天堂国产午夜亚洲专区-少妇人妻综合久久蜜臀-国产成人户外露出视频在线-国产91传媒一区二区三区

雞源禽流感病毒H6N6亞型對小鼠致病性以及在豬和人呼吸道組織復(fù)制的研究

發(fā)布時間:2020-03-28 11:39
【摘要】:背景和目的:H6N6亞型禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)在歐亞大陸野生鳥類和家禽廣泛流行,其宿主范圍逐漸擴大至哺乳動物豬,部分病毒株甚至獲得識別與結(jié)合人型的能力,有進化演變成為直接感染人的潛能,對人類健康和公共衛(wèi)生安全構(gòu)成潛在威脅,但到目前為止,H6N6亞型禽流感病毒如何跨種間屏障傳播哺乳動物和人仍未清楚。本項目應(yīng)用雞源禽流感病毒H6N6亞型體內(nèi)感染小鼠,體外感染豬和人呼吸道組織,觀察病毒對小鼠的致病性、在豬和人呼吸道組織復(fù)制及其病理變化,同時應(yīng)用基因測序法,比較H6N6病毒各基因片段的變化,篩選H6N6病毒感染小鼠、在豬和人復(fù)制的基因特征,為揭示H6N6亞型禽流感病毒跨種屬感染人的潛能及其有利于病毒在人復(fù)制的關(guān)鍵分子標(biāo)記奠定基礎(chǔ)。方法:1.流感病毒的擴增及EID_(50、)TCID_(50)檢測:將選定待用3株陸禽雞H6N6亞型禽流感病毒:A/CK/ZZ/346/2014(簡稱ZZ346);A/CK/JX/20490/2014(簡稱JX20490);A/CK/ZZ/1923/2015(簡稱ZZ1923),接種雞胚擴增,培養(yǎng)48h后收獲雞胚尿囊液。測定EID_(50)、TCID_(50)值以明確BALB/c小鼠體內(nèi)感染和體外感染豬和人組織所使用的病毒稀釋度。2.H6N6病毒體內(nèi)感染BALB/c小鼠:通過鼻腔內(nèi)、眼睛途徑接種小鼠,接種后每天記錄癥狀和體重,1、3、5、7d分別采集咽拭子,3、5、7d分別安樂處死3只攻毒小鼠,取其肺和氣管,一半用于研磨檢測病毒滴度,另一半經(jīng)10%福爾馬林固定后,用作HE染色和免疫組化,接種后14d采集其血樣,用于檢測血清抗體。3.H6N6病毒在體外豬呼吸道組織的復(fù)制:取新鮮豬呼吸道組織,將病毒稀釋液加入豬呼吸道組織,定時采樣取組織培養(yǎng)上清液及組織塊用于后期流感病毒的分離與鑒定,另取完整組織塊經(jīng)10%福爾馬林固定后,用于HE染色和免疫組化檢測病毒抗原。4.H6N6病毒在體外人呼吸道組織的復(fù)制:取新鮮人呼吸道組織,將病毒稀釋液加入人呼吸道組織,定時采樣取培養(yǎng)上清液及組織塊用于后期流感病毒的分離與鑒定,另取完整組織塊經(jīng)10%福爾馬林固定后,用于HE染色和免疫組化檢測病毒抗原。5.流感病毒的分離:將前期實驗采集用于分離培養(yǎng)的標(biāo)本均分兩份,一份接種雞胚,培養(yǎng)48h后收取雞胚尿囊液,HA試驗檢測尿囊液中病毒滴度;另一份接種于MDCK細(xì)胞,培養(yǎng)72h后收取細(xì)胞培養(yǎng)液,HA試驗檢測細(xì)胞液中病毒滴度。6.HI試驗檢測感染動物血清抗體:小鼠感染后14d,采用眼球采血方法取適量血樣,離心取上層血清,應(yīng)用HI試驗檢測血清抗體。7.HE染色觀察動物、組織感染病毒的病理變化:取上述麻醉安樂處死小鼠的呼吸道組織、體外感染豬和人呼吸道組織,組織固定、切片,常規(guī)HE染色,光學(xué)顯微鏡下觀察病理變化。8.免疫組化檢測病毒抗原:取上述安樂處死小鼠的呼吸道組織、體外感染豬和人呼吸道組織,組織固定、切片,免疫組化染色檢測病毒抗原。9.基因測序和篩選關(guān)鍵基因標(biāo)記:提取病毒RNA,PCR反應(yīng)擴增,純化產(chǎn)物,采用Illumina的Solexa系統(tǒng)上機測序病毒全基因,使用全球共享流感數(shù)據(jù)庫(Global initiative on sharing all influenza data,GISAID)準(zhǔn)備相關(guān)病毒數(shù)據(jù),用Bioedit進行序列比較和同源性分析H6N6亞型AIV基因片段的變化,篩選對小鼠致病性以及在豬和人呼吸道組織復(fù)制的基因特點。結(jié)果:1.小鼠感染實驗中,ZZ346病毒株可在小鼠體內(nèi)有效復(fù)制,呼吸道組織研磨液接種雞胚和MDCK細(xì)胞后,病毒分離培養(yǎng)呈陽性;HE染色顯示攻毒后小鼠氣管中有細(xì)胞壞死脫落,肺組織出現(xiàn)炎癥反應(yīng)等現(xiàn)象;免疫組化顯示呼吸道氣管至肺泡組織細(xì)胞內(nèi)病毒NP抗原陽性。JX20490病毒株感染小鼠后,呼吸道組織研磨液接種雞胚和MDCK細(xì)胞,病毒分離培養(yǎng)結(jié)果呈陰性;HE染色顯示小鼠攻毒后氣上皮細(xì)胞壞死脫落,但是肺組織未見明顯病理改變;免疫組化顯示氣管上皮細(xì)胞內(nèi)病毒NP抗原陽性,而肺組織NP抗原陰性。然而,ZZ1923病毒株各項檢測均為陰性。攻毒14d的小鼠血樣,經(jīng)HI實驗檢測,3株病毒的所有小鼠血清樣本中均呈抗體陽性。2.流感病毒在豬體外呼吸道復(fù)制中,3株雞H6N6亞型AIV感染后的組織樣本,經(jīng)雞胚接種后病毒分離檢測呈陽性,HE染色顯示感染后出現(xiàn)肺局部細(xì)胞壞死,免疫組化顯示肺泡細(xì)胞內(nèi)病毒NP抗原陽性。3.流感病毒在人體外呼吸道復(fù)制中,3株雞H6N6亞型AIV感染后的組織樣本,經(jīng)雞胚接種后病毒分離檢測呈陽性。ZZ346病毒株感染后的肺組織切片,HE染色顯示感染后均出現(xiàn)局部細(xì)胞壞死,免疫組化顯示細(xì)胞內(nèi)病毒NP抗原陽性,而接種JX20490、ZZ1923病毒株的肺組織切片未出現(xiàn)明顯病理改變、未檢測出病毒NP抗原。4.基因測序分析,3株雞H6N6亞型AIV的HA裂解位點模式均為PQIETG/GL,顯示單個堿性氨基酸切割位點的特征,屬低致病性病毒,3株雞的HA均出現(xiàn)P186T突變,但唯有ZZ346病毒株的HA158位點有氨基酸缺失以及NA頸區(qū)出現(xiàn)11個氨基酸(59-69)缺失。結(jié)論:1.雞源H6N6亞型流感病毒可在小鼠呼吸道有效復(fù)制、引發(fā)呼吸道炎癥病變,表明雞源H6N6亞型流感病毒可跨種屬間屏障直接感染小鼠。2.雞源H6N6亞型流感病毒可在體外豬組織有效復(fù)制,其中ZZ346病毒株均可在豬和人肺組織有效復(fù)制,提示該病毒株具有感染豬和人的潛能以及與人型SA-α2,6-Gal受體結(jié)合的傾向。3.H6N6亞型AIV的HA裂解位點模式屬低致病性病毒,ZZ346病毒株HA出現(xiàn)P186T突變、HA158位點有氨基酸缺失以及NA頸區(qū)出現(xiàn)11個氨基酸(59-69)缺失,結(jié)合ZZ346病毒株均可在人肺泡組織有效復(fù)制的結(jié)果,提示上述基因位點改變有助于H6N6亞型AIV在人肺泡組織有效復(fù)制。
【圖文】:

小鼠,后體,臨床癥狀,變化趨勢


病毒 H6N6 亞型對小鼠致病性以及在豬和人呼吸道組織復(fù)制的研究 2019 屆碩/c 小鼠體內(nèi)感染實驗結(jié)果后小鼠臨床癥狀改變及體重變化情況B/c 小鼠接種病毒后,,經(jīng)觀察可見其表現(xiàn)出活動減少、飲亂、呼吸較急促等臨床癥狀,但此類臨床癥狀一般 3-5 后的第一天體重下降,隨后緩慢恢復(fù)并逐漸升高,其變示。

肺組織,HE染色,無明,炎癥反應(yīng)


36圖 1-2 3 株 H6N6 AIV 感染小鼠肺組織 HE 染色結(jié)果,200×。A:ZZ346 感染小鼠肺組織出現(xiàn)血管充血、炎癥細(xì)胞浸潤;B:JX20490 感染小鼠肺無明顯病變;C:ZZ1923 感染小鼠肺無明顯病變D: 陽性對照組:肺組織出現(xiàn)明顯的炎癥反應(yīng);E:空白對照組。Figure 1-2 Results of HE staining in lung tissues of 3 strains of H6N6 AIV infected mice, 200×. Apulmonary tissue of ZZ346 infected mice showed vascular congestion and inflammatory reaction; BJX20490 infected mice showed no obvious lung lesions; C: no obvious pulmonary lesions were found ithe infected mice ZZ1923; D: positive control group; E: blank control group.
【學(xué)位授予單位】:廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】:碩士
【學(xué)位授予年份】:2019
【分類號】:S852.65

【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 華宇;;如何面對禽流感?[J];紫光閣;2004年03期

2 魏傳芳;李詠梅;;禽流感病毒與人類流感病毒的關(guān)系[J];萊鋼科技;2006年02期

3 何浙生;;禽流感病毒的生物學(xué)特性與檢測方法[J];浙江檢驗醫(yī)學(xué);2004年01期

4 王瀟;曹琛福;黃超華;林彥星;花群義;賈偉新;;禽流感病毒H5亞型RT-exoRPA檢測方法的建立[J];中國獸醫(yī)學(xué)報;2018年12期

5 楊紅杰;;禽流感疾病的預(yù)防控制思路探討[J];農(nóng)村實用技術(shù);2019年05期

6 曹藍(lán);馬鈺;陳藝韻;魯恩潔;李魁彪;狄飚;;2016年廣州市禽類交易市場禽流感病毒監(jiān)測與分析[J];中國衛(wèi)生檢驗雜志;2018年05期

7 李偉;王松;李寧;;我國禽流感的研究進展及成就[J];當(dāng)代畜禽養(yǎng)殖業(yè);2018年06期

8 劉秀梵;;加強監(jiān)測,從源頭控制和根除家禽流感病毒[J];北方牧業(yè);2018年15期

9 孫燕;李治;;禽流感病毒 跨越物種傳播的研究[J];中學(xué)生物教學(xué);2005年12期

10 王路;惠永華;趙建東;衛(wèi)陸梅;王偉杰;燕素萍;;不同禽流感病毒實時熒光RT-PCR試劑盒的比較[J];黑龍江畜牧獸醫(yī);2016年24期

相關(guān)會議論文 前10條

1 陳化蘭;;禽流感病毒與公共衛(wèi)生[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會2014年學(xué)術(shù)年會論文集[C];2014年

2 春陽;李東;;再論“以科學(xué)發(fā)展觀應(yīng)對禽流感事件”——評禽流感病毒變種兩次恐慌論[A];首屆中國黃羽肉雞行業(yè)發(fā)展大會會刊[C];2008年

3 鄧潔麗;段明星;俞初一;江龍;;聚聯(lián)乙炔有序組裝體在識別禽流感病毒方面的應(yīng)用研究[A];中國化學(xué)會第十二屆膠體與界面化學(xué)會議論文摘要集[C];2009年

4 李嬌;王金良;管宇;沈志強;;禽流感病毒診斷方法的研究進展[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會家畜傳染病學(xué)分會第七屆全國會員代表大會暨第十三次學(xué)術(shù)研討會論文集(上冊)[C];2009年

5 孫恩澤;謝敏;趙海粟;黃碧海;劉書琳;張萬坡;張志凌;王漢中;龐代文;;量子點標(biāo)記禽流感病毒[A];第六屆全國化學(xué)生物學(xué)學(xué)術(shù)會議論文摘要集[C];2009年

6 劉桂林;王志宇;張珊珊;;RNAi技術(shù)及其在抗禽流感病毒感染中的應(yīng)用[A];全國動物生理生化第十一次學(xué)術(shù)交流會論文摘要匯編[C];2010年

7 王志宇;張議文;劉桂林;;禽流感病毒的分子生物學(xué)研究進展[A];全國動物生理生化第十一次學(xué)術(shù)交流會論文摘要匯編[C];2010年

8 王志宇;劉桂林;張議文;梁仲;張珊珊;衛(wèi)吉蕓;;禽流感病毒的分子診斷技術(shù)[A];全國動物生理生化第十二次學(xué)術(shù)交流會論文摘要匯編[C];2012年

9 劉麗玲;王秀榮;陳化蘭;;real-time RT-PCR檢測禽流感病毒的初步探討[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會家畜傳染病學(xué)分會第六屆全國會員代表大會暨第11次學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2005年

10 李艷華;佟恒敏;于康震;;抗禽流感病毒中草藥的研究[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會2003年學(xué)術(shù)年會論文集[C];2003年

相關(guān)重要報紙文章 前10條

1 本報記者 王靜;禽流感傳播罪魁:家禽還是候鳥[N];中國科學(xué)報;2012年

2 趙熙熙;美重啟爭議性禽流感病毒實驗[N];中國科學(xué)報;2019年

3 王方 編譯;亞洲馬為何不怕禽流感[N];中國科學(xué)報;2019年

4 本報記者 周映夏 通訊員 黃海航;注意防控禽流感和流感[N];中山日報;2019年

5 刁有祥;規(guī);唸銮萘鞲械姆揽卮胧N];河北科技報;2017年

6 本報記者 董碧水;杭州全面防控禽流感 禽蛋業(yè)遭受打擊[N];中國青年報;2013年

7 記者 王夢婕 實習(xí)生 謝宛霏;北京進入防控禽流感應(yīng)急狀態(tài)[N];中國青年報;2013年

8 本報記者 劉坤U

本文編號:2604401


資料下載
論文發(fā)表

本文鏈接:http://sikaile.net/yixuelunwen/dongwuyixue/2604401.html


Copyright(c)文論論文網(wǎng)All Rights Reserved | 網(wǎng)站地圖 |

版權(quán)申明:資料由用戶15b2f***提供,本站僅收錄摘要或目錄,作者需要刪除請E-mail郵箱bigeng88@qq.com