【摘要】：羊偽結(jié)核病由偽結(jié)核棒狀桿菌引起,該病幾乎存在于世界上所有的綿羊和山羊生產(chǎn)養(yǎng)殖區(qū)域,我國內(nèi)蒙古、陜西、甘肅、新疆、云南、上海、浙江、廣西和廣東等地均有報道。由于其具有慢性和亞臨床感染特征,為養(yǎng)羊業(yè)帶來了重大的經(jīng)濟(jì)損失。富平是中國重要的奶山羊養(yǎng)殖基地,關(guān)中奶山羊養(yǎng)殖已成為富平農(nóng)村地區(qū)的經(jīng)濟(jì)支柱產(chǎn)業(yè)。近年,富平奶山羊羊群中偽結(jié)核病廣為流行,嚴(yán)重影響了羊養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)的健康生產(chǎn)。本研究在陜西富平不同地區(qū)的養(yǎng)殖場,調(diào)查偽結(jié)核病疫情并采集了疑似偽結(jié)核病患羊的膿汁樣品,通過分離純化、革蘭染色鏡檢、生化試驗、PCR檢測等方法對分離菌株進(jìn)行鑒定;通過PCR方法檢測毒力基因;通過K-B紙片法對病原菌進(jìn)行藥物敏感性試驗,進(jìn)一步檢測其耐藥基因。獲得的研究結(jié)果如下:1.從陜西富平地區(qū)采集的23份患病奶山羊膿汁樣品中分離出了14株疑似偽結(jié)核棒狀桿菌菌株。分離菌株在含5%綿羊鮮血的瓊脂培養(yǎng)基上呈白色,菌落邊緣整齊,易被推動,干燥且易碎;革蘭染色陽性,菌體多為球桿狀或棒狀,無芽孢、無莢膜、不能運(yùn)動,多呈單個散在分布或呈柵欄狀、“V”型排列。分離菌株的菌落特征和染色鏡檢結(jié)果與偽結(jié)核棒狀桿菌相符;分子生物學(xué)檢測結(jié)果表明,14株分離菌與GenBank中C.p參考株16S rRNA核苷酸同源性達(dá)99%以上。2.對偽結(jié)核棒狀桿菌的毒力基因檢測表明,14株菌株均擴(kuò)增出了偽結(jié)核棒狀桿菌的5種主要毒力基因,包括PLD,Fag A,Fag B,Fag C,Fag D。3.藥物敏感性試驗結(jié)果顯示,本次分離菌株對四環(huán)素、青霉素、克拉霉素、利福平、頭孢唑啉等多種抗生素敏感,對阿米卡星、鏈霉素等抗生素表現(xiàn)耐藥;耐藥基因檢測發(fā)現(xiàn)86%(12/14)的分離菌株攜帶有介導(dǎo)氨基糖苷類藥物的耐藥基因,100%(14/14)的分離菌株攜帶介導(dǎo)β-內(nèi)酰胺類藥物的耐藥基因,未檢測到介導(dǎo)利福平的耐藥基因。
【圖文】：

西北農(nóng)林科技大學(xué)碩士學(xué)位論文/mL 的瓊脂糖凝膠，在膠孔中依次加入電泳儀電壓 120 V、電流 10A，30 min。。羊鮮血的瓊脂培養(yǎng)基上培養(yǎng) 24 h 后呈（圖 2-2，a），培養(yǎng)至 48 h，其直徑可分離純化的單菌落在 LB 液體培養(yǎng)基中上部澄清，而試管底部出現(xiàn)顆粒樣沉淀呈單個散在分布或呈柵欄狀、“V”型排列結(jié)果與偽結(jié)核棒狀桿菌相符。

β溶血環(huán)出現(xiàn)。分離純化的單菌落在 LB 液體培養(yǎng)基中培養(yǎng) 24 h 后，48 h 后培養(yǎng)基上部澄清，，而試管底部出現(xiàn)顆粒樣沉淀。革蘭染色陽狀或棒狀，多呈單個散在分布或呈柵欄狀、“V”型排列（圖 2-2，b）征和染色鏡檢結(jié)果與偽結(jié)核棒狀桿菌相符。圖 2-1 羊偽結(jié)核病臨床病變Fig.2-1 ovine pseudotuberculosis clinical pathology
【學(xué)位授予單位】：西北農(nóng)林科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：S852.61

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本文編號：2599149