【摘要】：犬乳腺腫瘤是一種嚴(yán)重危害犬類健康的腫瘤性疾病,可以通過惡性增殖、轉(zhuǎn)移、侵襲等生物性行為損傷臟器而導(dǎo)致器官衰竭�，F(xiàn)階段對(duì)于犬乳腺腫瘤多采用手術(shù)及放化療法進(jìn)行治療,但通常治療后會(huì)出現(xiàn)副作用,并且預(yù)后極易復(fù)發(fā)。白藜蘆醇(Resveratrol)作為中藥提取物,自從1997年被Jang M在《Nature》上發(fā)表文章論述了其抗腫瘤作用,近些年來白藜蘆醇逐漸成為了抗腫瘤機(jī)制研究的熱門靶點(diǎn)。本試驗(yàn)研究了白藜蘆醇對(duì)犬乳腺腫瘤細(xì)胞血管生成機(jī)制及Notch信號(hào)通路是否具有影響及影響機(jī)制。選取狀態(tài)相同的處于對(duì)數(shù)增長(zhǎng)期的的犬乳腺腫瘤細(xì)胞株CHMm,采用10μM、20μM、40μM、80μM、160μM濃度的Res分別對(duì)細(xì)胞進(jìn)行處理。然后收集各組細(xì)胞進(jìn)行CCK-8細(xì)胞活性檢測(cè);Elisa檢測(cè)血管再生因子(VEGF)、細(xì)胞基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP-14)及缺氧誘導(dǎo)因子(HIF-1α)的含量;實(shí)時(shí)熒光定量PCR法對(duì)腫瘤細(xì)胞Notch1、Jagged1、Dll4及Hes-5基因的相對(duì)表達(dá)量進(jìn)行檢測(cè);使用Western blot方法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)Notch1、Jagged1、Dll4及Hes-5蛋白的表達(dá)量。1.CCK-8對(duì)細(xì)胞毒性的檢測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn),相同的作用時(shí)間,和空白對(duì)照組相比較,各濃度Res加藥組對(duì)CHMm細(xì)胞的抑制影響效果極顯著(p0.01)。相同Res作用濃度,培養(yǎng)48h與培養(yǎng)24h相比較,Res對(duì)細(xì)胞的抑制效果差異極顯著(p0.01)。Res對(duì)CHMm細(xì)胞的抑制呈現(xiàn)出明顯的時(shí)間與濃度依賴性。2.VEGF的檢測(cè)結(jié)果表明,和空白對(duì)照組相比,除10μM濃度加藥組的差異性不顯著(p0.05),其余組都隨著Res作用濃度的增加,VEGF含量降低效果極顯著(p0.01)。因此,低濃度的Res對(duì)犬乳腺腫瘤細(xì)胞分泌VEGF量影響較弱,中、高濃度的Res對(duì)VEGF的分泌量具有顯著抑制作用,呈濃度依賴性。3.HIF-1α的結(jié)果表明,與空白對(duì)照組相比較,隨著Res作用濃度增加,HIF-1α含量降低極顯著(p0.01)。因此,Res對(duì)犬乳腺腫瘤細(xì)胞分泌HIF-1α具有顯著抑制作用且隨Res作用濃度的增加抑制作用增強(qiáng),呈濃度依賴性。4.MMP-14結(jié)果表明,與空白對(duì)照組相比較,10μM、20μM、40μM濃度Res加藥組差異性不顯著(p0.05),而80μM、160μM濃度組的差異性極顯著(p0.01)。因此,低、中濃度的Res對(duì)犬乳腺腫瘤細(xì)胞分泌MMP-14含量沒有太大影響,只有高濃度的Res才會(huì)對(duì)MMP-14的分泌量產(chǎn)生顯著抑制效果。5.Notch相關(guān)因子mRNA表達(dá)結(jié)果表明,相同的作用時(shí)間,和空白對(duì)照組相比,各濃度Res給藥組的目的基因Notch1、Jagged1的mRNA表達(dá)量下調(diào)顯著(0.01p0.05),目的基因Hes-5、Dll4極顯著(p0.01)。6.Notch相關(guān)因子蛋白表達(dá)量的檢測(cè)結(jié)果表明,相同的作用時(shí)間,和空白對(duì)照組相比,各濃度Res給藥組的目的蛋白Notch1、Dll4及Hes-5的表達(dá)量下調(diào)顯著,但是Jagged組間的蛋白表達(dá)量的下調(diào)并不顯著。因此,Res是通過調(diào)控Notch通路的Notch1受體、Dll4配體及Hes-5靶基因的相對(duì)表達(dá)量來抑制腫瘤的血管生成。白藜蘆醇對(duì)犬乳腺腫瘤細(xì)胞具有增殖抑制作用,并通過對(duì)Notch通路相關(guān)因子基因和蛋白的表達(dá)來調(diào)控抑制細(xì)胞的血管再生。
【圖文】：

國(guó)悖理（French paradox）”現(xiàn)象，，首次揭示保護(hù)心血管作用的物質(zhì)。Jang 等（1997）系統(tǒng)起始、發(fā)展及促進(jìn)的三個(gè)階段內(nèi)都起著顯著的熱門，學(xué)者們進(jìn)一步地驗(yàn)證了其對(duì)鼠的乳腺癌胞都具有顯著的抑制效果。性質(zhì)-5-trihydroxystilbene）化學(xué)名稱為（E）-3，5子量為 228.25，純化樣品的外觀為無色的針狀8℃，達(dá)到 260℃即可發(fā)生升華，使用 365nm以和三氯化鐵-鐵氫化鉀產(chǎn)生顯色的反應(yīng)，因。自然界內(nèi)的白藜蘆醇主要以 4 種形式存在：醇，若是受到紫外光的照射，白藜蘆醇苷反式，存在于植物內(nèi)的白藜蘆醇是以穩(wěn)定的反式糖子式如圖 1-1 所示。

p<0.05Note: compared with the control group, **p<0.01， *p<0.05圖2-1a 不同濃度Res對(duì)細(xì)胞抑制率的影響Fig 2-1a Effects of different concentrations of Res for cell inhibitory rate注：相同培養(yǎng)時(shí)間，與對(duì)照組相比**p<0.01，*p<0.05Note: compared with the control group, **p<0.01， *p<0.05各組別 24h 48h0μM 0.530±0.014 0.626±0
【學(xué)位授予單位】：沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：S858.292

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2596053