【摘要】：脂滴是細胞內(nèi)儲存脂質(zhì)的細胞器,在多種組織器官中都有分布,脂滴通過其代謝產(chǎn)物影響機體的多種功能。子宮頸作為雌性動物生殖系統(tǒng)中重要的生殖器官,在不同生殖時期有著不同的功能和狀態(tài)。本課題組已經(jīng)通過子宮頸的超微結(jié)構(gòu)和油紅O染色,發(fā)現(xiàn)子宮頸上皮中存在大量脂滴。本研究采用各種方法證明與脂滴代謝相關(guān)的蛋白在子宮頸組織中的表達情況,以了解不同生殖時期脂滴的代謝狀態(tài),為以后研究子宮頸脂滴在生殖上的作用提供理論基礎(chǔ)。為確保小鼠子宮頸取材的準確性,本試驗首先通過對空懷小鼠生殖道進行橫切和縱切并進行HE染色,以了解子宮體、子宮頸和陰道各自組織學特點。結(jié)果顯示子宮體上皮為單層柱狀上皮,上皮下組織中有腺管。而子宮頸內(nèi)口上皮與子宮體類似,但上皮下組織中無腺管,子宮頸外口處為復層鱗狀上皮,與陰道復層扁平上皮不同,上皮下組織也無腺管。其次,分別取空懷期、妊娠期、和分娩期的成年小鼠子宮頸組織做了電子顯微鏡觀察。結(jié)果顯示三個時期子宮頸組織都有大量脂滴存在,且集中在上皮細胞中�？諔哑谧訉m頸上皮細胞中的脂滴密度均勻,主要在細胞核下,細胞中自噬體較少。妊娠期和分娩期子宮頸上皮細胞中脂滴密度不均勻,部分脂滴空泡化,細胞中自噬體數(shù)量較多。說明妊娠期和分娩期,脂滴發(fā)生代謝,細胞中自噬增強。最后,通過免疫組織化學法和免疫印跡法對與脂滴代謝相關(guān)的幾個重要的蛋白進行定位與定量研究。結(jié)果表明與脂滴代謝相關(guān)的蛋白在子宮頸組織中表達量各異。與脂滴合成相關(guān)的核受體蛋白PPARγ在空懷期表達量比較高,而妊娠期和分娩期表達量比較低;與脂滴分解相關(guān)的蛋白HSL和ATGL在妊娠期表達量最高,分娩期其次,表達量最低的是空懷期。cAMPK通過磷酸化HSL促進脂滴代謝,其表達規(guī)律和HSL類似;AMPK在能量代謝中發(fā)揮重要的作用,但是在宮頸上皮中幾乎不表達,而在上皮下結(jié)締組織和肌肉組織中表達量比較高。分娩期表達量最高,其次是妊娠期,空懷期最低;cPLA2是分解細胞內(nèi)磷脂的酶,妊娠期和分娩期表達明顯比空懷期高;通過免疫組織化學法對PGE2進行定位。結(jié)果顯示,子宮頸上皮中含有大量PGE2;LC3在子宮頸上皮中陽性比較高,通過免疫印跡法顯示妊娠期和分娩期LC3表達量均比空懷期高。通過以上結(jié)果證明,妊娠期和分娩期子宮頸上皮細胞中脂滴發(fā)生明顯的分解代謝。其分解產(chǎn)物可能是PGE2的合成原料,妊娠期和分娩期子宮頸上皮細胞中發(fā)生明顯的自噬,和脂滴代謝有關(guān)。
【圖文】：

脂滴為圓形結(jié)構(gòu)。通常它們的直徑在非脂肪細胞中為 0.1-脂肪細胞中可以達到超過 100μm。脂滴表面不與常規(guī)單位膜結(jié)合，，而是oto and Parton, 2011)。脂滴磷脂包括磷脂酰膽堿（PC），磷脂酰乙醇胺（醇和溶血磷脂，并且它們中的一些具有獨特的性質(zhì)(Mak, 2012)。脂滴的游離膽固醇（FC），但不能排除核心中存在某些磷脂和游離膽固醇的menyi et al., 2015)。體被單層的兩親性磷脂，糖脂和甾醇包圍，含有包圍中性脂質(zhì)的疏水核甘油（TAG），二�；视停―AG）或甾醇酯(Lin et al., 2014)�，F(xiàn)在越明，大多數(shù)脂質(zhì)體含有特定的蛋白質(zhì)群體（張利紅等，2006），這些蛋緊密結(jié)合在它們的表面上(Lin et al., 2014)。這些蛋白質(zhì)可能在脂質(zhì)體生物謝中起作用(Arrese et al., 2008)。

圖 2 脂滴的形成(Sally and Parton, 2006)caveolin-截短 - 突變 - 綠色 - 熒光 - 蛋白質(zhì)融合蛋白的形成。在添加脂肪酸（t = 0 min）之前，Cav3 DGV- 爾基體區(qū)域（圖像已被反轉(zhuǎn)以顯示 GFP 的深色染色）。添現(xiàn)在整個細胞中（此處顯示 t = 30min 的圖像）b. 在脂的小葉之間合成中性脂質(zhì)。成熟脂滴從 ER 膜發(fā)芽形成獨滴相關(guān)蛋白。一些最了解的脂滴相關(guān)蛋白是 PAT - 結(jié)構(gòu)水的脂質(zhì)酯核心和周圍的磷脂單層構(gòu)成(Martin and Par不同于具有含水量和磷脂雙層的常規(guī)囊泡細胞器的許脂滴的一個長期問題是它們是如何在細胞內(nèi)形成的。普動物細胞中的脂滴形成如下：（1）甘油三酯（TG）和膽
【學位授予單位】：山東農(nóng)業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：S857.2

【參考文獻】

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本文編號：2600013