【摘要】：哺乳動(dòng)物Y染色體雄性特異區(qū)在減數(shù)分裂過(guò)程中不與X染色體發(fā)生重組,遵循嚴(yán)格的父系遺傳,是研究父系遺傳多樣性的重要遺傳資源。由于Y染色體測(cè)序極其困難,造成很多物種Y染色體序列很少。目前的研究表明絕大多數(shù)Y染色體基因主要或者特異性的在睪丸組織中表達(dá),并在精子發(fā)生和雄性繁殖力方面扮演著至關(guān)重要的作用。因此本文基于目前現(xiàn)有�？苿�(dòng)物Y染色體引物及根據(jù)牛Y染色體序列設(shè)計(jì)引物,旨在鑒定綿羊Y染色體基因片段和表達(dá)特征,并比較Y染色體基因片段與巖羊、牛、山羊和牦牛同源基因的相似度,掃描所鑒定基因片段在不同綿羊品種中的Y-SNPs,將找到的Y-SNPs和綿羊繁殖性狀進(jìn)行相關(guān)性分析,為鑒定綿羊Y染色體基因片段奠定基礎(chǔ),并為今后綿羊Y染色體單倍型的構(gòu)建、綿羊胚胎性別早期鑒定和公綿羊繁殖力相關(guān)分子標(biāo)記的篩選提供科學(xué)依據(jù)。主要研究結(jié)果如下:1.在分析的73對(duì)引物中,27對(duì)引物為綿羊Y染色體特異性引物。通過(guò)比對(duì)發(fā)現(xiàn)綿羊27個(gè)Y染色體基因片段與巖羊、牛、山羊、牦牛的同源性在81.51%~99.06%。表明Y染色體基因在進(jìn)化過(guò)程中具有一定的保守性。通過(guò)混合池測(cè)序及PCR-RFLP檢測(cè)得到4個(gè)Y-SNPs,其中SRY11只在白薩�？搜蛉后w中發(fā)現(xiàn)g.61 GA的突變;SRY16只在南非肉用美利奴羊群體中發(fā)現(xiàn)g.88AG的突變;EIF2S3Y2在湖羊和灘羊中發(fā)現(xiàn)g.215 CG的突變;ZFY16在薩�？搜蚝湍戏侨庥妹览蛉后w中發(fā)現(xiàn)g.403 GA的突變,其中SRY11、EIF2S3Y2、ZFY16基因片段中發(fā)現(xiàn)的SNPs為本研究首次篩選到。4個(gè)SNPs可組成5個(gè)綿羊Y染色體單倍型。單倍型Ⅰ、單倍型Ⅱ、單倍型Ⅲ、單倍型Ⅳ和單倍型Ⅴ,頻率分別為0.052、0.290、0.071、0.432和0.155。利用SPSS 23.0軟件分析SNPs位點(diǎn)與公羊的繁殖性狀的相關(guān)性。在SRY11片段發(fā)現(xiàn)g.61 GA的突變,與白薩�？搜蜿幠覈o密相關(guān)。在EIF2S3Y2片段發(fā)現(xiàn)g.215 GC的突變,與湖羊睪丸總重量、附睪總重量等性狀顯著相關(guān)。2.通過(guò)RT-PCR方法擴(kuò)增得到綿羊DDX3Y基因CDS全長(zhǎng)1983 bp,其編碼660個(gè)氨基酸,在第199~418位氨基酸之間存在一個(gè)DEXD-box保守結(jié)構(gòu)域。與其同源基因DDX3X在核酸水平、蛋白水平的同源性分別為86.45%、90.33%。根據(jù)�？苿�(dòng)物DDX3Y序列設(shè)計(jì)引物18對(duì),通過(guò)PCR擴(kuò)增及DNAMAN拼接得到綿羊DDX3Y序列12985 bp,比對(duì)發(fā)現(xiàn)綿羊DDX3Y有17個(gè)外顯子。3.DDX3Y、UTY、ZRSR2Y、ZFY、EIF2S3Y 5個(gè)基因在6月齡湖羊心臟、肝臟、脾臟、肺臟、腎臟、背最長(zhǎng)肌及睪丸中廣泛表達(dá)。DDX3Y、ZRSR2Y、EIF2S3Y主要在6月齡湖羊睪丸組織中表達(dá)。Y染色體基因在不同發(fā)育階段湖羊睪丸中的表達(dá)存在差異。隨著湖羊生長(zhǎng)發(fā)育,DDX3Y、ZFY在湖羊睪丸中的表達(dá)上調(diào)。UTY在3月齡湖羊中的表達(dá)量最高,ZRSY2Y在3月齡、6月齡湖羊睪丸中的表達(dá)量較高。EIF2S3Y在3月齡湖羊睪丸中的表達(dá)量較高。DDX3Y、UTY的表達(dá)量與睪丸重量正相關(guān)(r=0.960,P=0.002;r=0.935,P=0.020);ZRSR2Y的表達(dá)量與睪丸重量負(fù)相關(guān)(r=-0.998,P=0.002);ZFY和EIF2S3Y的表達(dá)量與睪丸重量無(wú)相關(guān)性。
【圖文】：

蘭州大學(xué)碩士學(xué)位論文 綿羊 Y 染色體基因的鑒定和 SNPs 篩選1.6 研究?jī)?nèi)容（1）綿羊 Y 染色體基因片段的鑒定及 Y-SNPs 和綿羊的繁殖性狀進(jìn)行相關(guān)性分析。（2）湖羊 DDX3Y 基因全長(zhǎng)、CDS 全長(zhǎng)的擴(kuò)增。（3）綿羊 DDX3Y、UTY、ZRSR2Y、ZFY、EIF2S3Y 基因表達(dá)特征分析。1.7 技術(shù)路線

1 綿羊基因組 DNA 瓊脂糖凝膠 electrophoresis diagram of sheeprmo，美國(guó)）檢測(cè)提取的 DN為 100~300 ng/μL，基因組 D 用于后續(xù)試驗(yàn)。引物對(duì)�？苿�(dòng)物 Y 染色體特異性包括 AMELY3、DDX3Y、SRY6TY1、UTY19、ZFY3、ZFY9、出現(xiàn)擴(kuò)增條帶，在母羊 DNA條帶或非特異性擴(kuò)增，6 對(duì)2S3Y、USP9Y 和 ZFY 序列設(shè)
【學(xué)位授予單位】：蘭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：S826.2

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本文編號(hào)：2606443