發(fā)布時(shí)間：2020-03-30 12:10

【摘要】：豬繁殖與呼吸綜合征(PRRS)是對(duì)養(yǎng)豬業(yè)危害最大的疾病之一,每年給全世界帶來巨大的經(jīng)濟(jì)損失。PRRS可導(dǎo)致豬群出現(xiàn)精神倦怠,厭食發(fā)熱,早產(chǎn)、流產(chǎn)、死胎、木乃伊及弱仔等癥狀,并影響免疫調(diào)節(jié)功能。云霄縣是漳州市生豬重要基地之一,PRRS的流行也給云霄縣的養(yǎng)豬業(yè)帶來嚴(yán)峻的挑戰(zhàn)。本研究通過對(duì)豬群進(jìn)行PRRS抗體檢測(cè)和抗原檢測(cè),分析目前云霄縣PRRSV的流行及遺傳變異情況,為云霄縣對(duì)PRRS的防控提供理論基礎(chǔ)。本研究采集了云霄縣2013-2017年種豬場(chǎng)、商品代飼養(yǎng)場(chǎng)、散養(yǎng)場(chǎng)己免疫藍(lán)耳病疫苗的豬血清樣本共計(jì)3865份。對(duì)不同年份、季節(jié)的血清樣品進(jìn)行PRRS免疫陽(yáng)性率進(jìn)行調(diào)查。為進(jìn)一步了解云霄縣PRRSV的遺傳變異發(fā)生情況,本研究針對(duì)GP5基因設(shè)計(jì)一對(duì)特異性引物,對(duì)采集的臨床病料進(jìn)行RT-PCR檢測(cè)并進(jìn)行測(cè)序,從陽(yáng)性樣品中選取3株同源性較低的基因序列進(jìn)行分析。對(duì)測(cè)序序列進(jìn)行抗原位點(diǎn)、糖基化位點(diǎn)、磷酸化位點(diǎn)、跨膜結(jié)構(gòu)、二級(jí)結(jié)構(gòu)分析,并與NCBI里的參考毒株序列進(jìn)行比對(duì)分析。本研究取得如下結(jié)果:1.2013-2017年豬血清PRRS抗體陽(yáng)性率最高的是2013年(84.85%),最低的是2014年(82.90%);不同類型養(yǎng)殖場(chǎng)的抗體陽(yáng)性率存在差異,抗體陽(yáng)性率的大小排列順序?yàn)榉N豬場(chǎng)(87.73%)商品代飼養(yǎng)場(chǎng)(83.13%)散養(yǎng)戶(77.50%)。豬群夏秋兩季的抗體陽(yáng)性率明顯高于冬春兩季。2.經(jīng)測(cè)序分析表明,3株P(guān)RRSV與參考株的同源性在61.9%-99.5%之間。FJYX-1相對(duì)參考株,在第23、41位氨基酸出現(xiàn)了磷酸化位點(diǎn)變異,FJYX-2在第23位氨基酸出現(xiàn)了磷酸化位點(diǎn)變異;FJYX-3序列相對(duì)參考株未見明顯變異。3株P(guān)RRSV糖基化位點(diǎn)未見明顯變異。將3株P(guān)RRSV GP5蛋白氨基酸序列與參考株進(jìn)行比對(duì)分析表明,FJYX-1第15、23、41、196位氨基酸位點(diǎn)分別發(fā)生了脯氨酸、絲氨酸、絲氨酸、精氨酸變異,FJYX-2第23、151、196位氨基酸分別發(fā)生了絲氨酸、賴氨酸、精氨酸變異,FJYX-3第28、33、193、196位氨基酸分別發(fā)生了脯氨酸、谷氨酰酸、丙氨酸、組氨酸變異。對(duì)所測(cè)序列翻譯成氨基酸后進(jìn)行同源性分析(圖3-5)抗原肽段預(yù)測(cè)結(jié)果表明這3個(gè)毒株的GP5蛋白存在7-8個(gè)抗原位點(diǎn),其中FJYX-2毒株抗原位點(diǎn)多出了一個(gè)143-NFLLDTK-149抗原肽段。綜上所述,目前云霄縣的PRRS免疫陽(yáng)性率較好。從實(shí)驗(yàn)分析的3株P(guān)RRSV與參考毒株對(duì)比結(jié)果來看,糖基化位點(diǎn)未見明顯的變異,而磷酸化位點(diǎn)、氨基酸位點(diǎn)和抗原肽段都存在一定程度的變異,我們需要密切監(jiān)視PRRSV的變異情況,為云霄縣PRRSV的防控提供有效的理論依據(jù)。
【圖文】：

２結(jié)果逡逑２．１臨床病料ＰＲＲＳＶ檢測(cè)逡逑根據(jù)所設(shè)計(jì)的ＰＲＲＳＶ引物進(jìn)行ＰＣＲ擴(kuò)增，試驗(yàn)結(jié)果表明（圖３－１），陽(yáng)性逡逑樣品能夠擴(kuò)增出１條約６０３ｂｐ的條帶，與預(yù)期片段大小相符，而陰性對(duì)照并未出逡逑現(xiàn)特異性條帶。對(duì)云霄縣動(dòng)物疾病預(yù)防控制中心２０１３－２０１７保存臨床病料３２份逡逑進(jìn)行ＲＴ－ＰＣＲ，結(jié)果顯示，有１２份的病料檢測(cè)為ＰＲＲＳＶ陽(yáng)性，陽(yáng)性率為３７．５％。逡逑Ｍ邋１邐２逡逑７５０逡逑５００邋＇ＩＨｗＭ＇逡逑圖３－１邋ＰＲＲＳＶ陽(yáng)性病料ＰＣＲ檢測(cè)結(jié)果逡逑Ｆｉｇ．邋３－１邋ＰＣＲ邋ｒｅｓｕｌｔｓ邋ｏｆ邋ＰＲＲＳｖ邋ｐｏｓｉｔｉｖｅ邋ｖｅｎｅｒｅａｌ邋ｄｉｓｅａｓｅｓ逡逑Ｍ：質(zhì)量分析ＤＬ２０００邋１．陰性對(duì)照２．陽(yáng)性樣品逡逑Ｍ：ＤＬ２０００邋ｍａｒｋｅｒ邋１．邋Ｎｅｇａｔｉｖｅ邋ｃｏｎｔｒｏｌ邋２．邋Ｐｏｓｉｔｉｖｅ邋ｓａｍｐｌｅ逡逑２．２邋３株ＰＲＲＳＶ毒株測(cè)序及分析逡逑ＰＣＲ產(chǎn)物送生物公司測(cè)序，，選�。保矖l測(cè)序結(jié)果中３條同源性相對(duì)較低的逡逑序列見附錄Ａ。對(duì)測(cè)得的序列進(jìn)行遺傳進(jìn)化分析（圖３－２）。結(jié)果顯示，ＦＪＹＸ－１、逡逑ＦＪＹＸ－２、ＦＪＹＸ－３都與ＨｕＮ、ＴＪ和ＪＸＡ１等藍(lán)耳病毒株同屬一個(gè)分支，而與ＭＮ１８４、逡逑ＬＶ、ＮＡＤＣ－３０等毒株遺傳距離相對(duì)較遠(yuǎn)。對(duì)所測(cè)序列進(jìn)行同源性分析（圖３－３），逡逑結(jié)果顯示，３株序列同源性在９２．９％－９６．７％之間，ＦＪＹＸ－１和ＦＪＹＸ－３，同源性最逡逑２４逡逑

１邐桯悘ｉｔ邐工逡逑Ｆｏｉｓｒｘ－３．邋－Ｃ３Ｃ．－Ｃ邐２．００逡逑Ｃｏｉｉｓｅｒｓｓｕｓ邐ｊｊｇ－ｔｃｉｗｉａｒｓｋｆ邋ｄｗａ＇ｖｅｔｆ＇ｖｉｆ邋ｐｖｌｔｆａｉ＇ｖｓｙｇａｌｔｉ＇Ｃｓｉ＇ａｆ邋Ｉｄｌｔｖｇｌ邋ｔｖｓｔａｇ逡逑ＡＴＣＣ＿ＶＲ２３３２邋．邋ｔｘｔ邋：ＳＶ邐３．５０逡逑ＣＨ—２．ａ．邋Ｃ－ｘｒ．邐Ｆ邋２邐５．５０逡逑ＣＨ－３．Ｒ．邋ｔｉｅｒ．邐Ｆｌｉｆ邐＾ｇｃ邐１５０逡逑－ｉ＾．－ｃｘ－ｃ邐Ｙｙ邐｜邐１５０逡逑ｕＸＡｌ邋．邋ｔｘｔ：邐ＹＹ邐＾ｇＳ邋＾ｇＸ邐２．５０逡逑Ｉ－ＩＭ２．２邋４Ａ．邋ｒｘｒ邐ＹＣ邐ｊ邐ｇｌ：邐Ｊ．５0逡逑ＨＡ３ＤＣ－３０邋．邋ＣｘＣ邐ＹＹ邐Ｋｌ：邐１．５０逡逑Ｒ９Ｓ邋－邋ｎｘ－ｃ邐Ｆｖ邐ｉ邐＾＾ＥＳ邋Ｋ：＾邐￣ｓｏ逡逑Ｔｖｊ．邋Ｃ．ＸＣ邐Ｙ邋２邐ｊ邐＾ｇｌ；邐２５０逡逑Ｆ＂ｊｒｙｘ—３．邋．邋ｎｘＴ．邐Ｗ邐３．３０逡逑Ｆ０￣ｈＴＸ－２邋．邋ｔｘｒ邐ＹＹ邐ｉ邋霞邋１■榅２．ｓｏ逡逑Ｃｏｎｓｅｎｓｔｉｓ邐ｉ’ｙｈｇ：ｒｙｖＩＬｓｓＪ＿ｙａｉＶｃ；ａｉ３邋３ｌｉｃ；ｆ邋■ｖｉｚｒｉａｌｔｒ＾ｃｓｉＥｓｗｉ＇ｙ邋ｓｅ＇ＣＸ＇ｙｔｎｆ邋ｌｌｄｔｋｇ逡逑ＡＴＣＣ＿ＶＲ２３３２邋．邋ｔｘｒ．邐２．９９逡逑ＣＨ－ｌａ．－ｃｘｒ；邐ｐ＇勞＇：R藎保沖澹沖義希茫齲常遙澹潁沐危皺危В保瑰澹瑰義希齲簦幔攏剩澹簦簦哄危鰣危常常瑰義希剩兀粒插澹澹茫兀裕哄危蓿鰣澹皺危保梗瑰義希停蹋鄭澹簦沐危懾澹遙垮危蓿紓歟�；＿b鄭靛危埃梗瑰義希停灣宥澹插澹矗粒澹礤危桑懾澹櫻危掊危渝澹鈴偽福潁皺

本文編號(hào)：2607527