌脂多糖缺失株三價滅活疫苗的免疫持續(xù)期試驗以雞致病性大腸桿菌脂多糖缺失株三價滅活疫苗對14日齡SPF雞進行免疫,分別在免疫后第30 d、第60 d和第90 d進行親本株攻毒試驗,對保護效力、特異性抗體水平及組織病理變化進行評價。試驗結果表明,免疫后第30 d、第60 d和第90 d攻毒,試驗雞均得到不同程度較好保護。由于成年雞對致病性大腸桿菌的敏感性降低,90日齡試驗雞攻毒對照組死亡比減少屬于正�，F(xiàn)象。白羽肉雞的生長周期一般在9周以內,該疫苗應用在白羽肉雞上,一次性免疫即可得到有效的保護。綜合多因素考慮,我們暫定雞致病性大腸桿菌脂多糖缺失株三價滅活疫苗的免疫持續(xù)期為3個月。
【圖文】：

提ＬＰＳ樣品含糖量測定：逡逑好的ｌｍＬ粗制ＬＰＳ溶液，加３邋ｍＬ蒽酮試劑混合均勻后，進行冷卻，１０邋ｍｉｎ，冷卻至室溫后，利用分光光度計進行吸光度ＯＤ６２Ｑ測定。逡逑準葡萄糖含量標準曲線的出回歸方程＞＝－丨９７也２＋１９０．４４NB－丨丨．丨６（１１２＝０．９８６Ｄ６２0值代入上述回歸方程中求得ＬＰＳ糖含量，依據換算情況，，將所得結ＬＰＳ濃度（ｎｇ／ｍＬ）。將確定濃度的粗提ＬＰＳ溶液分裝于１５ｍＬ離心用。逡逑作步驟如下表６。逡逑表６邋ＬＰＳ抗原樣品含糖量測定操作逡逑Ｔａｂｌｅ邋６邋Ｔｈｅ邋ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｏｎ邋ｏｆ邋ｓｕｇａｒ邋ｃｏｎｔｅｎｔ邋ｉｎ邋ＬＰＳ邋ａｎｔｉｇｅｎ邋ｓａｍｐｌｅ逡逑１邐２邐３邐４邐５邐６邐７邐備注逡逑準逡逑液邋０．０５邐０．１０邐０．２０邐０．３０邐０．４０邐０．６０邐０．８０邐置于冰

圖３邋ＬｐｘＬ／ＬｐｘＭ邋ＰＣＲ鑒定結果逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋３邋ＬｐｘＬ／ＬｐｘＭ邋ＰＣＲ邋ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ邋ｒｅｓｕｌｔｓ逡逑疫苗檢驗結果逡逑１）眼觀檢查：所配制的油佐劑疫苗和鋁膠佐劑疫苗外觀呈乳白色。逡逑）疫苗穩(wěn)定性：制備的大腸桿菌油佐劑滅活疫苗，沒有分層破乳現(xiàn)象，經３０００邋ｒｐｍ逡逑１５邋ｍｉｎ，疫苗無分層現(xiàn)象。鋁膠佐劑滅活苗，４°Ｃ取出后振蕩無顏色變化，離心后抗逡逑劑會有分層。逡逑３）疫苗劑型檢測結果：將研制的油佐劑疫苗滴于蒸餾水表面，油滴呈規(guī)則圖形，不逡逑周擴散，證明油乳劑為油包水型。逡逑）不同佐劑滅活疫苗的無菌檢驗：檢驗結果表明，三種滅活疫苗的無菌檢驗均符合逡逑。逡逑不同佐劑滅活疫苗的安全性比較結果逡逑由下表可知，單劑量０．５邋ｍＬ／羽免疫１４日齡健康ＳＰＦ雞，觀察兩周。通過臨床觀察，逡逑爾１７０油佐劑疫苗和Ｍａｒｃ５２油佐劑疫苗接種后１２－２４小時之間，部分雞產生過暫時性逡逑
【學位授予單位】：揚州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：S852.61

【相似文獻】

相關期刊論文 前10條

1 ;訊快[J];國外醫(yī)學(微生物學分冊);1989年05期

2 H.Shaw Warren ,王佑春;疫苗佐劑的前景[J];微生物學免疫學進展;1989年02期

3 金人一;;瘧疾疫苗佐劑能改進rDNA疫苗[J];生物技術通報;1989年01期

4 那君;胡婧雯;楊小茜;胡敏娟;衡宇;路麗明;;細胞因子作為人類疫苗佐劑的研究進展[J];現(xiàn)代免疫學;2016年04期

5 羅燕;谷新利;李星艷;;中藥作為疫苗佐劑的研究概況[J];中國獸醫(yī)雜志;2009年08期

6 王妍,曹淑桂;人用疫苗佐劑的發(fā)展和應用[J];中國生物制品學雜志;2005年03期

7 管孝鞠,吳玉章;人用疫苗佐劑的研究現(xiàn)狀[J];藥學進展;2001年04期

8 成學儉;;蜂膠——一種優(yōu)質的動物疫苗佐劑[J];中國動物保健;2014年03期

9 劉芳;;疫苗佐劑的安全性評價[J];中國藥事;2010年06期

10 王曉娟;廖雪雁;;疫苗佐劑的研究進展[J];微生物學免疫學進展;2008年03期

相關會議論文 前10條

1 韓云飛;李艷輝;田堅;;改性殼聚糖納米顆粒作為疫苗佐劑的研究[A];中國化學會第30屆學術年會摘要集-第十一分會：應用化學[C];2016年

2 王陳蕓;烏美妮;胡凝珠;;新型疫苗佐劑——硫酸軟骨素B免疫增強效果的研究[A];第九屆全國免疫學學術大會論文集[C];2014年

3 王玉霞;朱婷;李倩;麻浩;李海霞;巫亞俊;單俊杰;;板藍根阿拉伯半乳聚糖的理化性質及疫苗佐劑活性研究[A];全國第二屆海洋與陸地多糖多肽及天然創(chuàng)新藥物研發(fā)學術會議論文集[C];2015年

4 馬光輝;;pH敏感型生物可降解高分子納微球的制備及其作為疫苗佐劑的應用研究[A];2016年全國高分子材料科學與工程研討會論文摘要集[C];2016年

5 費迎明;王華鈞;鐘建平;李水法;裘劍飛;周建康;沈華江;湯佳良;黃志榮;祝桂瑯;;粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子作乙型肝炎疫苗佐劑增加抗-HBs應答率的研究[A];第五屆全國肝臟疾病臨床暨中華肝臟病雜志成立十周年學術會議論文匯編[C];2006年

6 孟北乾;徐明愷;張國俊;張惠文;張成剛;;疫苗佐劑與TLR的關系及其未來的發(fā)展趨勢[A];第五屆泛環(huán)渤海生物化學與分子生物學會學術交流會論文集[C];2015年

7 魏超;;一種新型有效的疫苗佐劑能夠通過提高功能性抗體水平與CD4+T細胞分化能力來抵御金黃色葡萄球菌系統(tǒng)性感染[A];第十屆全國免疫學學術大會匯編[C];2015年

8 張?zhí)煨?王秀利;袁野;;DNA疫苗佐劑研究進展[A];2007年全國生化與生物技術藥物學術年會論文集[C];2007年

9 景志忠;蒙學蓮;房永祥;竇永喜;陳國華;才學鵬;;CpG DNA重組質粒作為疫苗佐劑的生物安全性評價[A];中國畜牧獸醫(yī)學會畜牧獸醫(yī)生物技術學分會暨中國免疫學會獸醫(yī)免疫分會第七次研討會論文集[C];2008年

10 單俊杰;姜威;朱婷;王玉霞;;多糖佐劑在疫苗中的應用[A];2011年中國藥學大會暨第11屆中國藥師周論文集[C];2011年

相關重要報紙文章 前5條

1 本報記者 李蘊明;不容忽視 疫苗佐劑標準應時推進[N];醫(yī)藥經濟報;2019年

2 新金融記者 盛長琳;周立橋 讓世界用上中國疫苗佐劑[N];新金融觀察;2018年

3 張國強 蔣建林 張立昌 余平良;疫苗佐劑最新研究進展[N];中國畜牧水產報;2001年

4 本報記者 章勇;頂尖機構鎖定疫苗佐劑 潛在空間有待開掘[N];中國畜牧獸醫(yī)報;2015年

5 韓長芝　楊昊曦 記者 初霞;為家鄉(xiāng)發(fā)展引資引智[N];哈爾濱日報;2009年

相關博士學位論文 前6條

1 李鑫;CTLA-4 mRNA 3'UTR靶向性脫氧寡核苷酸的疫苗佐劑效應[D];吉林大學;2018年

2 張威風;粒徑均一聚乳酸基微球作為亞單位疫苗佐劑的研究[D];中國科學院研究生院(過程工程研究所);2015年

3 鐘石根;血吸蟲病抗獨特型抗體疫苗佐劑的研究[D];南京醫(yī)科大學;2002年

4 侯爵;HIV-1 DNA疫苗佐劑及兩種病毒載體基因表達譜研究[D];中國疾病預防控制中心;2013年

5 魏寧寧;基于分子模擬的激發(fā)態(tài)二氫鍵性質及藥物設計[D];大連理工大學;2013年

6 李平利;硫酸化可德蘭多糖的制備、體外免疫調節(jié)、抗乙肝病毒感染活性及體內用作乙肝疫苗佐劑研究[D];山東大學;2014年

相關碩士學位論文 前10條

1 邵啟文;雞致病性大腸桿菌脂多糖缺失株三價滅活疫苗佐劑的篩選及免疫持續(xù)期的初步研究[D];揚州大學;2019年

2 林雅華;磷酸鈣納米顆粒作為疫苗佐劑的應用與機制研究[D];廈門大學;2018年

3 趙凱悅;殼聚糖凝膠微球作為疫苗佐劑及其干燥工藝的研究[D];佳木斯大學;2018年

4 羅啟慧;豬IL-4和IL-6基因的克隆、表達及疫苗佐劑效應研究[D];西北農林科技大學;2005年

5 董璐;豬支原體肺炎滅活疫苗及活疫苗佐劑研究[D];山西農業(yè)大學;2013年

6 羅婷;新型疫苗佐劑甲磺酸去鐵胺及硫氫化鈉佐劑效應研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學院;2014年

7 陶里;新型疫苗佐劑氫氧化鋅增強甲型肝炎抗原免疫效果的研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學;2008年

8 劉穎;不同疫苗佐劑對OVA誘生CTL免疫應答的影響[D];西北農林科技大學;2011年

9 孫紅巖;多肽納米材料NME、2F在HIV疫苗佐劑及檢測中的應用[D];天津科技大學;2017年

10 王越;新型疫苗佐劑胞外UTP、UDP及甘露寡糖佐劑效應研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學院;2013年

本文編號：2609434