發(fā)布時(shí)間：2020-03-24 11:50

【摘要】：豬Delta冠狀病毒(Porcine deltacoronavirus,PDCoV)是一種新發(fā)現(xiàn)的冠狀病毒,臨床上主要引起感染仔豬出現(xiàn)水樣腹瀉、嘔吐和脫水等癥狀,和豬傳染性胃腸炎病毒(Porcine transmissible gastroenteritis virus,TGEV)感染引起的臨床癥狀極為類似,且臨床上PDCoV和TGEV混合感染時(shí)有發(fā)生,單靠臨床診斷很難區(qū)分兩種疾病,因此建立同時(shí)檢測(cè)且區(qū)分PDCoV和TGEV的檢測(cè)方法具有重要的臨床意義。本研究根據(jù)Gen Bank中收錄的PDCoV N基因和TGEV N基因序列設(shè)計(jì)了2對(duì)引物,在同一反應(yīng)體系中同時(shí)擴(kuò)增PDCoV的N基因片段和TGEV的N基因片段,通過(guò)對(duì)RT-PCR反應(yīng)條件的優(yōu)化,建立了同時(shí)檢測(cè)PDCoV和TGEV的雙重RT-PCR方法,并對(duì)該方法進(jìn)行了特異性、靈敏性和重復(fù)性研究。結(jié)果顯示,所建立的雙重RT-PCR對(duì)PDCoV和TGEV的最低檢測(cè)量分別是3.14×102copies/μL和3.68×103copies/μL,利用該雙重RT-PCR方法對(duì)豬流行性腹瀉病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)、豬博卡病毒(Porcine bocavirus,PBo V)、豬繁殖與呼吸綜合征病毒(Porcine respiratory and reproductive syndrome virus,PRRSV)和豬偽狂犬病毒(P.pseudorabies virus,PRV)的擴(kuò)增結(jié)果均為陰性,顯示出較好的特異性。為了解所建立的雙重RT-PCR方法的臨床應(yīng)用效果,對(duì)252份臨床樣品進(jìn)行了檢測(cè)。結(jié)果表明,雙重RT-PCR檢出PDCoV陽(yáng)性樣品31份(陽(yáng)性率為12.30%),TGEV陽(yáng)性樣品12份(陽(yáng)性率為4.76%),同時(shí)感染PDCoV和TGEV的陽(yáng)性樣品2份(陽(yáng)性率為0.79%),且檢測(cè)結(jié)果與單一PDCoV和TGEV RT-PCR相符。因此,本研究所建立的雙重RT-PCR方法可用于PDCoV和TGEV的臨床檢測(cè),為進(jìn)一步研究PDCoV和TGEV的臨床鑒別診斷和流行病學(xué)調(diào)查提供了理論依據(jù)和技術(shù)支持。

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