【摘要】：羊口瘡(ORF)是由副痘病毒屬的傳染性膿皰病毒引起的,該病傳染性強(qiáng),常呈群發(fā)性流行,在病畜唇鼻等無毛部位隨發(fā)病經(jīng)過依次形成丘疹、水泡、膿皰,最后形成疣狀結(jié)痂,產(chǎn)生增生性損傷,羔羊由于其自身免疫系統(tǒng)不健全,尤其易感易發(fā),發(fā)病后采食困難,難以充分?jǐn)z入營養(yǎng),嚴(yán)重影響羔羊生長發(fā)育,最終機(jī)體缺乏營養(yǎng)物質(zhì),饑餓至死。同一宿主可被羊口瘡病毒反復(fù)感染,可繼發(fā)性感染傳染性胸膜肺炎、結(jié)膜炎等,繼發(fā)感染使死亡率增加數(shù)倍。且在無癥狀山羊血液中也能夠檢測到ORFV,從受感染的山羊的血液中獲得的ORF病毒具有感染性并且在接種未感染的奶山羊后誘發(fā)典型的傳染性膿皰性皮炎癥狀,表明無癥狀動物也可以是ORFV的攜帶者。嶗山奶山羊作為我國奶山羊的優(yōu)良品種之一,在山東膠東半島地區(qū)大量被養(yǎng)殖,近年羊口瘡在該地區(qū)多家養(yǎng)殖場發(fā)生,給山羊養(yǎng)殖造成巨大經(jīng)濟(jì)損失。但未了解該區(qū)羊口瘡的流行現(xiàn)狀,本研究以青島奧特羊場羊只為樣本,進(jìn)行羊口瘡分子病原學(xué)調(diào)查,將200只表觀健康的成年孕羊分為未免疫對照組100只,免疫試驗組100只,在免疫前分別采集抗凝血樣品,提取樣品中的DNA,利用本實驗室建立的PCR法檢測羊口瘡病原,進(jìn)行分子病原學(xué)調(diào)查;同時用實驗室分離的FX0910毒株在牛睪丸細(xì)胞上進(jìn)行增殖培養(yǎng),用終濃度0.4%的甲醛溶液對病毒液進(jìn)行滅活;用滅活毒液接種細(xì)胞,檢測病毒的滅活效果;制備轉(zhuǎn)移因子鋁膠鹽佐劑滅活疫苗;用10倍免疫量注射于健康羊來檢測滅活疫苗的安全性;對免疫試驗組羊只間隔14天進(jìn)行兩次免疫,與未免疫對照組同時,在一免及二免后的第14天采集抗凝血檢測羊口瘡病原;分別分離兩組血清,檢測中和抗體效價;在分娩季,分別采集兩組新生羔羊的臍帶血,檢測羊口瘡病原,測定疫苗免疫的保護(hù)效果。研究結(jié)果如下:1.免疫試驗組免疫前外周血樣品中羊口瘡病原檢出率為21%,二次免疫后外周血檢出率為4%;未免疫對照組前、后羊口瘡病原檢出率分別為17%、18%;2.免疫組在滅活疫苗免疫前、第一次免疫后和第二次免疫后中和抗體效價分別為1:1.89、1:4.92、1:27.86;3.免疫試驗組臍帶血檢出率為0,未免疫對照組臍帶血檢出率為9.7%。結(jié)論:1.通過本研究摸清了所調(diào)查羊場羊群羊口瘡病原的帶毒狀況,檢測統(tǒng)計了無臨床癥狀羊只的病原檢出率;2.制備并檢測了羊口瘡轉(zhuǎn)移因子鋁膠鹽佐劑滅活疫苗,證明滅活疫苗安全可靠;3.用羊口瘡滅活疫苗免疫懷孕山羊后,能顯著提高孕羊體內(nèi)抗體水平,同時能夠降低羊只帶毒率,表明疫苗具有清除病原、降低羊只病原攜帶率的作用,說明該疫苗能有效的預(yù)防和治療羊口瘡;4.免疫組較未免疫組新生羔羊病原檢出率明顯降低,表明免疫羊口瘡滅活疫苗后對病原有清除作用,對新生羔羊具有一定的免疫保護(hù)作用。
【圖文】：

反應(yīng)步驟Reaction steps反應(yīng)溫度(℃)Reaction temperature反應(yīng)時間 循環(huán)次數(shù)Reaction time Cycle index1 94 5 min 12 94 30 s 3456 30 s72 35 s3 72 10 min 14 4 Forever.3 檢測統(tǒng)計結(jié)果與分析做好檢測結(jié)果記錄，統(tǒng)計羊口瘡病原檢出率。.3.1 抗凝血樣品檢測結(jié)果將采自青島奧特羊場的表觀正常孕羊的抗凝血樣全部進(jìn)行羊口瘡病原檢測(P果如圖 2-1 所示 2~12 為被檢測抗凝血樣品)，并與國內(nèi)不同地區(qū)分離的羊口瘡的細(xì)胞毒 PCR 檢測結(jié)果進(jìn)行比較(如圖 2-2 所示)，B2L 基因的擴(kuò)增目的條帶一條帶大小都是 540bp，，表明樣品檢測結(jié)果確為羊口瘡病毒陽性。

檢測統(tǒng)計結(jié)果凝血 PCR 檢測的結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計。結(jié)果顯示，200 只羊總檢出免疫試驗組兩個組免疫前檢出率分別為 17%、21%，具體情暴發(fā)過羊口瘡病后，康復(fù)羊或表觀正常的羊可處于帶毒狀態(tài)體內(nèi)依舊存在，仍具有暴發(fā)該病的威脅。表 2-1 免疫前樣本病原檢出率統(tǒng)計表Chart 2-1 Statistical table of pathogen detection rate before immuniz未免疫組采 集 數(shù) /只Samples免 疫 組采集數(shù)/只Samples未免疫組陽性數(shù)/只Positivesamples of免疫組陽性數(shù)/只Positivesamples未 免 疫陽 性 檢率%Positive圖 2-2 不同地區(qū)分離羊口瘡病毒擴(kuò)增細(xì)胞毒 B2L 基因 PCR 檢測ig.2-2 Detection results for orf virus from different parts of China of B2LgM: DNAMarker DL500，1 楊凌、2 榆林、3 陰性對照、4 青島、5 石林: DNAMarker DL500,1 Yangling, 2 Yulin, 3 Negative controls, 4 QingdaHengshan
【學(xué)位授予單位】：西北農(nóng)林科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：S858.27

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2595800