【摘要】：脫氧雪腐鐮刀菌烯醇(deoxynivalenol,DON)是產(chǎn)生于鐮刀菌屬真菌的一種真菌毒素。DON具有細胞毒性、免疫毒性以及“三致”作用等。目前,有關(guān)DON神經(jīng)毒性的研究仍不完善,有待于進一步探索。為了研究DON對仔豬神經(jīng)毒性的作用機制,本試驗首先進行禾谷鐮刀菌培養(yǎng),制作DON飼料以備體內(nèi)試驗使用。試驗選擇30頭臨床檢查健康且體況指標(biāo)相近的21日齡“杜×長×大”三元雜交斷奶仔豬,按單因素試驗設(shè)計方案,將仔豬隨機分為對照組、DON低劑量組和DON高劑量組,每組10頭。對照組飼喂基礎(chǔ)飼料,DON低劑量組和高劑量組分別飼喂含1 mg/kg和2 mg/kg的DON飼料,自由飲水。試驗期60 d。試驗結(jié)束時,每組解剖5頭仔豬,迅速剝離腦組織并分離大腦皮質(zhì)、小腦、延髓和海馬。觀察海馬組織的病理結(jié)構(gòu)和超微結(jié)構(gòu)的變化;使用ELISA方法檢測腦組織的氧化和抗氧化指標(biāo)、神經(jīng)遞質(zhì)以及鈣離子濃度;使用實時定量熒光PCR(qRT-PCR)技術(shù)檢測CaM和CaMKⅡmRNA相對表達量;使用蛋白質(zhì)印跡法(WB)檢測CaM、CaMKⅡ以及p-CaMKⅡ的蛋白水平。試驗結(jié)果如下:1)海馬組織病理切片觀察顯示,對照組海馬組織結(jié)構(gòu)完整。低劑量組海馬的組織間隙增大,部分神經(jīng)細胞周圍的小膠質(zhì)細胞增多;高劑量組海馬組織稀疏,噬神經(jīng)現(xiàn)象明顯。透射電鏡掃描顯示,對照組海馬細胞正常;低劑量組海馬神經(jīng)元胞體輕度變性,染色質(zhì)分布不均,線粒體腫脹且部分呈空泡變性;高劑量組胞體出現(xiàn)水樣變性甚至壞死,胞體腫脹,細胞膜與核膜被破壞,線粒體空泡變性,部分細胞器消失。2)與對照組相比,大腦皮質(zhì)中的超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性在高劑量組顯著降低(P0.05);谷胱甘肽過氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)活性在高、低劑量組均呈極顯著降低(P0.01);高、低劑量組的丙二醛(malondialdehyde,MDA)濃度均極顯著升高(P0.01);高劑量組的NO濃度極顯著增加(P0.01),小腦中的SOD活性在高劑量組極顯著降低(P0.01);高、低劑量組中的GSH-Px活性均極顯著降低(P0.01);高、低劑量組的NO濃度均極顯著升高(P0.01),延髓中SOD和GSH-Px的活性在高、低劑量組均極顯著降低(P0.01);高、低劑量組的NO濃度均極顯著升高(P0.01),海馬中的SOD活性在高、低劑量組均極顯著降低(P0.01);高劑量組的GSH-Px活性極顯著降低(P0.01),高劑量組的MDA和NO濃度極顯著升高(P0.01)。3)與對照組相比,大腦皮質(zhì)、小腦、延髓和海馬中,高劑量組的5-羥色胺(5-HT)的濃度均極顯著升高(P0.01),延髓中的5-HT濃度在低劑量組極顯著升高(P0.01)。與對照組相比,海馬中的去甲腎上腺素(norepinephrine,NE)濃度在低劑量組顯著升高(P0.05);高劑量組的NE濃度呈極顯著升高(P0.01)。與對照組相比,大腦皮質(zhì)、小腦和海馬組織中的多巴胺(dopamine,DA)濃度在高劑量組均呈極顯著降低(P0.01),小腦中的DA濃度在低劑量組極顯著降低(P0.01),延髓中DA濃度在高劑量組顯著升高(P0.05)。與對照組相比,大腦皮質(zhì)和海馬的γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid,GABA)濃度在高劑量組極顯著降低(P0.01);延髓的GABA濃度在高劑量組顯著下降(P0.05)。在大腦皮質(zhì)、小腦、延髓和海馬組織中,與對照組相比,高、低劑量組的乙酰膽堿(acetylcholine,ACH)濃度均極顯著降低(P0.01)。4)與對照組相比,大腦皮質(zhì)、小腦、延髓和海馬中的鈣離子濃度,高劑量組均極顯著升高(P0.01),低劑量組的小腦和延髓中的鈣離子濃度均極顯著上升(P0.01)。與對照組相比,大腦皮質(zhì)中的CaM和CaMKⅡmRNA基因相對表達量在低、高劑量組均極顯著降低(P0.01),小腦中的CaM和CaMKⅡmRNA表達量在高劑量組均呈極顯著降低(P0.01),低劑量組的CaMKⅡmRNA表達量呈極顯著降低(P0.01),延髓中CaM mRNA表達量在低劑量組顯著降低(P0.05),低劑量組和高劑量組的CaMKⅡmRNA表達量均極顯著降低(P0.01),海馬中的CaM mRNA表達量在高劑量組呈極顯著降低(P0.01),低劑量組和高劑量組的CaMKⅡmRNA表達量均極顯著降低(P0.01)。與對照組相比,在大腦皮質(zhì)中的CaM蛋白水平在高、低劑量組均顯著降低(P0.05),小腦和延髓中的CaM蛋白水平在高劑量組呈極顯著降低(P0.01),延髓中的CaM蛋白水平在低劑量組顯著降低(P0.05)。在海馬中的CaM蛋白水平在高、低劑量組均呈極顯著降低(P0.01)。與對照組相比,大腦皮層和海馬中的CaMKⅡ蛋白磷酸化水平在高、低劑量組均呈極顯著升高(P0.01),在小腦和延髓中的CaMKⅡ蛋白磷酸化水平在高劑量組極顯著降低(P0.01)。綜上所述,DON可引起仔豬腦組織形態(tài)結(jié)構(gòu)的損傷,誘導(dǎo)氧化損傷作用和神經(jīng)遞質(zhì)分泌紊亂,導(dǎo)致神經(jīng)組織內(nèi)鈣超載,腦組織內(nèi)CaM mRNA相對表達量和CaM蛋白水平下調(diào),CaMKⅡmRNA相對表達量呈下調(diào)趨勢,同時CaMKⅡ蛋白磷酸化水平升高。表明DON可對仔豬產(chǎn)生一定的神經(jīng)毒性。
【圖文】：

圖 2-1 海馬切片圖（HE 染色）Fig 2-1 Slice chart of hippocampal tissue（HE）注：A1，A2 為對照組；B1，，B2 為低劑量組；C1，C2 為高劑量組放大倍數(shù)：A1，B1，C1 為 100×；A2，B2，C2 為 400×圖 A1，B1，C1 中的紅色方框放大后分別為圖 A2，B2，C2

圖 2-2 仔豬海馬組織超微結(jié)構(gòu)圖Fig.2-2 Ultrastructure map of hippocampal tissue注：A1，A2 為對照組；B1，B2 為低劑量組；C1，C2 為高劑量組放大倍數(shù)：A1，B1，C1 為 8000×；A2，B2，C2 為 20000×圖 A1，B1，C1 中的紅色方框放大后分別為圖 A2，B2，C2
【學(xué)位授予單位】：安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：S859.8

【參考文獻】

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1 李海軍;孫蘇陽;王永軍;徐文靜;蔣守華;;小麥赤霉病的鑒別與防治[J];安徽農(nóng)業(yè)科學(xué);2009年35期

2 盧寧;俞捷;許潔;陳佳瑜;張仁義;繼海續(xù);;壬基酚對仔代腦組織AchE和ChAT活性的影響[J];重慶醫(yī)科大學(xué)學(xué)報;2009年09期

3 王云;豐偉悅;趙宇亮;柴之芳;;納米顆粒物的中樞神經(jīng)毒性效應(yīng)[J];中國科學(xué)(B輯:化學(xué));2009年02期

4 邢濤;James J.Pestka;;脫氧雪腐鐮刀菌烯醇的毒性、作用機理以及對動物健康的危害[J];養(yǎng)殖與飼料;2008年11期

5 劉秀芳;張愛華;張洪英;何成華;樊彥紅;張海彬;;脫氧雪腐鐮刀菌烯醇誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細胞凋亡及其凋亡相關(guān)因子的初步研究[J];畜牧獸醫(yī)學(xué)報;2008年06期

6 王文龍;劉陽;李少英;云月英;;脫氧雪腐鐮刀菌烯醇與人類健康[J];食品研究與開發(fā);2008年06期

7 高萱;孫立寧;孔哲;陳偉;管振龍;;惡心嘔吐及其神經(jīng)化學(xué)機制的研究[J];醫(yī)學(xué)綜述;2007年14期

8 鄧舜洲;游淑珠;許楊;;脫氧雪腐鐮刀菌烯醇人工抗原的研制[J];食品科學(xué);2007年02期

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1 紀劍;脫氧雪腐鐮刀菌烯醇和玉米赤霉烯酮對昆明小鼠和巨噬細胞ANA-1代謝組的聯(lián)合毒性機制研究[D];江南大學(xué);2017年

2 吳文達;B型單端孢霉烯族毒素誘導(dǎo)拒食和嘔吐的機理研究[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2012年

本文編號：2600158