【摘要】：禽安卡拉病是由Ⅰ群禽腺病毒血清4型(Fowl Adenovirus serotype 4,FAdV-4)引起的一種急性傳染病。1987年,該病在巴基斯坦伊斯蘭共和國(guó)的安卡拉(Ankara)地區(qū)首次被報(bào)道,因此就被命名為安卡拉病。該病以心包積液和肝臟多灶性壞死為主要病理特征,所以,安卡拉病通常也被稱為心包積水-肝炎綜合癥(Hydropericardium-Hepatitis Syndrome,簡(jiǎn)稱為HHS)。近幾年該病正流行于全國(guó)各地,對(duì)我國(guó)養(yǎng)禽業(yè)的健康發(fā)展造成了很嚴(yán)重的影響。為了更好地了解禽安卡拉病在遼寧地區(qū)的分子流行情況,自2016年以來(lái),本實(shí)驗(yàn)室采集了遼寧省沈陽(yáng)、撫順、鞍山地區(qū)疑似FAdV-4感染的11批次病死家禽和野禽的肝臟病料,對(duì)其進(jìn)行陽(yáng)性檢測(cè)和Hexon基因的遺傳進(jìn)化分析,試驗(yàn)內(nèi)容及結(jié)果如下:1.根據(jù)FAdV-4六鄰體蛋白(Hexon)基因設(shè)計(jì)特異性引物,對(duì)疑似患有安卡拉病的家禽和野禽肝臟組織DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增后,均在954 bp處出現(xiàn)目的基因片段。通過(guò)與GenBank中的參考毒株序列進(jìn)行遺傳進(jìn)化分析,證實(shí)了這些家禽和野禽都感染上了FAdV-4。2.對(duì)遼寧省鞍山、撫順、沈陽(yáng)的家禽肝臟病料和森林野生動(dòng)物園的鷲珠雞肝臟病料按照常規(guī)的方法處理后,接種9日齡SPF雞胚。結(jié)果顯示,當(dāng)雞胚接種7d后解剖均出現(xiàn)生長(zhǎng)緩慢、蜷縮等特征。收集SPF雞胚的尿囊液進(jìn)行血凝試驗(yàn),唯有鞍山株SPF雞胚的尿囊液能夠凝集大鼠紅細(xì)胞。3.根據(jù)FAdV-4六鄰體蛋白(Hexon)基因設(shè)計(jì)全基因特異性擴(kuò)增引物,對(duì)遼寧省撫順、鞍山、沈陽(yáng)的家禽肝臟病料和森林野生動(dòng)物園的鷲珠雞的肝臟病料進(jìn)行Hexon全基因擴(kuò)增,結(jié)果顯示,5份病料均在2889 bp處出現(xiàn)目的條帶。本研究課題擴(kuò)增出的Hexon全基因序列的開放閱讀框長(zhǎng)度為2814 bp,約編碼937個(gè)氨基酸,并對(duì)Hexon全基因進(jìn)行系統(tǒng)發(fā)育及同源性的分析。本試驗(yàn)分離出的5株分離毒株相互之間的差異與GenBank上已錄入的國(guó)內(nèi)參考毒株之間的差異相同,核苷酸同源性在99.8%-100%之間,與國(guó)外各國(guó)家的參考毒株的核苷酸同源性在96.9%-99.8%之間;與國(guó)內(nèi)參考毒株的氨基酸同源性為99.6%-100%,與國(guó)外各國(guó)家的參考毒株的氨基酸同源性在96.4%-99.5%之間,說(shuō)明有很強(qiáng)的保守性。根據(jù)系統(tǒng)發(fā)育樹的結(jié)構(gòu)圖可以看出,5株分離毒株與國(guó)內(nèi)的分離毒株都在同一個(gè)分支上,而且與國(guó)外的印度分離毒株也屬于同一個(gè)分支,即與印度的毒株相距最近,而與美國(guó)的毒株相距最遠(yuǎn)。4.應(yīng)用DNASTAR生物信息學(xué)軟件對(duì)六鄰體蛋白進(jìn)行抗原表位的分析與預(yù)測(cè),在55-66、162-168、266-275、400-407、560-570、765-774、788-804、874-885和913-919的區(qū)段可能是六鄰體蛋白潛在的抗原優(yōu)勢(shì)表位,而發(fā)生氨基酸變異的位點(diǎn)如鷲珠雞(FAdV-4_Shenyang_Acr.*)毒株中的第406位、鞍山(FAdV-4_Anshan_gallus*)毒株中的第773位和第880位都包含在這些可能潛在的抗原優(yōu)勢(shì)表位區(qū)域中。通過(guò)對(duì)Hexon六鄰體全基因的克隆與全基因遺傳進(jìn)化分析,了解毒株的變異趨勢(shì),對(duì)于掌控致病性和毒力都具有非常重要的意義,也為今后深入研討Ⅰ群禽腺病毒的疫苗奠定理論基礎(chǔ),尋找一種相對(duì)優(yōu)勢(shì)的抗原對(duì)于禽腺病毒的診斷也有很重要的意義。
【圖文】：

前言DS）相關(guān)的一類病毒，能從鵝、鴨、雞的體內(nèi)分離而獲得大，其中一部分含有Ⅰ群腺病毒的共同抗原（殷震和劉景華1997）。結(jié)構(gòu)及特點(diǎn)囊膜，病毒粒子呈二十面體結(jié)構(gòu)，直徑在 80-110 nm 之間 60-65 nm 的髓芯，由排列在三角形面上的 252 個(gè)殼粒組成形狀。整個(gè)病毒粒子含蛋白 87%，含核酸 13%。病毒顆粒，并排列成晶格狀。病毒核酸是單分子、線狀、雙鏈的 D兩端含有 100-140 bp 的末端反向重復(fù)序列（ITR）。一般感對(duì)分子質(zhì)量為 20-25×106，G+C 含量為 48%-61%。感染鳥量為 30×106，，G+C 含量為 54%-55%。腺病毒粒子結(jié)構(gòu)如圖匯圖網(wǎng)。

均在 954 bp 的片段處出現(xiàn)明亮的核酸特異性條帶，與預(yù)期大小一致。家禽的 Hexon 基因片段 PCR 擴(kuò)增結(jié)果如圖2 所示（撫順株命名為撫順 1，撫順市新賓滿族自治縣株命名為撫順 2，下同）；野禽的 Hexon 基因片段 PCR 擴(kuò)增結(jié)果如圖 3 所示。圖 2 家禽的 Hexon 基因片段 PCR 擴(kuò)增結(jié)果Fig.2 the PCR amplification result of poultry Hexon gene fragment注：M:DL2000 marker 1:撫順 1 2:撫順 2 3:沈陽(yáng) 4:鞍山Note: M:DL2000 marker 1.Fushun1 2:Fushun2 3:Shenyang 4:Anshan圖 3 野禽的 Hexon 基因片段 PCR 擴(kuò)增結(jié)果Fig.3 the PCR amplification result of wild fowl Hexon gene fragment注：M:DL2000 marker 1:鷲珠雞 2:天鵝 3:斑頭雁 4:鴕鳥 5:鴿子 6:白孔雀 7:藍(lán)孔雀Note: M:DL2000 marker 1:Acryllium vulturinum 2: Cygnus 3:Anser indicus 4: Struthio camelus5: Columba 6:white peacock 7:blue peahe
【學(xué)位授予單位】：沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：S852.65

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前9條

1 李海英;尹燕博;徐守振;王建琳;王曉紅;王守春;;Ⅰ群禽腺病毒12個(gè)血清型毒株Hexon蛋白全基因序列測(cè)定和酶切位點(diǎn)分析[J];中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào);2012年01期

2 羅思思;謝芝勛;劉加波;龐耀珊;鄧顯文;謝志勤;謝麗基;;Ⅰ群禽腺病毒Hexon蛋白的截短表達(dá)與鑒定[J];基因組學(xué)與應(yīng)用生物學(xué);2011年05期

3 黎明;于天飛;;DNAStar軟件在動(dòng)物病毒研究中的應(yīng)用實(shí)例[J];高師理科學(xué)刊;2010年03期

4 范晴;謝芝勛;劉加波;龐耀珊;鄧顯文;謝志勤;謝麗基;彭宜;;牛病毒性腹瀉病毒RT-LAMP檢測(cè)方法的建立[J];生物技術(shù)通訊;2010年02期

5 唐熠;謝芝勛;熊文婕;劉加波;龐耀珊;鄧顯文;謝志勤;謝麗基;;PCR-RFLP技術(shù)對(duì)Ⅰ群禽腺病毒12個(gè)血清型毒株的分型鑒定[J];中國(guó)獸醫(yī)科學(xué);2009年10期

6 唱?jiǎng)P;李賢龍;賈延輝;徐澤剛;李晉濤;;T細(xì)胞抗原表位預(yù)測(cè)的研究方法進(jìn)展[J];生物學(xué)雜志;2009年01期

7 文艷玲;謝芝勛;王瑩;謝麗基;;Ⅰ群禽腺病毒SYBR GreenⅠ熒光PCR檢測(cè)方法的建立[J];中國(guó)獸醫(yī)科學(xué);2008年09期

8 張立國(guó),張琚;實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)的介紹[J];生物技術(shù);2003年02期

9 陳溥言;禽腺病毒Ⅰ型(雞胚致死孤兒病毒)在非免疫雞胚中隱性感染可能已經(jīng)嚴(yán)重危害到我國(guó)疫苗生產(chǎn)[J];畜牧與獸醫(yī);2002年06期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前1條

1 何秀苗;禽腺病毒載體的構(gòu)建及其生物學(xué)特性的研究[D];揚(yáng)州大學(xué);2004年

本文編號(hào)：2593921